目的:探究低氧诱导因子-1α/Bcl-2/腺病毒E1B-19kDa相互作用蛋白3(HIF-1α/BNIP3)在IL-4减轻小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)中的作用及其与自噬的关系.方法:将SPF级BALB/c小鼠采用随机数字表法分为假手术组、缺血再灌注组(CIRI组)、IL-4组、HIF-1α抑制剂2ME2组(2ME2组)和IL-4+HIF-1α抑制剂2ME2组(IL-4+2ME2组).采用线栓法构建CIRI组、IL-4组、2ME2组和IL-4+2ME2组大脑中动脉栓塞(MACO)模型,闭塞缺血60 min后再灌注24 h,假手术组除不阻断小鼠大脑中动脉外,其余操作同上.IL-4组、2ME2组、IL-4+2ME2组建模前30 min分别腹腔注射对应的IL-4C复合体溶液及尾静脉注射2ME2溶液.再灌注24 h后进行神经行为学评分,然后处死小鼠取脑组织.采用TTC染色检测脑梗死体积;干湿重法测定脑组织含水量;TUNEL染色检测细胞凋亡;透射电镜计数自噬小体;比色法测定SOD、MDA和ROS水平;Western blot检测HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1表达.结果:与假手术组相比,CIRI组小鼠神经行为学评分、脑梗死体积、脑含水量、细胞凋亡率、自噬小体数量、MDA、ROS、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1水平升高,SOD水平降低(P<0.05);与CIRI组相比,IL-4组神经行为学评分、脑梗死体积、脑含水量、细胞凋亡率、MDA、ROS水平降低,自噬小体数量、SOD、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1水平升高(P<0.05);与IL-4组相比,2ME2组、IL-4+2ME2组神经行为学评分、脑梗死体积、脑含水量、细胞凋亡率、自噬小体数量、MDA、ROS、HIF-1α、BNIP3、LC3-Ⅱ和Beclin-1水平降低,SOD水平升高(P<0.05).结论:IL-4可通过激活HIF-1α/BNIP3信号通路,激活细胞自噬,减少细胞凋亡和氧化应激,从而减轻小鼠CIRI.

目的 探讨麝香通心滴丸(STDP)对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用.方法 建立心肌缺氧/复氧模型.将H9c2细胞分为5组:对照组(细胞正常培养,不做任何处理)、模型组、STDP组(在复氧前40 min给予STDP 50 mg/L)、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(在复氧前40 min给予3-MA 5 mmol/L)及STDP+3-MA组(在复氧前40 min分别给予STDP 50 mg/L及3-MA 5 mmol/L).采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞存活率,并测定各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛及肌酸激酶水平.采用流式细胞仪检测各组细胞的细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测信使RNA(mRNA)自噬相关基因Beclin-1、Atg5的表达水平,并通过Western-blotting检测各组细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、Bcl-2/腺病毒E1B 19 kDa相互作用蛋白3(BNIP3)、Beclin-1、Atg5的表达水平.结果 各组细胞存活率比较,差异有统计学意义(F=85.893,P=0.028),且STDP组细胞存活率较模型组、3-MA组及STDP+3-MA组细胞存活率均显著升高[(90±7)％、(63±5)％、(80±5)％、(81±6)％,P均<0.05].各组细胞LDH、丙二醛、肌酸激酶水平,细胞凋亡率,Beclin-1 mRNA、Atg5 mRNA以及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、HIF-1α、BNIP3、Beclin-1、Atg5蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义(F=78.381、23.519、48.376、22.726、6.315、5.294、75.219、116.546、21.125、39.724、65.247,P均<0.05).进一步两两比较发现,在STDP组细胞中,LDH[(92±6)、(194±13)、(195±11)、(192±10)μmol/L,P均<0.05]、丙二醛[(12.5±0.7)、(17.2±1.2)、(18.5±1.6)、(17.9±1.0)μmol/L,P均<0.05]、肌酸激酶[(19.9±1.0)、(34.3±2.2)、(35.3±2.2)、(34.8±2.5)μmol/L,P均<0.05]水平,细胞凋亡率[(5.8±0.8)％、(8.8±0.9)％、(7.6±0.7)％、(7.3±0.5)％,P均<0.05]较模型组、3-MA组及STDP+3-MA组均明显降低;Beclin-1 mRNA、Atg5 mRNA、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、BNIP3、Beclin-1、Atg5蛋白表达水平较模型组均明显降低,而较3-MA组及STDP+3-MA组均显著升高(P均<0.05);HIF-1α蛋白表达水平较模型组、3-MA组及STDP+3-MA组均明显升高(P均<0.05).结论 STDP可通过调控HIF-1α/BNIP3信号通路发挥对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.

