目的 合成Ag/TiO2复合纳米材料,探讨其对互隔交链孢霉抗真菌作用及机制.方法 采用光催化还原法制备Ag/TiO2复合纳米材料,并通过扫描电镜对其进行表征测定.通过微量液基稀释法检测Ag/TiO2复合纳米材料对互隔交链孢霉的最低抑菌质量浓度,液体振荡培养检测其对真菌生物量的抑制作用,Elisa试剂盒以及荧光显微镜下检测其具体抗真菌作用机制.结果 Ag/TiO2复合纳米材料合成成功,电镜可观察到其分布均匀、大小均一.对互隔交链孢霉具有较强的杀灭作用,最低抑菌质量浓度为16 μg·mL-1,且在该最低抑菌质量浓度下可对真菌生物量的抑制作用达到100％.主要通过降低真菌体内谷胱甘肽还原酶和还原型谷胱甘肽等抗氧化物质的含量,从而破坏真菌机体抗氧化防御系统,并诱导体内产生过量活性氧,同时伴随着线粒体膜电位的下降,导致真菌细胞的凋亡.结论 Ag/TiO2复合纳米材料对气传真菌孢子和菌丝在空气传播中的阻断作用具有重要意义.

伊曲康唑是一种高效、广谱的三唑类抗真菌药,对皮肤、甲等组织有很高的亲和性.Willemsen等 [1]对伊曲康唑在甲的药代动力学研究证明伊曲康唑能通过甲床渗入甲板;停止治疗6个月后,甲中仍可检出伊曲康唑.因此,我们采用伊曲康唑间歇冲击疗法治疗指甲真菌病,现报道如下.一、病例和方法我们共治疗指甲真菌病10例;其中男4例,女6例;年龄21～64岁,平均38岁;病程0.5～20年,平均7.6年;受累指甲共21个.所有病例真菌直接镜检阳性.真菌培养结果6例为红色毛癣菌,1例为互隔交链孢霉,3例阴性.

互隔交链孢是一种重要的能产生交链孢酚(AOH)等真菌毒素的植物病原菌.精油是重要的抑制病原菌侵染的挥发性植物提取物,其活性组分包括柠檬醛等.本研究表明柠檬醛可高效地抑制互隔交链孢的生长和AOH毒素的产生.柠檬醛熏蒸能够引起互隔交链孢菌丝断裂影响其延伸,而对其分生孢子结构的影响不明显.柠檬醛能够引起互隔交链孢活性氧生成的紊乱,这可能是导致AOH显著下降的原因之一.由于柠檬醛能高效抑制互隔交链孢生长和产毒,因此其可作为传统熏蒸剂的潜在替代品,以防控互隔交链孢引起的病害以及毒素污染.柠檬醛抑制互隔交链孢生长产毒的研究为其开发与应用奠定了良好的基础.

[背景]钙/钙调素依赖型蛋白激酶(Calcium/Calmodulin-Dependent Protein Kinase,CaMK)是真核生物细胞钙信号途径中钙调素下游的一类重要靶蛋白,对病原物生长、胁迫响应及致病性等具有重要的调控作用.[目的]对梨果黑斑病菌互隔交链孢(Alternaria alternata) AaCaMK基因进行克隆、生物信息学分析,并对其在侵染结构分化过程中的基因表达情况进行分析,为进一步研究梨果黑斑病菌钙离子信号途径中AaCaMK对A.alternata侵染结构分化调控的分子机制提供一定的理论依据.[方法]采用同源克隆法从A.alternata JT-03中克隆得到3个AaCaMK基因;通过TMHMM、ProtScale、SOPMA等软件对AaCaMK基因进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术分析AaCaMK在梨果黑斑病菌侵染结构分化过程中的表达情况.[结果]克隆得到片段分别为1212、1200、2349 bp的AaCaMK1、AaCaMK2和AaCaMK3基因;生物信息学分析表明,AaCaMK1、AaCaMK2和AaCaMK3均含有典型的蛋白激酶超家族催化结构域(PKC_Like Superfamily),并且AaCaMK1和AaCaMK2共同含有CaMK类丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(STKc_CaMK),AaCaMK3含有LKB 1/CaMKK类丝/苏氨酸蛋白激酶催化结构域(STKc_LKB 1_CaMKK);同源性分析表明,AaCaMK1、AaCaMK2和AaCaMK3分别与玉米大斑病菌CAK1、CAK2和CAK3的相似性高达94.32％、97.49％和86.57％;RT-qPCR分析表明,AaCaMK1、AaCaMK2和AaCaMK3在疏水及果蜡诱导A.alternata侵染结构分化过程中均显著上调表达(P＜0.05),而且果蜡诱导作用更显著.其中AaCaMK1和AaCaMK2在附着胞形成时期(6 h)表达量为对照的1.51倍和3.05倍,而AaCaMK3在侵染菌丝形成阶段(8 h)表达量最高,为对照的2.86倍,并且在果蜡诱导下,这3个基因在芽管伸长阶段(4 h)的上调表达量显著高于疏水界面.[结论]钙信号中AaCaMK基因在疏水及果蜡诱导A.alternata侵染结构分化过程中发挥重要的调控作用.

