目的 通过生物信息学软件预测结核分枝杆菌Rv3529c基因编码蛋白的结构和功能,并对其进行原核表达.方法 利用 UniproKB 数据库、PredictProtein 服务、AlphaFold 系统、SWISS-MODEL 服务、ProtParam 蛋白分析工具、ProtScale、DeepTMHMM服务和SignalP-5.0服务、ProtCompB方法、IEDB数据库和STRING数据库等生物信息学预测软件对Rv3529c编码蛋白的二级和三级结构、理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、亚细胞定位及免疫表位进行分析预测.利用分子克隆技术构建表达质粒载体pET-32a-Rv3529c并进行原核表达,运用UniprotKB数据库的Blast工具对氨基酸序列进行比对,采用MEGA 11软件构建进化树,进行系统进化分析,运用STRING数据库分析蛋白间相互作用.结果 Rv3529c基因全长1 155 bp,共编码384个氨基酸.Rv3529c基因编码蛋白分子量为43.35 kDa,等电点为6.04,二级结构以 螺旋为主,该蛋白为稳定的亲水性蛋白,无跨膜区、无信号肽,预测该蛋白亚细胞定位在细胞质中或细胞膜上,存在多个抗原抗体表位,与多个蛋白质有相互作用.经克隆、表达、鉴定、纯化后获得浓度和纯度较高的Rv3529c蛋白.结论 成功克隆、表达、纯化结核分枝杆菌Rv3529c蛋白,并初步预测其结构及功能.
作者：陈瑞枫；王瑄；马枫茜；李祥芳；丁寿鹏；吴利先
来源：中国感染控制杂志 2023 年 22卷 6期
