目的:检测胃癌组织中三结构域蛋白59（TRIM59）、核因子抑制蛋白（IκBα）表达情况，并分析两者与患者化疗效果和预后的关系。方法:选取2020年1月至2023年1月于嘉兴学院附属第二医院行手术治疗的胃癌患者103例，选取手术切除的距离癌组织边缘>2 cm的癌旁组织作为对照。比较胃癌组织、癌旁组织TRIM59、IκBα表达。经Pearson相关性分析法分析胃癌组织中TRIM59、IκBα表达的相关性。所有患者化疗3个周期后根据化疗效果分为耐药组、敏感组。比较耐药组、敏感组一般资料及胃癌组织TRIM59、IκBα表达。经Logistic回归模型分析胃癌化疗效果的影响因素；绘制Kaplan-Meier曲线分析胃癌组织TRIM59、IκBα表达与胃癌进展及生存的关系。计数资料表示为[例（%）]，用 χ2检验；K-S检验符合正态分布的计量资料以均数±标准差（ ± s）表示，组间比较用独立样本 t检验。 结果:免疫荧光实验显示，TRIM59和IκBα可在相同的细胞区域内观察到两种不同的荧光信号，表现为细胞核内的共定位；胃癌组织的TRIM59表达水平高于癌旁组织（17.39±4.04比8.35±2.05， t＝20.251， P<0.01）；胃癌组织的IκBα表达水平高于癌旁组织（15.40±3.82比7.16±1.97， t＝19.457， P<0.01）。Pearson相关性分析显示，胃癌组织中TRIM59、IκBα表达呈正相关（ r＝0.341， P<0.01）；Logistic回归分析显示，年龄、TNM分期Ⅲ/Ⅳ期、未/低分化、TRIM59表达、IκBα表达是胃癌患者化疗效果的影响因素（ P<0.05）；耐药组胃癌组织的TRIM59表达水平高于敏感组组织（19.35±3.47比14.42±2.96， t＝7.473， P<0.01）；耐药组胃癌组织的IκBα表达水平高于敏感组组织（17.21±3.19比12.65±3.04， t＝7.234， P<0.01）。103例胃癌患者失访15例，其余88例随访8～39个月，将胃癌组织中TRIM59、IκBα表达高于中位值的分为高TRIM59表达、高IκBα表达，低于中位值的分为低TRIM59表达、低IκBα表达。高TRIM59表达的中位无进展生存期（PFS）短于低TRIM59表达[24（22，25.5）个月比39（28，50）个月， χ2＝6.885， P<0.05]；高IκBα表达的PFS短于低IκBα表达[24（17.5，30.5）个月比33（20，39）个月， χ2＝7.145， P<0.05]；高TRIM59表达的中位总生存期（OS）短于低TRIM59表达[33（20，46）个月比38（36，40）个月， χ2＝4.340， P<0.05]；高IκBα表达的OS短于低IκBα表达[30（19.5，40.5）个月比38（36，40）个月， χ2＝7.283， P<0.05]。 结论:胃癌组织中TRIM59、IκBα表达升高，表达水平为正相关，且两者均与胃癌化疗效果及预后密切相关。

