为优化巨大侧耳原生质体的制备条件,该研究以两株不同温型的巨大侧耳菌株PG46 和PG79 为材料,采用单因素和正交试验方法对原生质体制备的菌丝体菌龄、稳渗剂种类、溶壁酶浓度、酶解温度和酶解时间进行研究.结果表明:(1)在单因素实验中,巨大侧耳原生质体制备的适宜条件为菌龄5d,溶壁酶浓度2.5%,0.6 mol?L-1甘露醇,32℃(PG46)或 27～35℃(PG79)酶解 4 h.(2)正交试验验证并优化了单因素实验结果,组合 2(菌龄 5d,溶壁酶浓度 2.5%,0.6 mol?L-1的甘露醇,32℃酶解 4h)可同时作为PG46 和PG79 原生质体制备的最适条件,原生质体产量分别为 11.22×106 CFU?mL-1和 7.28×106 CFU?mL-1.(3)F-test检验中,各因素对原生质体制备的影响程度依次为菌龄>溶壁酶浓度>酶解温度>酶解时间(PG46),菌龄>酶解时间>酶解温度>溶壁酶浓度(PG79).综上所述,两株不同温型巨大侧耳菌株的原生质体制备条件基本一致,菌龄对两菌株原生质体得率的影响程度最显著.该研究结果可为后续巨大侧耳的杂交育种、遗传转化、全基因组测序等工作奠定基础,进一步推动巨大侧耳分子遗传学的发展.

漆酶是一种含铜的单电子多酚氧化酶,能够催化氧化各种酚类及多种染料,在处理染料废水方面具有巨大的潜力.刺芹侧耳Pleurotus eryngii具有较强的产漆酶能力,但漆酶产量在较大程度上受环境条件限制.本文研究了氮源含量、pH、温度、金属离子等环境条件对刺芹侧耳产漆酶能力的影响,优化了其产漆酶条件,并用其粗酶液对典型偶氮类染料甲基橙进行脱色,结果表明,在氮源0.5％ (W/W)、pH 5.5、温度28℃、添加5.0mmol/L Mg2+的培养条件下,刺芹侧耳产漆酶能力最强,培养6d时,漆酶酶活可达78.0U/L.用优化培养的刺芹侧耳粗酶液对偶氮染料甲基橙进行脱色,28h后脱色率可达90％,脱色反应为准一级动力学反应,甲基橙并未完全矿化,而是生成小分子中间产物.

患者男,19岁.自诉15年前于面部左侧耳前后、颌下、颈、左胸上部有多片团状软性包块,突出皮面,不痛,部分包块皮色呈褐色.后包块逐渐长大,致左眼睑下垂,左耳廓下垂移位及右小腿肿胀已7年.

[背景]酚类化合物是环境中主要的水体污染物之一.多功能过氧化物酶(versatile peroxidase,VP)介导的Mn(Ⅲ)-有机酸络合体系具有较高的氧化还原电势,在酚类有机污染物降解方面具有巨大潜力.[目的]探究VP介导的Mn(Ⅲ)-有机酸络合体系降解酚类化合物的能力,为酚类化合物的降解提供新的思路和方法.[方法]研究选取了糙皮侧耳(Pleurotus eryngii)来源的多功能过氧化物酶(PeVP),采用包涵体复性的方法获得了 PeVP活性蛋白,并对重组PeVP进行酶学性质研究及Mn(Ⅲ)络合体系反应条件优化,进而探究Mn(Ⅲ)络合体系对酚类污染物的氧化降解能力.[结果]确定了 PeVP包涵体复性最佳条件为:pH 9.5、10％甘油、0.5 mol/L尿素、0.5 mmol/L氧化型谷胱甘肽(glutathione oxidized,GSSG)、0.1 mmol/L 二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)、0.1 mmol/L 乙二胺四乙酸(ethylenediamine tetraacetic acid,EDTA)、5 mmol/L CaCl2、5 μmol/L 羟高铁血红素(hematin),4℃静置透析 24 h,最后5 μmol/L hematin孵育12 h.通过对PeVP介导的Mn(Ⅲ)-有机酸络合体系优化,确定了最优反应条件为:75 mmol/L苹果酸缓冲液(pH 4.5)、6 mmol/L Mn2+和 0.2 mmol/L H2O2.在上述条件下,探究了络合体系对2,2-丁香醛连 氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS]、2,6-二甲氧基苯酚(2,6-dimethoxyphenol,DMP)、愈创木酚和丁香醛连氮 4 种酚类模式底物的催化活性,发现在pH 4.5条件下,络合体系对酚类模式底物的氧化活性可达到PeVP直接氧化活性的1.5-7.5倍,并且在16 h的酶解过程中,苯酚、对苯二酚、间苯二酚和对硝基苯酚的平均降解速率分别为10.91、10.69、6.50和5.71 mg/(L·h),推测Mn(Ⅲ)-有机酸络合物对酚类底物的氧化降解是通过夺取酚类底物的电子形成酚类自由基中间体,自由基中间体经过电子重排和C-C键的断裂,最终导致酚类物质的氧化降解.[结论]在弱酸(pH 4.5)条件下PeVP介导的Mn(Ⅲ)-苹果酸络合体系对酚类污染物具备较强的氧化能力,这为酚类有机污染物提供了新的生物解决方案.