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不同耐药型的结核分枝杆菌hspX基因序列与表达的比较
编辑人员丨2023/8/5
目的 比较不同耐药型的结核分枝杆菌(MTB)热休克蛋白基因hspX序列与表达,初步探讨hspX与MTB的耐药是否存在相关性.方法 选取 4 种一线抗结核药物全部敏感株(S)、同时对异烟肼和利福平耐药(MDR)和一种耐药[单耐利福平(MTBR+)、单耐异烟肼(MTBH+)、单耐链霉素(MTBS+)和单耐乙胺丁醇(MTBE+)]的菌株各 10 株,采用改良的十二烷基苯磺酸钠裂解法和TRIzol法分别提取各组菌株的DNA和RNA,使用特异性引物进行PCR和实时荧光定量PCR确定hspX基因的存在及其表达.对 PCR 产物进行测序以检查正向和反向的多态性,并用DNAman软件进行与标准株H37Rv序列比对.以敏感菌株(S)组为对照组进行两两对比分析不同耐药型的MTB菌株hspX表达的差异.结果 PCR成功获得各组特异性的hspX基因,与H37Rv序列比对具有 97％～99％的同一性,无存在明显差异;以相对定量 2-ΔΔCt法计算获得S、MDR、MTBR+、MTBH+、MTBS+和MTBE+菌株hspX的表达分别为 0.98(0.89,1.23)、1.49(1.10,2.04)、1.41(0.55,2.80)、1.37(0.68,2.71)、0.91(0.59,1.62)和 0.70(0.48,1.18).以敏感菌株(S)组为对照组,不同耐药型菌株组与其比较,hspX表达差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 hspX基因在MTB中是保守的.在自然状态下,hspX基因在MTB的耐药性方面无明显相关性.
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编辑人员丨2023/8/5
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结核分枝杆菌休眠相关蛋白HspX的生物信息学分析、制备及对大肠埃希菌生长抑制探究
编辑人员丨2023/8/5
目的 分析HspX蛋白的基本性质及其编码基因对大肠埃希菌(E.coli)生长的影响,为将其作为结核病疫苗候选分子和临床检测生物标志物的可行性提供实验依据.方法 应用生物信息学方法分析HspX蛋白基本生化性质;构建原核重组表达载体并在E.coli中表达,用金属螯合层析法纯化HspX蛋白,观察该蛋白及其编码基因对宿主菌E.coli-BL21(DE3)和E.coli-DH5α生长的影响.结果 生物信息学分析HspX蛋白由144个氨基酸残基组成,相对分子质量为16.227 28×103,等电点为5.00;该蛋白无信号肽,含有14个磷酸化位点,为亲水性细胞壁蛋白.其在大肠埃希菌中以可溶性表达,经镍金属螯合填料一步纯化得到纯度为86.9％的重组蛋白.重组质粒(pET28a-Rv2031c)能显著抑制其表达宿主菌E.coli-BL21(DE3)的生长,但不会抑制其克隆宿主菌E.coli-DH5α的生长.结论 HspX蛋白能抑制E.coli-BL21(DE3)宿主菌的生长,其可能是结核分枝杆菌在宿主体内滞留发挥作用的效应物之一.
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编辑人员丨2023/8/5
