目的 筛选中药黄芩中血管紧张素转换酶2(ACE2)和二肽基肽酶4(DPP-4)抑制剂.方法 以ACE2和DPP-4作为靶蛋白,利用受体配体亲和超滤和液质联用技术,对黄芩中与ACE2和DPP-4亲和的化合物进行筛选和分析,以筛选具有同时抑制ACE2和DPP-4的化合物.结果 从黄芩中筛选出了 5,7,2',6'-4羟基黄酮、5,7,2',5'-4羟基.8,6'-二甲氧基黄酮、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素-6-O-葡萄糖醛酸苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、白杨素、千层纸素A,可以同时亲和抑制ACE2和DPP-4,具有潜在的抗新型冠状病毒的作用.结论 从黄芩中筛选出与新型冠状病毒肺炎有关的靶蛋白抑制剂,具备潜在开发价值.

目的:探讨外周血CD4 +、CD8 +T淋巴细胞水平对成人隐匿性自身免疫糖尿病(latent autoimmune diabetes in adults, LADA)患者胰岛β细胞功能的影响。 方法:选择2020年1月至2022年1月庐江县人民医院收治的LADA患者87例作为研究对象；另选择同期健康体检者80例作为对照组。应用全自动生化分析仪测定空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)水平，采用亲和层析微注法测定糖化血红蛋白A1c(hemoglobin A1c, HbA1c)水平；采用化学发光免疫分析法测定空腹C肽水平；采用稳态模型计算胰岛β细胞功能指数(homeostasis model assessment-β，HOMA-β)和胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-index resistance, HOMA-IR)；采用流式细胞术测定CD4 +、CD8 +T淋巴细胞水平。比较两组上述指标差异并采用Pearson分析CD4 +和CD8 +T淋巴细胞与FBG、HbA1c、空腹C肽、HOMA-β和HOMA-IR相关性。 结果:LADA组FBG和HbA1c高于对照组[(9.42±1.76)mmol/L比(5.17±0.68)mmol/L，(10.34±2.48)%比(5.64±1.26)%， t＝20.25、15.24， P值均<0.05]，空腹C肽低于对照组[(1.14±0.39)μg/L比(2.41±0.57)μg/L， t＝16.92， P<0.05]。LADA组HOMA-β低于对照组[(65.87±21.42)比(97.42±18.28)， t＝10.20， P<0.05]，而HOMA-IR高于对照组[(2.12±0.43)比(1.02±0.29)， t＝19.21， P<0.05]。LADA组CD4 +T淋巴细胞高于对照组[(42.42±7.85)%比(38.89±7.27)%， t＝3.01， P<0.05]，而CD8 +T淋巴细胞低于对照组[(32.26±5.53)%比(35.01±4.57)%， t＝3.49， P<0.05]。经Pearson分析显示，CD4 +T淋巴细胞水平与FBG、HbA1c和HOMA-IR呈线性正相关( r＝0.46、0.53、0.45， P值均<0.05)，而与空腹C肽和HOMA-β呈线性负相关( r＝－0.62、－0.59， P值均<0.05)；CD8 +T淋巴细胞水平与FBG、HbA1c和HOMA-IR呈线性负相关( r＝－0.42、－0.46、－0.52， P值均<0.05)，而与空腹C肽和HOMA-β呈线性正相关( r＝0.56、0.44， P值均<0.05)。 结论:LADA患者CD4 +T淋巴细胞水平升高，而CD8 +T淋巴细胞水平降低，且与胰岛β细胞功能密切相关，T淋巴细胞亚群失衡可能介导了胰岛β细胞的损伤。

目的:分析肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP胞外区(EC-StkP)基序(motif)在与β-内酰胺类抗生素结合中的作用。方法:分别将EC-StkP的3个motif(SXXK)依次和全部突变为AXXA，将突变后得到的质粒导入受体细胞进行克隆表达，SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组突变蛋白(EC-rStkP)表达情况，Ni-NTA亲和层析法分别提纯突变蛋白。采用等温滴定量热法(ITC 200)和表面等离子共振法(Biacore t200)检测突变蛋白与青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)结合能力。结果:PCN和CTX均不能与第1个、第3个以及3个motif均突变的蛋白质结合，但第2个motif突变后还能与CTX有较弱结合，而与PCN却不能结合。结论:肺炎链球菌StkP激酶胞外区的3个motif都能与β-内酰胺类抗生素结合，且以与第1个motif和第3个motif结合为主。

