目的 初步探讨耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis毒素抗毒素(toxin antitoxin,TA)系统基因的功能及其在细菌药物耐受中的作用.方法 利用无水四环素(ATc)诱导穿梭质粒构建毒素基因(MSMEG_3436和MSMEG_6760)表达系统,检测毒素基因表达的抑菌作用.应用CRISPR-Cas12a基因编辑技术构建△MSMEG_3435-3436和△MSMEG_ 6762-6760敲除菌株,探究毒素抗毒素系统对菌株生长的影响.通过计算菌株存活率检测MSMEG_3435-3436基因对异烟肼(96 μg/ml)和利福平(40 μg/ml)的耐受相关性.在耻垢分枝杆菌中用LacZ报告基因分别替换毒素抗毒素基因(MSMEG_1277-1278、MSMEG_1283-1284、MSMEG_3435-3436、MSMEG_4447-4448和MSMEG_5635-5634),构建5个启动子活性检测突变菌株(SY3328、SY3309、SY6407、SY3310和SY3311),并将pMV261空载体和pMV261抗毒素系列质粒分别电转至5个突变菌株中,通过测定吸光度值(A600、A550和A420)计算β-半乳糖苷酶活性[酶活性单位为“Miller单位(MU)”],以检测毒素抗毒素系统的启动子活性.结果 在耻垢分枝杆菌中,ATc诱导表达毒素基因MSMEG_ 3436可抑制细菌生长,而同时表达对应的抗毒素基因MSMEG_ 3435可消除抑制作用;ATc诱导表达毒素基因MSMEG_ 6760未发现明显的抑菌作用.与野生株相比,△MSMEG_ 3435-34

作者：张蓝月；耿艺漫；贾红彦；肖婧；李自慧；潘丽萍；孙义成；张宗德

来源：中国防痨杂志 2020 年 42卷 2期