[背景]羟基萘还原酶(hydroxynaphthalene reductase,HNR)是1,8-间苯二酚(1,8-dihydroxynaphthalene,DHN)黑色素合成途径中起关键作用的酶,研究表明HNR不仅参与真菌黑色素合成,而且对其生长发育及致病性也具有一定的调控作用,但HNR对真菌病原物侵染结构分化的调控研究鲜见报道.[目的]在对梨果黑斑病菌互隔交链孢(Alternaria alternata)HNR的基因进行克隆与生物信息学分析的基础上,通过药理学方法初步探讨HNR对A.alternata生长及侵染结构分化的调控作用,为进一步揭示HNR在A.alternata侵染结构分化形成过程中的分子机制提供理论依据.[方法]对梨果黑斑病菌A.alternata的2个hnr基因进行了克隆;通过gene structure display server、open reading frame(ORF)Finder 及 conserved domain search 等数据库及相关软件,对hnr基因及蛋白进行生物信息学分析,并利用HNR特异性抑制剂三环唑处理分析其对A.alternata生长发育、黑色素合成和侵染结构形成的影响,同时采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析了 hnr基因在A.alternata不同侵染结构分化时期的表达特性.[结果]从梨果黑斑病菌A.alternata克隆得到2个羟基萘还原酶基因 hnr的编码区全长,分别命名为Aa4hnr和Aa3hnr,其中Aa4hnr基因全长为1 266 bp,编码了 268个氨基酸,无内含子,有9个ORF;Aa3hnr基因全长为1 356 bp,编码了 267个氨基酸,含有2个大小分别为51bp和49 bp的内含子,有17个ORF;进化分析表明,Aa4hnr 和 Aa3hnr 与 Ophiobolus disseminans 和 Alternaria arborescens 分别具有较高的一致性,同时Aa4hnr和Aa3hnr编码的蛋白均含有NAD(P)结合域,属于短链脱氢酶/还原酶(short-chain dehydrogenase/reductase,SDR)家族.药理学结果表明,三环唑处理显著降低了 A.alternata DHN黑色素的生物合成,抑制了疏水性诱导的A.alternata侵染结构的形成;进一步分析Aa4hnr和Aa3hnr在疏水表面诱导的A.alternata孢子萌发阶段(2h)、附着胞形成阶段(6 h)、侵染菌丝形成阶段(8 h)的基因表达量,Aa4hnr的基因表达量在A.alternata侵染结构分化的各个时期均发生下调,Aa3hnr在附着胞形成阶段(6 h)表达量下调,然而在侵染菌丝形成阶段(8 h)显著上调表达.[结论]Aa4hnr和Aa3hnr对梨果黑斑病菌侵染具有一定的调控作用.

[背景]由互隔交链孢(Alternaria alternata)引起的黑斑病是库尔勒香梨采后贮期的主要病害之一,严重影响果实品质,造成巨大的经济损失.[目的]筛选对梨黑斑病菌具有高拮抗活性的菌株并探究其可能的抑菌机制,为香梨采后保鲜提供理论依据.[方法]从库尔勒香梨园健康植株根际采集土壤样品,采用稀释涂布法分离细菌并进行纯化,通过平板对峙法和琼脂打孔法筛选对梨黑斑病菌具有显著拮抗作用的菌株,结合形态学观察和16S rRNA基因序列分析进行初步鉴定;通过平板对峙法对拮抗菌抑菌谱进行测定;采用特异性平板定性检测拮抗菌产酶活性,采用3,5-二硝基水杨酸比色法法及福林-酚法定量酶活;通过孢子萌发抑制试验和扫描电镜观察,测定拮抗菌对梨黑斑病菌的拮抗作用.[结果]筛选得到2株对梨黑斑病菌有较强抑制活性的菌株JE53和JE56,经分析鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),其发酵上清液对梨黑斑病菌的抑菌圈直径分别为22.49 mm和22.40 mm.抑菌谱测定结果表明,菌株JE53和JE56对马铃薯黑痣病菌等9种植物病原菌均有不同程度的抑制作用.胞外酶测定结果显示这2株菌可产生4种胞外酶;其发酵上清液能够显著抑制病原菌孢子萌发,抑制率分别为70.30％和88.87％;扫描电镜发现这2株菌可导致病原菌菌丝表面粗糙、扭曲变形.[结论]JE53和JE56对梨黑斑病菌有较好的抑制效果,具有进一步开发和应用的潜力.