目的:了解引起2019新型冠状病毒（2019-nCoV）免疫球蛋白M（IgM）抗体检测结果假阳性的干扰因素，探讨相应的解决方案。方法:2020年1月22日至2月15日就诊于川北医学院附属医院的不同病原体感染及相关慢性疾病患者血清样本共71份，采用胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附法检测71例患者血清中2019-nCoV IgM抗体，其中包括6例2019-nCoV肺炎确诊患者，5例A型流感病毒IgM阳性患者，5例B型流感病毒IgM阳性患者，5例肺炎支原体IgM阳性患者，5例嗜肺军团菌IgM阳性患者和29例类风湿因子IgM阳性患者，5例高血压患者，5例糖尿病患者，6例人类免疫缺陷病毒感染患者；然后对2019-nCoV IgM抗体阳性结果进行分析，探讨造成检测结果假阳性的可能因素；再采用尿素解离试验对阳性结果的血清进行解离，以尿素最佳解离浓度进行解离后重新测定2019-nCoV IgM抗体。采用SPSS 19.0统计软件对数据进行统计学分析。结果:6例2019新型冠状病毒肺炎确诊患者和18例中高水平类风湿因子IgM阳性患者血清中2019-nCoVIgM抗体检测为阳性，其余47例受检者血清均为阴性。胶体金免疫层析法的尿素解离浓度为6 mol/L时，上述18例中高水平类风湿因子IgM阳性患者的17例的2019-nCoVIgM抗体检测为阴性，6例新型冠状病毒肺炎确诊患者血清检测仍为阳性。酶联免疫吸附法的尿素解离浓度为4 mol/L，解离时间为10 min，且亲和指数<0.46设定为阴性时，15例类风湿因子IgM阳性血清的2019-nCoVIgM抗体检测为阴性，6例2019新型冠状病毒肺炎确诊患者血清检测仍为阳性。结论:中高水平IgM型类风湿因子易造成胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附法检测血清2019-nCoVIgM结果的假阳性，针对检测结果阳性的样本进行尿素解离将有利于降低假阳性的发生概率。

目的:对一个临床诊断为少汗性外胚层发育不良患儿的外胚层发育不良候选基因进行二代测序，以期发现致病位点以明确诊断。方法:对家系中一例患儿的少汗性外胚层发育不良的候选基因进行二代测序，并利用Sanger测序法对筛选出的可疑致病突变进行验证，同时在家系中其他成员和100例无关联健康个体中检测此突变。结果:在患儿和其弟弟(亦为患者)中发现 EDA c．300_301delCC(p.Pro101His fs*11)缺失移码突变，其母亲为该突变的携带者，其父亲和妹妹无突变。同时100例无关联正常个体均无此突变。 结论:EDA基因c.300_301delCC(p.Pro101His fs*11)缺失移码突变可能是该家系中2例患儿罹患少汗性外胚层发育不良的主要原因。

目的:初步了解重组人tau441 (P301S)蛋白体外聚集、抗原性及免疫原性等生物学性质。方法:原核表达带His标签的tau441 (P301S)重组质粒，镍亲和层析纯化重组蛋白，BCA测定蛋白浓度，SDS-PAGE凝胶考马斯亮蓝染色确定蛋白的纯度；采用Western blot (WB)和负染透射电镜(transmission electron microscopy, TEM)鉴定；间接酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测所得蛋白的抗原性；以重组蛋白免疫小鼠，检测免疫血清特异性抗体滴度来分析其免疫原性。结果:所得重组人tau441 (P301S)纯度为70%，WB显示在相对分子质量(Mr.×10 3)64和更高相对分子质量处有特异性条带。TEM显示，tau441 (P301S)呈絮状团块聚集，团状面积显著大于tau441野生型蛋白(t＝6.439, P＝0.003)；4 ℃孵育9 d后，tau441 (P301S)形成明显的纤维状结构。间接ELISA结果显示，tau441 (P301S)能被tau单抗HT7(1∶80 000)识别；小鼠免疫血清tau特异性抗体滴度达到1∶128 000，且WB显示，免疫后血清识别阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)转基因小鼠脑裂解抽提物。 结论:重组人tau441 (P301S)蛋白具有体外聚集性增强的特性但其抗原性和免疫原性未改变。

探讨妊娠合并急性Standford A型主动脉夹层的临床特点、治疗策略及治疗效果。回顾性纳入2010年6月至2020年7月在首都医科大学附属北京安贞医院收治的12例妊娠合并急性Stanford A型主动脉夹层患者的临床资料，分析其治疗策略和母儿结局。12例患者年龄为（29±5）岁，发病时间为孕16周至产后1个月。12例妊娠合并主动脉A型夹层孕妇全部接受外科手术治疗。3例产褥期患者优先妊娠，分娩后再行主动脉修复；4例患者优先主动脉修复；5例患者进行同期接生联合主动脉修复。在基于挽救母亲和胎儿生命的前提下，妊娠期合并主动脉A型夹层术前应多学科综合评估，根据妊娠时间、胎儿发育情况、主动脉病变程度决定治疗策略。

