[目的]从结核分枝杆菌基因组DNA中克隆鼠李糖基转移酶基因 (rhamnosyl transferase, wbbL),并利用pET16b表达载体在大肠杆菌BL21(DE3) 菌株中高效表达wbbL基因产物-鼠李糖基转移酶.[方法]利用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv菌株的基因组DNA中扩增出wbbL基因 (906 bp) 并克隆到pMD18-T克隆载体中,经DNA序列测定证实为正确的基因后,将其亚克隆到表达载体pET16b中并在大肠杆菌BL21(DE3) 中表达wbbL基因产物.[结果] 1) 从结核分枝杆菌H37Rv菌株的基因组DNA中PCR扩增出正确的wbbL 基因; 2) 经IPTG诱导wbbL基因在BL21(DE3) 中高效表达出wbbL 基因产物.[结论] 1) 用具高保真性的LA Taq DNA 聚合酶所扩增的结核分枝杆菌的wbbL 基因经BLAST分析与结核分枝杆菌基因组数据库 (http://www.sanger.ac.uk) 中所公布的序列完全一致;2) 从大肠杆菌BL21(DE3) 所获得的大量鼠李糖基转移酶,为进一步纯化该酶并研究其酶促反应动力学特性提供了物质保障.
作者：张果；孙荪；梁明珠；王超；王冠；葛新；邬强；马郁芳
来源：大连医科大学学报 2004 年 26卷 4期