探讨白细胞介素6（IL-6）、降钙素原（PCT）、T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞上TIGIT（T淋巴细胞免疫球蛋白及免疫受体酪氨酸抑制基序结构域）表达在克罗恩病状态评估中的应用。采用横断面研究，选取2020年6月至2022年12月在江西中医药大学附属医院就诊的克罗恩病确诊患者119例，年龄范围为18~59岁，中位数年龄（四分位数间距）为37（29，45）岁，其中疾病活动组57例（男性30例，女性27例），疾病缓解组62例（男性33例，女性29例）；另选同院同期健康对照组50名（男性27名，女性23名），年龄范围19~60岁，中位数年龄（四分位数间距）为38（31，46）岁。流式荧光微球法检测IL-6水平，利用免疫层析技术检测PCT浓度，利用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群及TIGIT水平。比较各组检测指标之间的差异及相关性，logistic回归分析克罗恩病进展的影响因素，ROC曲线分析各检测指标的临床意义。结果显示，对照组、缓解组、活动组之间年龄、性别差异均无统计学意义（ H=1.422， χ2=0.020； P=0.491， P=0.990）；活动组中IL-6为17.55（9.67，21.72）pg/ml、PCT为0.38（0.14，0.43）ng/ml、CD3 +CD4 +为35.47%±6.01%、CD3 +CD8 +为30.50%±5.20%、TIGIT为25.08%±6.30%；缓解组中IL-6为8.46（5.21，10.04）pg/ml，PCT为0.26（0.11，0.35）ng/ml，CD3 +CD4 +为37.62%±4.86%，CD3 +CD8 +为28.30%±5.28%、TIGIT为34.22%±5.45%；对照组中IL-6为6.13（3.57，8.12）pg/ml，PCT为0.17（0.10，0.21）ng/ml，CD3 +CD4 +为39.74%±3.94%，CD3 +CD8 +为26.59%±4.50%，TIGIT为37.64%±6.22%。三组之间IL-6、PCT、CD3 +CD4 +%、CD3 +CD8 +%、TIGIT差异均有统计学意义（ H=58.688， H=18.003， F=9.600， F=8.124， F=65.059； P<0.001， P<0.001 ，P<0.001， P<0.001， P<0.001），其中活动组中IL-6、TIGIT与缓解组比较差异有统计学意义（ P<0.001， P<0.001），缓解组与对照组中仅TIGIT比较差异有统计学意义（ P=0.007）；Spearman相关性分析表明TIGIT表达与IL-6水平为负相关；logistic回归分析结果显示IL-6、PCT、TIGIT为克罗恩病进展的独立影响因素；ROC曲线比较活动组及缓解组AUC面积发现，TIGIT与PCT、CD3 +CD4 +、CD3 +CD8 +比较差异均有统计学意义（ Z=4.011， Z=4.091， Z=4.157； P<0.001， P<0.001， P<0.001），IL-6比较差异无统计学意义（ Z=1.193， P=0.233）；选取AUC及约登指数最佳的IL-6及TIGIT联合检测，显示临床价值提升，IL-6+TIGIT与IL-6的AUC面积比较差异有统计学意义（ Z=2.674， P=0.008）。综上，T淋巴细胞TIGIT、IL-6检测在克罗恩病诊疗中可能有价值，且TIGIT与IL-6联合检测，可能对评估克罗恩病状态有意义。

目的 探讨三结构域蛋白59(tripartite motif containing 59,TRIM59)对下咽癌细胞Fadu的生物学行为的影响及其机制.方法 通过肿瘤免疫估计资源数据库2.0(TIMER2)了解TRIM59在不同类型癌症中的表达情况,初步评估其在头颈部肿瘤中的表达差异.培养下咽癌细胞株Fadu,随机分为:实验组(si-TRIM59-1组,si-TRIM59-2组,si-TRIM59-3组)和对照组(NC组).通过实时定量PCR法检测转染效率,选取转染成功且基因下调效率最高的两组进行后续实验.CCK-8实验、集落形成实验检测Fadu细胞增殖能力;Transwell实验、细胞划痕实验检测Fadu细胞迁移及侵袭能力;Western blot实验检测下调TRIM59后,TRIM59、JAK2/pJAK2、STAT3/pSTAT3、Bcl-2、Bax的表达;流式细胞术检测Fadu细胞凋亡率.结果 与NC组比较,实验组TRIM59 mRNA相对表达量下降(P＜0.001),其中,si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组下降更为明显(P＜0.05),因此,选取si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组进行后续实验.与NC组比较,si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组细胞增殖、迁移及侵袭能力均下降(P＜0.05).与 NC 组比较,si-TRIM59-1 组和 si-TRIM59-3 组 TRIM59、JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3 表达量降低(P＜0.05),凋亡相关蛋白中抑制蛋白Bcl-2表达量下降,而诱导蛋白Bax表达量则上升(P＜0.05).与NC组比较,si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组细胞凋亡率上升(P＜0.05).结论 下调TRIM59后,人下咽癌细胞株Fadu的增殖、迁移及侵袭能力下降,细胞凋亡率上升,其机制可能与JAK2/STAT3通路有关.

胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤,其发病率和死亡率在全球范围内均居前列.但胃癌的发病机制尚不完全清楚.因此,深入探索胃癌的发病机制具有重要意义.三结构域(TRIM)蛋白家族是一类以结构特征命名的蛋白质家族,能够参与蛋白质泛素化修饰、调控抑癌基因p53表达、促进炎症信号通路激活等生物学过程.研究发现,胃癌组织TRIM蛋白高表达,并且其表达强度与患者预后密切相关.这一发现为胃癌的早期诊断和靶向治疗提供了新的线索.TRIM蛋白家族在胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移等生物学过程中发挥重要作用.TRIM59、TRIM28、TRIM11、TRIM65、TRIM38、TRIM62和TRIM10作为TRIM蛋白家族成员,在胃癌的分子诊断、预后评估和靶向治疗中具有广泛的应用前景.

目的 探讨三结构域蛋白59(TRIM59)、真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在非小细胞肺癌组织中的表达及对转移分化的预估价值.方法 选取非小细胞肺癌组织80 例、正常肺组织 80 例,qRT-PCR法、免疫组化法检测 2 种组织中TRIM59、EIF5A2 mRNA与蛋白表达情况.收集肺癌患者临床资料,根据其是否出现转移分化进行分组:转移分化组、未转移分化组,分析其出现转移分化的影响因素.绘制ROC曲线分析TRIM59、EIF5A2 表达对肺癌患者转移分化的预估价值.结果 NSCLC组织中TRIM59、EIF5A2 mRNA表达水平高于正常组织,TRIM59、EIF5A2 蛋白高表达率高于正常组织(P<0.05).转移分化组与未转移分化组患者之间的TRIM59、EIF5A2 蛋白表达情况、肿瘤分化程度差异有统计学意义(P<0.05),TRIM59、EIF5A2 蛋白高表达和肿瘤低分化为NSCLC肿瘤转移分化的危险因素.NSCLC组织中TRIM59 联合EIF5A2 蛋白表达水平预估肿瘤转移分化的 AUC 以及特异度均明显高于单独检测.结论 TRIM59、EIF5A2 在非小细胞肺癌组织中的表达水平异常升高,是非小细胞肺癌转移分化的影响因素之一,且对其转移分化有一定预估价值.

目的 探讨心脏成纤维细胞(CFs) 生物表型多样性.方法 新生1～3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白(vimentin) 、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1) 和盘状结构域受体(DDR2) 的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况.结果 酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高. Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达.部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog + /CD73 + 共表达阳性率最高(59. 02％ ± 8. 39％) ,与其他3组相比差异均有极显著性(P＜0.01);而nanog + /CD90 + 共表达阳性率与nanog + /sca-1 + 之间差异无显著性(P＞0.05) ,但这两组与CD90 + /sca-1 + 相比差异均有极显著性(P＜0.01);CD90 + /sca-1 + 共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义(P＜0.01).结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性.

目的:探讨三结构域蛋白59(TRIM59)、蛋白激酶B(Akt)和基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)在肝细胞肝癌中的表达相关性及预后评价.方法:应用免疫组织化学方法回顾性分析TRIM59、Akt及MMP-9蛋白在98例肝癌组织中的表达状况,并分析各指标与临床病理参数之间的关系,应用Spear-man等级检验分析TRIM59与Akt、MMP-9的相关性.结果:肝癌组织中TRIM59、Akt及MMP-9蛋白阳性表达率分别是73.5％、65.3％、61.2％,均明显高于癌旁肝组织(P＜0.05).研究发现TRIM59、Akt及MMP-9蛋白表达与病理分级、包膜完整、肿瘤分化、血管侵犯和TNM分期明显相关(P均＜0.05).肝癌组织中TRIM59与Akt、MMP-9表达均呈正相关(P＜0.05),Akt和MMP-9表达也呈正相关(P＜0.05).生存分析表明,TRIM59可作为肝癌预后的一个独立性因素.结论.TRIM59、Akt和MMP-9在肝癌组织中明显高表达.TRIM59过表达与肝癌恶性进展和患者预后密切相关,提示TRIM59是肝癌患者的潜在治疗靶点.

