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不同层析介质纯化H5N1型流感病毒的研究
编辑人员丨1周前
目的:分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液，并比较分离纯化效果。方法:用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液，透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态；分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion, SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein, HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA, HCD)含量，计算病毒抗原回收率和杂质去除率；用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性，并用 t检验分析两种层析介质纯化效果差异。 结果:Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态；两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义( P>0.05)，但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者，且差异有统计学意义( P<0.05)；动物实验表明两种层析介质纯化的病毒样品均具有良好的免疫原性。 结论:相对于Sepharose 4FF层析介质，Capto Core700在保证病毒抗原蛋白回收率的基础上可以更有效地去除HCP、HCD和总蛋白质等工艺相关杂质。本研究为MDCK细胞生产H5N1型流感病毒疫苗纯化工艺开发提供了参考。
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编辑人员丨1周前
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MDCK细胞流感疫苗层析工艺的建立
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立MDCK细胞流感疫苗亲和层析工艺.方法 采用Cellufine Sulfate亲和层析柱纯化MDCK细胞流感病毒液,并对洗脱缓冲液盐浓度(0.5、1、1.5 mol/L NaCl)、线性流速(50、100、150 cm/h)及样品浓缩倍数(1、2、5倍)进行优化.采用优化方法连续上样40个柱体积,计算亲和层析结合HA的动态结合载量.采用优化方法检测3批MDCK细胞流感病毒液血凝素(hemagglatinin,HA)含量、宿主DNA残留量和宿主蛋白残留量,并计算HA回收率、宿主DNA去除率及宿主蛋白去除率.同时采用优化方法及分子筛层析Sepharose 4FF纯化同批MDCK细胞流感病毒液,比较纯化效果.结果 最佳洗脱缓冲液盐浓度为1.5 mol/L NaCl,线性流速为100 cm/h,样品浓缩倍数为5倍.最佳条件下纯化产物HA回收率为80％,宿主DNA去除率为99％,宿主蛋白去除率达80％以上.亲和层析结合HA的动态结合载量为2 072 μg/mL介质.与分子筛层析Sepharose 4FF比较,Cellufine Sulfate亲和层析纯化样品HA回收率及DNA去除率均有提高,宿主蛋白去除率略有下降.结论 建立的MDCK细胞流感疫苗亲和层析工艺具有较高的杂质去除率,为细胞流感疫苗大规模纯化奠定了基础.
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编辑人员丨2023/8/5
