目的:探讨人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP-SA3)的融合表达、纯化、复性及其体内靶向性.方法:将SA3,EGFP基因,插入pET-25b(+),构建EGFP-SA3/pET-25b(+)原核表达载体,测序鉴定后转化大肠杆菌BL21 (DF3)；IPTG诱导融合蛋白EGFP-SA3的表达,复性、纯化后经SDS-PAGE鉴定；EGFP-SA3与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的结合作用；然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3的体内靶向作用.结果:SA3,EGFP基因分别插入载体pET-25b(+)后,重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)分别行NcoI-Xho I和Nco I-Eco RI双酶切,结果发现在750 bp左右出现一条带,与EGFP基因大小一致,在1.5 kb左右处出现一条带,与EGFP和SA3两个基因片段的总大小一致,DNA测序结果证实融合表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)构建成功；重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示融合蛋白EGFP-SA3分子质量为58 kD,主要以包涵体的形式存在；纯化、复性后,免疫荧光检测结果显示SA3与HepG2细胞能特异性地靶向结合；注射了EGFP-SA3的荷肝癌小鼠的肿瘤部位有绿色荧光发出,显示EGFP-SA3具有良好的肿瘤特异性.结论:融合蛋白EGFP-SA3与HepG2细胞有较强的结合能力,单链抗体SA3有望用于肝癌

作者：黄建；李跃辉；郭锋杰；童永清；王甲甲；胡锦跃；李官成

来源：中南大学学报（医学版） 2011 年 36卷 10期