目的:表达和纯化人A组G1P[8]轮状病毒VP7蛋白(G1 VP7)；制备VP7多克隆抗体并进行抗体功能鉴定。方法:利用杆状病毒系统表达G1 VP7蛋白，通过亲和层析法进行蛋白纯化。将纯化后的G1 VP7蛋白免疫新西兰大白兔制备兔多抗血清，纯化得到G1 VP7兔多抗。通过免疫印迹(Western blot, WB)、酶联免疫吸附(ELISA)和免疫荧光试验进行多抗功能验证。结果:利用杆状病毒表达系统获得人A组G1P[8]轮状病毒可溶VP7蛋白，并且G1 VP7蛋白主要以三聚体形式存在；制备得到G1 VP7多抗，ELISA结果显示VP7多抗具有较高的效价；WB和ELISA实验表明VP7多抗能够识别多个G型轮状病毒的VP7；免疫荧光试验结果进一步显示G1 VP7多抗可以结合不同A组轮状病毒，包括Wa株(基因型G1P[8])、DS-1(基因型G2P[4])、SA11(基因型G3P[2])、人G9P[8]株。此外，双夹心ELISA初步结果显示包被VP7多抗可以检测到轮状病毒临床样本。结论:本研究成功得到可溶G1 VP7蛋白并制备VP7多抗；G1 VP7多抗可以结合多种G型轮状病毒，为不同G型轮状病毒检测方法的建立奠定基础。

目的:分析3种胶体金免疫层析试剂盒检测新型冠状病毒（2019-nCoV）免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）抗体的特异性，探讨假阳性的干扰因素和避免方法。方法:回顾性收集2020年3月6日至4月20日北京大学第三医院门诊或住院患者的血清：（1）健康对照组120例；（2）病原感染组139例：乙型肝炎大三阳和小三阳42例、丙型肝炎抗体阳性27例、梅毒抗体阳性11例、巨细胞病毒抗体阳性12例、风疹病毒抗体阳性12例、EB病毒抗体阳性8例、甲型和乙型流感病毒患者血清各15例、大肠埃希菌血流感染患者血清12例；（3）内源性干扰组242例：血清总IgM升高20例、IgG升高20例、总补体升高15例、甲胎蛋白升高9例、类风湿因子正常组（≤20 IU/ml）84例和升高组（>20 IU/ml）94例；（4）孕妇和肿瘤患者组126例：包括孕妇、实体器官恶性肿瘤和血液系统恶性肿瘤各42例。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测患者咽拭子2019-nCoV核酸，阴性样本且患者排除2019-nCoV感染的纳入抗体假阳性研究。用A、B、C 3种胶体金免疫层析试剂盒检测上述血清2019-nCoV抗体，采用Pearson卡方检验对结果进行统计学分析。结果:A试剂检测健康对照血清2019-nCoV IgM和IgG的假阳性率为0和0.83%（1/120），B试剂假阳性率为4.17%（5/120），C试剂无假阳性。3种试剂检测大肠埃希菌血流感染患者血清假阳性率均为1/12，B试剂在丙肝抗体阳性血清的假阳性率为7.41%（2/27）。B试剂在血清类风湿因子正常组和升高组假阳性率分别为9.52%（8/84）和54.26%（51/94）（χ2=40.05， P<0.001）；A试剂和C试剂在类风湿因子正常组均无阳性，升高组各有3例IgM/IgG抗体阳性。A、B、C试剂在总体人群中的假阳性率分别为0.55%（3/548）、4.20%（23/548）、0.73%（4/548）。 结论:不同试剂盒的特异性差别较大，高类风湿因子是导致B试剂盒假阳性的主要因素，使用高纯度的抗体和适当的阻断剂有助于提高其检测的特异度。

目的:构建细粒棘球蚴pET30a-EgG1Y162-2原核表达重组质粒，诱导表达EgG1Y162-2重组蛋白，为研制细粒棘球蚴疫苗提供研究基础。方法:以细粒棘球蚴cDNA为模板，利用PCR法合成EgG1Y162-2目的基因，经限制性内切酶 EcoRⅠ和 HindⅢ双酶切后连接到原核表达载体pET30a中，构建pET30a-EgG1Y162-2重组质粒；将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞中，经异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达大量蛋白，采用亲和层析方法纯化重组蛋白；经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析蛋白纯化水平，蛋白免疫印迹（Western blot）法鉴定表达产物。 结果:成功构建pET30a-EgG1Y162-2重组质粒，诱导表达后菌体上清液和洗脱液均在相对分子质量约15 × 10 3处出现EgG1Y162-2蛋白目的条带，且200 mmol/L咪唑洗脱的蛋白抗原成分较纯。Western blot结果显示，纯化后带有His标签的EgG1Y162-2重组蛋白能被抗His单克隆抗体识别。 结论:成功构建了细粒棘球蚴pET30a-EgG1Y162-2原核表达重组质粒，诱导表达了EgG1Y162-2重组蛋白，为进一步开展抗细粒棘球蚴疫苗的研究奠定基础。