目的 制备天然和重组肝素结合血凝素(HBHA)蛋白,探讨其在结核杆菌感染诊断中的应用价值.方法 用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37 Rv基因组扩增出HBHA基因片段.结核分枝杆菌HBHA基因克隆至PQE80L克隆表达载体中,序列测定正确后,将其转化到大肠埃希菌BL-21中,再经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达HBHA蛋白,表达蛋白经SDS-PAGE及免疫印迹法分析后,亲和层析法纯化蛋白,并以此免疫新西兰兔制备多克隆抗体.同时将7H9液体培养基中的卡介苗(BCG)培养至稳定生长期,用CL-6B层析柱分离纯化HBHA蛋白.观察抗体对不同浓度天然HBHA和重组HBHA诱导BCG聚集效应的影响.结果 所得天然和重组HBHA蛋白均有诱导BCG聚集的作用,并均可被多克隆抗体抑制.结论 成功获得天然HBHA和重组HBHA蛋白；证实了两者均具有促进BCG聚集的功能,并可被由重组HBHA诱导产生的多克隆抗体所抑制.从而为进一步研究HBHA的临床诊断价值提供了实验依据.
作者：周珊；徐修礼；马越云；刘家云；樊新；孙怡群；郝晓柯
来源：检验医学 2011 年 26卷 12期
