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目的:颗粒酶B(Granzyme B,GraB)对核内物质具亲和力,体外除去核膜的细胞核中可观察到大量GraB聚积,观察GraB是否直接作用于基因组DNA.方法:通过抽提人外周血淋巴细胞总RNA,进行RT-PCR克隆GraB cDNA,构建GraB原核表达载体,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定;异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达产物.表达产物经亲和层析纯化后,观察其对基因组DNA的功能.结果:表达产物以可溶性分子形式存在于菌体中,具有良好的抗原性和特异性,特异性底物检测有活性,且具有直接作用于部分断裂的基因组DNA,使其发生进一步裂解的活性.结论:GraB直接作用于部分断裂的基因组DNA,这可能是GraB诱导细胞凋亡新的作用途径.
作者：李先茂；曾位森；张亚历
来源：中国免疫学杂志 2003 年 19卷 12期
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