非典型蛋白激酶C(atypical PKC,aPKC)是蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)家族中的亚家族.aPKC具有不同于PKC家族中其他亚型的结构特征和功能特性,它在调控细胞极性建立、细胞骨架的动态组装、细胞的非对称性分裂、囊泡运输等多种生物学事件中发挥重要调控作用,从而广泛影响多种组织器官的发育及多类疾病的发生发展.aPKC的蛋白质翻译后修饰对于aPKC的激活与抑制具有重要调控作用.本文就近年来aPKC的结构、功能及蛋白质翻译后修饰的研究进展作一综述.

[目的]探讨他莫昔芬(TAM)对C6胶质瘤细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.[方法]①TAM经不同浓度、不同时间处理C6胶质瘤细胞后,用台盼蓝染色法检测细胞死亡现象,DAPI组化染色观察凋亡细胞核形态,DNA阶梯法和FACS检测细胞凋亡,Western blot法分析PKCα磷酸化水平.②PKCα特异性抑制剂Go6976与TAM联合处理C6胶质瘤细胞后,DNA阶梯法和FACS检测C6胶质瘤细胞凋亡.[结果]①TAM能诱导C6胶质瘤细胞死亡,且与TAM浓度、TAM处理时间呈正相关;TAM组可见典型的细胞凋亡的形态学变化(如核固缩)和明显的DNA梯度条带;C6胶质瘤细胞凋亡率和PKCα磷酸化水平具有TAM浓度依赖性和时间依赖性.②Go6976与TAM联合处理C6胶质瘤细胞后,可进一步促进TAM诱导的C6胶质瘤细胞凋亡.[结论]TAM能诱导C6胶质瘤细胞凋亡,且PKCα参与介导TAM诱导的C6胶质瘤细胞凋亡.该研究可为临床神经胶质瘤的治疗提供实验依据.

目的 探索当降脂颗粒对单纯性非酒精性脂肪性肝病(NAFL)大鼠的防治作用及潜在机制.方法 雄性Wistar大鼠随机分为2组,正常组、高脂高糖饮食(HFHS)组,饲喂8周诱导大鼠NAFL.NAFL大鼠再根据体重随机分为降脂颗粒治疗(JZKL)组和非治疗(NAFL)组.治疗4周后处理动物,记录体重、肝重,收集血清和肝组织,HE染色和油红O染色观察肝脏病理改变,分析肝脏甘油三酯(TG)含量;检测血清总胆固醇(TC)、TG、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和空腹血糖水平,ELISA方法测定空腹胰岛素水平.计算胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Western blot分析肝脏蛋白激酶C(PKC)不同亚型,PKCε、PKCλ/L、PKCζ的蛋白表达情况.结果 HFHS饮食可诱导大鼠出现典型的NAFL特征,降脂颗粒干预可明显降低NAFL大鼠体重,改善肝脂堆积及肝脏TG水平,血脂分析结果提示降脂颗粒对血清LDL-C水平有明显降低的效应.NAFL大鼠血糖明显升高,降脂颗粒干预可明显降低大鼠空腹血糖水平以及升高ISI指数和降低HOMA-IR指数.对肝脏PKC的分析表明,降脂颗粒可明显降低PKCλ/L的蛋白表达和升高PKCζ蛋白在肝脏的表达.结论 降脂颗粒可显著改善NAFL大鼠肝脏组织学改变、血脂代谢紊乱,增加胰岛素敏感性.对不典型PKC的调节可能是其治疗NAFD的潜在机制.

目的 研究非典型蛋白激酶C异构体ι (protein kinase C,PKCι)对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)作用于胰腺癌细胞的杀伤作用的影响,并探讨其作用机制.方法 用白介素-2(IL-2)、干扰素(IFN)、分化抗原簇三分子单克隆抗体(CD3 mAb)等细胞因子诱导健康人外周血中单个核细胞,制备成CIK细胞.将胰腺癌细胞MiaPaCa、PANC-1和胰腺上皮细胞HPDE6-C7分为对照组、化学抑制剂硫代苹果酸钠(ATM组)、与CIK共培养组、ATM+-CIK共培养组.采用细胞计数检测各组细胞1～8 d的生长情况;各组细胞培养48 h后采用流式仪检测细胞死亡率;使用针对人PKCι的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)敲低胰腺癌细胞中PKCι的表达,胰腺细胞转染过表达PKCι的重组质粒,分别采用免疫印迹检测PKCι蛋白表达和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测PKCι对下游信号分子中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)基因表达的影响;并在MiaPaCa和PANC-1与CIK共培养中加入不同质量浓度TGF-β(1、10、20 ng/mL),48 h后流式仪检测细胞死亡情况,以探讨PKCι影响CIK细胞杀伤活性的相关机制.结果 ATM和CIK可抑制胰腺癌细胞MiaPaCa、PANC-1的生长,诱导癌细胞凋亡和死亡,ATM可增强CIK对癌细胞的杀伤作用.敲低胰腺癌细胞中PKCι的表达,可下调其下游信号分子TGF-β基因的表达,而胰腺细胞过表达PKCι,可上调TGF-β mRNA表达,并且在胰腺癌细胞中加入TGF-β 10、20 ng/mL,癌细胞的死亡率较对照组下降(P＜0.05).结论 降低胰腺癌细胞中PKCι的表达可以抑制胰腺癌细胞的生长,增强CIK对癌细胞的杀伤作用.PKCι的作用机制可能是通过调控TGF-β水平影响肿瘤细胞的免疫逃逸.