目的 体外扩增结核杆菌Ag85B基因,构建大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒ps3000-Ag85B,并重组耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2155). 方法 采用聚合酶链式反应(PCR)方法,体外扩增结核杆菌Ag85B基因,克隆入pGEMT载体;构建亚克隆ps3000-Ag85B大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭质粒,电转化方法将有Ag85B基因的穿梭质粒转化到耻垢分枝杆菌中.热诱导此重组耻垢分枝杆菌,用SDS-PAGE电泳观察Ag85B蛋白的表达,Western blot鉴定其生物学活性. 结果 PCR扩增结核杆菌Ag85B基因片段大小为990 bp,构建的穿梭质粒ps3000-Ag85B酶切片段为990 bp,与理论值相符.经Western blot检测,该重组耻垢杆菌表达蛋白能被结核病患者血清识别. 结论 Ag85B重组耻垢分枝杆菌构建成功,为下一步表达Ag85B蛋白的重组BCG(Bacilli Calmette-Guérin)疫苗的研究奠定了基础.
作者：李晓恒；吴少庭；付小强；甘燕；王芳；雷蕾
来源：中国病原生物学杂志 2008 年 3卷 10期
