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巨大侧耳原生质体制备条件的优化
编辑人员丨2023/8/26
为优化巨大侧耳原生质体的制备条件,该研究以两株不同温型的巨大侧耳菌株PG46 和PG79 为材料,采用单因素和正交试验方法对原生质体制备的菌丝体菌龄、稳渗剂种类、溶壁酶浓度、酶解温度和酶解时间进行研究.结果表明:(1)在单因素实验中,巨大侧耳原生质体制备的适宜条件为菌龄5d,溶壁酶浓度2.5%,0.6 mol?L-1甘露醇,32℃(PG46)或 27～35℃(PG79)酶解 4 h.(2)正交试验验证并优化了单因素实验结果,组合 2(菌龄 5d,溶壁酶浓度 2.5%,0.6 mol?L-1的甘露醇,32℃酶解 4h)可同时作为PG46 和PG79 原生质体制备的最适条件,原生质体产量分别为 11.22×106 CFU?mL-1和 7.28×106 CFU?mL-1.(3)F-test检验中,各因素对原生质体制备的影响程度依次为菌龄>溶壁酶浓度>酶解温度>酶解时间(PG46),菌龄>酶解时间>酶解温度>溶壁酶浓度(PG79).综上所述,两株不同温型巨大侧耳菌株的原生质体制备条件基本一致,菌龄对两菌株原生质体得率的影响程度最显著.该研究结果可为后续巨大侧耳的杂交育种、遗传转化、全基因组测序等工作奠定基础,进一步推动巨大侧耳分子遗传学的发展.
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编辑人员丨2023/8/26
