为了观察常用调料、酒精饮品和饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴的体外作用,研究组自亚洲带绦虫孕节收集虫卵,体外孵化至六钩蚴阶段,同时以地塞米松皮下注射昆明鼠30 d后,按5 000个六钩蚴/只对昆明鼠进行感染,于感染后60 d剖杀小鼠获取活囊尾蚴,将常用调料(食醋、10％食盐水、30％食盐水、酱油、100％生姜汁、100％大蒜汁、10％辣椒水和100％柠檬汁)、酒精饮品(白酒、啤酒和红酒)和饮料(鲜橙多、营养快线和可乐)于常温下按不同作用时间分别体外作用活囊尾蚴,将囊尾蚴与猪胆汁于37℃培养48h观察头节翻出情况,测定并比较调料、酒精饮品和饮料在各时间点作用后对亚洲带绦虫囊尾蚴的死亡率.结果显示,食醋和30％食盐水,酒精饮品中的白酒均可在作用5 min内杀灭全部囊尾蚴(P＜0.05),酱油处理需15 min杀死全部囊尾蚴(P＜0.05),10％辣椒水需30 min导致囊尾蚴全部死亡(P＜0.05),100％蒜汁、100％姜汁和100％柠檬汁分别处理10、30和40 min后囊尾蚴死亡率达100％(P＜0.05),而常用饮料对亚洲带绦虫囊尾坳影响不显著.因此得出结论,食醋、食盐水、食用酱油、生姜汁、大蒜汁、辣椒水和柠檬汁等常用调料于体外对亚洲带绦虫囊尾蚴均有杀灭作用,其中以食醋和食盐水对亚洲带绦虫囊尾蚴杀灭作用最佳;酒精饮品中的白酒对亚洲带绦虫囊尾蚴具有最佳杀灭效果;而常用饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴作用不显著.该研究为防治亚洲带绦虫感染导致的食源性寄生虫病提供了具有重要指导意义的基础资料.

目的 筛选并制备亚洲带绦虫45 kDa雌激素调节蛋白(TaEP45)的杂交瘤细胞株. 方法 设计带有酶切位点的特异性引物,以亚洲带绦虫成虫总RNA为模板,RT-PCR扩增TaEP45完整的开放阅读框(ORF),克隆至原核表达载体pET-30a(+),转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),用1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达带组氨酸(His)标签的TaEP4蛋白,用亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清蛋白质印迹(Westernblotting)分析TaEP45的反应原性.以纯化的TaEP45免疫BALB/c小鼠(100 μg/鼠,首次免疫用等量弗氏完全佐剂,第2、第3次免疫用等量弗氏不完全佐剂),选择血清抗体效价高的小鼠,取脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合,用纯化的TaEP45和His标签蛋白ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,用亚洲带绦虫全虫抗原Western blotting鉴定杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体. 结果 RT-PCR扩增获得的TaEP45基因ORF长1 362 bp,编码453个氨基酸.重组融合蛋白的相对分子质量(Mr)约为60 000,可被亚洲带绦虫囊尾蚴阳性猪血清识别.筛选获得5株稳定分泌TaEP45抗体的杂交瘤细胞株,其抗体效价均≥1∶2 430,亚型分别为IgG2b或IgG1.Western blotting分析结果显示,5株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体均能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应. 结论 表达纯化了TaEP45,筛选出5株能稳定分泌高滴度TaEP45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体能与亚洲带绦虫全虫抗原发生反应.

目的 建立一种多重聚合酶链式反应(multiplex polymerase chain reaction,mPCR)方法,用于快速鉴别猪囊尾蚴等4种猪的绦虫蚴.方法 比较猪带绦虫(Taenia solium)、亚洲带绦虫(Taenia asiatica)、细粒棘球绦虫(Echinococcusgranulosus)和泡状带绦虫(Taenia hydatigena)的线粒体基因组,选取tRNA-Val、tRNA-Ala、tRNA-Asp和nad1基因作为分子检测靶标,设计4条种特异性上游引物(TaF、EgF、ThF、和TsF)和1条下游通用引物(TR),通过优化反应条件和体系,建立了在一个PCR体系中即可完成对4种猪绦虫蚴的快速鉴别的mPCR方法.结果 4种猪绦虫蚴的特异性PCR引物等比例混合后,在退火温度为50℃的条件下,该mPCR方法可同时扩增出C.cellulosae、T.asiatica、E.granulosus和C.tenuicol-lis的特异性基因片段,其大小分别为478 bp、710 bp、619 bp和542 bp.PCR产物测序后经BLAST比对,与同种虫体的基因序列相似性在99％以上.结论 本研究建立的mPCR方法具有很高的种间特异性,并且可通过扩增片段的大小对4种猪绦虫蚴进行快速、准确的鉴别.