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目的 构建高效表达菌株,以大量表达结核分枝杆菌AftA蛋白,为后续的抗结核药物的筛选奠定基础.方法 采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出AftA的基因片段,将其插入原核表达质粒PQE30,构建重组质粒PQE30-aftA.将PQE30-aftA转化大肠杆菌,用IPTG诱导目的基因表达.Western-blotting免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物.结果 经核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功构建了重组质粒PQE30-aftA.在大肠杆菌M15中用IPTG诱导表达后,获得了AftA蛋白.蛋白经SDS-PAGE分析约为69.5kD.免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应.结论 成功制备出重组的AftA蛋白,为新型抗结核药物的筛选奠定了物质基础.
作者：王爽；朱道银；帖儒修；李娜；王渝伟
来源：中国人兽共患病学报 2008 年 24卷 5期
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