目的 探讨三结构域蛋白59(TRIM59)、Twist基因和波形蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化检测TRIM59、Twist及波形蛋白在80例肝癌组织及50例癌旁组织中的表达情况,分析其与临床病理特征和生存率的关系.结果 肝癌组织中TRIM 59阳性表达率为76.3％(61/80),高于癌旁组织的8.0％(4/50)(P<0.05).肝癌组织中Twist阳性表达率为66.3％(53/80),高于癌旁肝组织的6.0％(3/50)(P<0.05).肝癌组织中波形蛋白阳性表达率为63.8％(51/80),高于癌旁组织的12.0％(6/50)(P<0.05).TRIM59、Twist和波形蛋白的表达与病理分级、分化程度、血管侵犯及TNM分期密切相关(P<0.05).TRIM59的表达与Twist和波形蛋白呈正相关(rs=0.418和0.395,P<0.05),Twist的表达与波形蛋白呈正相关(rs=0.512,P<0.05).TRIM 59阳性表达和TRIM 59阴性表达患者3年生存率分别为42％ 和78％,5年生存率分别为38％ 和61％;TRIM 59阳性表达患者的累计生存率低于TRIM 59阴性表达患者(P<0.05).结论 肝癌组织中TRIM59、Twist及波形蛋白呈现高表达,与肿瘤的侵袭、转移及患者预后密切相关.

目的 用定点自旋标记-电子顺磁共振(SDSL-EPR)技术检测自噬相关蛋白LC3B功能结构域上特定氨基酸位点的运动特性.方法 采用序列重叠延伸PCR(SOE-PCR)法对LC3B蛋白NHD结构域α1螺旋Q9位点、ULD结构域α3螺旋N59位点以及口袋结构内部β1折叠I35位点引入半胱氨酸(cysteamine,Cys)突变,表达纯化获得LC3B突变体蛋白;甲烷硫代磺酸(2,2,5,5-tetramethyl-1-oxyl-3-methyl methanethiosulfonate,MTSL)自旋标记后进行电子顺磁共振(EPR)检测,通过计算EPR波谱旋转相关时间τc,分析不同氨基酸位点的运动特性.结果 构建了LC3B突变体基因的原核表达载体pET-22b-LC3B,实现了蛋白的可溶性高效表达;Q9C和N59C位点EPR波谱呈现双成分叠加谱,Q9C位点不同运动成分的τc值分别为1和3.8 ns,N59C位点为1和3.4 ns;I35C位点为三成分叠加谱,其τc值分别为0.7、2.9和8.1 ns.结论 存在于特定氨基酸位点的运动性差别,预示着溶液状态下LC3B蛋白各功能结构域的同一氨基酸位点处可能存在不同的构象特征.

目的 观察三结构域蛋白59(TRIM59)在人肝细胞癌(HCC)细胞中的表达变化,及其对细胞增殖和p53蛋白表达的影响.方法 选取6种HCC细胞系(Huh7、Hep3B、HepG2、SK-Hep1、BEL7402、SMMC7721)及人正常肝细胞系LO2为研究对象,采用qRT-PCR和Western blotting法分别检测细胞中的TRIM59 mRNA和蛋白,选择预实验中TRIM59 mRNA和蛋白表达水平相对较高的HCC细胞进行下一步实验.将HepG2细胞分为shTRIM59组和shControl组,shTRIM59组感染TRIM59慢病毒,shControl组转染TRIM59慢病毒阴性对照.将Huh7细胞分为pcD-NA3.1-TRIM59组和pcDNA3.1-Vector组,分别转染pcDNA3.1-TRIM59质粒和pcDNA3.1-Vector对照质粒.采用集落形成实验检测HepG2、Huh7的细胞增殖能力,采用Western blotting法检测细胞中的p53蛋白.结果 各HCC细胞中TRIM59 mRNA及蛋白相对表达量均高于LO2细胞,HepG2及Huh7细胞中TRIM59的表达高于其他HCC细胞系(P均<0.05).shTRIM59组HepG2细胞集落形成数低于shControl组,p53蛋白相对表达量高于shControl组(P均<0.05).pcDNA3.1-TRIM59组Huh7细胞集落形成数高于pcDNA3.1-Vector组,p53蛋白相对表达量低于pcDNA3.1-Vector组(P均<0.05).结论 HCC细胞中TRIM59 mRNA及蛋白高表达;上调TRIM59表达,HCC增殖能力增强、p53蛋白低表达,下调TRIM59表达则HCC增殖能力减弱、p53蛋白高表达;TRIM59对HCC细胞增殖的影响可能是通过调节p53蛋白表达实现的.