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目的:鉴定来源于宇佐荚曲霉(Aspergillus usamli)E001的酸性木聚糖酶Xyn Ⅱ活性中心关键氨基酸残基.方法:对Xyn Ⅱ进行SWISS-MODEL同源建模和BLAST序列比较,分析Xyn Ⅱ中所有可能作为催化残基的保守氨基酸,采用定点突变手段对其进行鉴定研究.结果:只有Glu-79和Glu-170位于酶与底物作用的活性中心,它们分别位于β折叠股B6和B4上,推测Glu-79和Glu-170为Xyn Ⅱ活性中心关键氨基酸残基.将Glu-79和Glu-170突变为酸性的Gln,突变酶E79Q,E170Q在大肠杆菌和毕赤酵母中表达后,活性均丧失.结论:79位、170位Glu是木聚糖酶Xyn Ⅱ活性中心的关键氨基酸残基,为该酶进一步的结构与功能研究提供了理论基础.

作者:周晨妍;符丹丹;丰慧根;邬敏辰;王武

来源:生物技术 2010 年 20卷 2期

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作者:
周晨妍;符丹丹;丰慧根;邬敏辰;王武
来源:
生物技术 2010 年 20卷 2期
标签:
酸性木聚糖酶 宇佐美曲霉 定点突变 活性中心 acidic xylanase Aspergillus usamii site - directed mutagenesis catalytic domain
目的:鉴定来源于宇佐荚曲霉(Aspergillus usamli)E001的酸性木聚糖酶Xyn Ⅱ活性中心关键氨基酸残基.方法:对Xyn Ⅱ进行SWISS-MODEL同源建模和BLAST序列比较,分析Xyn Ⅱ中所有可能作为催化残基的保守氨基酸,采用定点突变手段对其进行鉴定研究.结果:只有Glu-79和Glu-170位于酶与底物作用的活性中心,它们分别位于β折叠股B6和B4上,推测Glu-79和Glu-170为Xyn Ⅱ活性中心关键氨基酸残基.将Glu-79和Glu-170突变为酸性的Gln,突变酶E79Q,E170Q在大肠杆菌和毕赤酵母中表达后,活性均丧失.结论:79位、170位Glu是木聚糖酶Xyn Ⅱ活性中心的关键氨基酸残基,为该酶进一步的结构与功能研究提供了理论基础.

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