目的 观察青光安Ⅱ号方对谷氨酸诱导损伤的RGC-5细胞中核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)、BCL2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BCL2/adenovirus E1B 19kDa interacting protein 3,BNIP3)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)的影响.方法 体外培养RGC-5细胞,分为4组:空白组、模型组、含药血清组和阻断剂组.模型组、含药血清组和阻断剂组予以谷氨酸诱导细胞损伤,模拟青光眼对神经节细胞的损伤,含药血清组加入青光安Ⅱ号方含药血清,阻断剂组加入KC7F2进行HIF-1α通路的阻断.以CCK-8法摸索含药血浆以及谷氨酸的最佳干预浓度;采用Hoechst法检测各组细胞的凋亡情况;Western blot检测NF-κB、HIF-1α、BNIP3蛋白表达情况;比色法检测SOD、MDA的表达情况.结果 CCK8法确定青光安Ⅱ号方5倍组含药血清为实验量,确定谷氨酸的最佳干预浓度为200μM.与空白组比较,模型组NF-κB、HIF-1α、BNIP3、SOD、MDA表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,含药血清组、阻断剂组NF-κB、HIF-1α、BNIP3和SOD的表达显著降低(P<0.05);含药血清组与阻断剂组的NF-κB、HIF-1α、BNIP3、SOD及MDA差异均无统计学意义(P>0.05).结论 青光安Ⅱ号方对NF-κB具有抑制作用,进而抑制了HIF-1α相关通路的激活,减弱了由于氧化应激所致RGC-5细胞的凋亡,对RGC具有保护作用.

目的:探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)对牙髓干细胞(DPSCs)低氧诱导因子1α(HIF-1α)/Bcl-2/腺病毒E1B 19-kDa相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路及成骨相关因子表达的影响.方法:体外培养人DPSCs,分为对照组(不转染)、mimic NC 组(转染 negative control-miR-31-5p)、miR-31-5p mimic 组(转染 hsa-miR-31-5p mimic)、siR-NA NC 组(转染 nonsense siRNA)和 miR-31-5p siRNA 组(转染 miR-31-5p siRNA).实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测各组DPSCs细胞中miR-31-5p、HIF-1α、BNIP3、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录子 2(Runx2)mRNA的表达情况,MTT法检测各组DPSCs细胞增殖情况,ALP活性测定试剂盒检测各组DPSCs细胞ALP活性,蛋白印迹(WB)法检测各组DPSCs细胞中HIF-1α、BNIP3、Runx2蛋白的表达情况.采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与对照组、mimic NC组相比,miR-31-5p mimic组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),ALP 染色明显减弱,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA 及 HIF-1α、BNIP3、Beclin1蛋白表达水平显著升高(P＜0.05).与对照组、siRNA NC组相比,miR-31-5p siRNA组DPSCs细胞A值、ALP mRNA表达水平及活性、Runx2 mRNA及蛋白水平显著升高(P＜0.05),ALP染色明显增强,miR-31-5p mRNA、HIF-1α、BNIP3 mRNA 及 HIF-1 α、BNIP3、Beclin1 蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论:miR-31-5p 可以激活 HIF-1α/BNIP3信号通路,抑制DPSCs细胞的成骨相关因子表达.

[背景]缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1-alpha,HIF-1α)是响应细胞低氧反应的关键因子,在红细胞生成、血管形成、能量代谢及调节宿主免疫代谢中发挥着重要作用.[目的]探讨 HIF-1α/Bcl-2-腺病毒 E1B 相互作用蛋白 3(Bcl-2-adenovirus E1B 19-kDa interacting protein 3,BNIP3)信号通路对牛分枝杆菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7自噬的影响.[方法]构建HIF-1α的小干扰RNA(siHIF-1α),转染RAW 264.7细胞后,结合BCG感染,采用流式细胞仪检测细胞自噬率,用Western blotting或免疫荧光技术检测HIF-1α、BNIP3、LC3、Beclin 1、Rheb和mTOR的表达水平.[结果]BCG感染显著上调巨噬细胞中LC3和HIF-1α的表达,用siHIF-1α结合BCG感染后显著下调巨噬细胞中HIF-1α、BNIP3、LC3、Beclin 1和细胞自噬率水平,并促进Rheb和p-mTOR的表达.[结论]在BCG感染RAW 264.7细胞过程中,干扰HIF-1α表达抑制了 HIF-1α/BNIP3信号通路,进而激活了 mTOR途径,抑制BCG感染诱导的细胞自噬.