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目的 对结核分枝杆菌的一种热休克蛋白Hsp70基因进行克隆,鉴定,并在原核系统中表达.方法 以结核杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板,用PCR法对基因Hsp70进行扩增,产物与载体质粒pET-22b(+)构建表达Hsp70的重组质粒,将此重组质粒先转化到E.coli DH5 α内提取质粒,酶切鉴定,再转化入表达宿主E.coli BL21(DE3)PlysS菌株内,对转化菌株以IPTG进行诱导后,破菌,离心,上清进行SDS-PAGE,通过电转移将胶中蛋白转到硝酸纤维素薄膜上后进行免疫印迹分析.结果 电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,所表达的蛋白质相对分子质量为70 000,抗体检测有特异带大小为70kDa.结论 成功进行了结核杆菌分泌热休克蛋白Hsp70基因的克隆表达.
作者：苏洁；蔡宏；朱玉贤
来源：中国人兽共患病学报 2006 年 22卷 8期
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