目的:分析上海市松江区2017—2020年乙型流感病毒流行情况及其血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)基因特征。方法:使用实时荧光逆转录-聚合酶链式反应检测流感病毒疑似病例的标本，乙型流感病毒阳性标本接种犬肾细胞和鸡胚培养病毒。对乙型流感毒株HA和NA基因测序，序列进行基因进化及氨基酸变异分析，采用神经氨酸酶抑制实验研究毒株对奥司他韦和扎那米韦的敏感性。结果:2017—2020年度松江区乙型流感病毒阳性率为14.24%(506/3 554)，主要流行季为冬春季，呈现B/Victoria和B/Yamagata亚型交替流行的特点。松江B/Victoria流行株主要位于1A(△3)B进化分支，少数位于1A及1A(△2)分支，与疫苗株B/Brisbane/60/2008相比，流行株HA和NA核苷酸同源性分别在97.62%~98.19%、98.11%~98.78%，1A(△3)B分支HA蛋白抗原决定簇区突变主要发生在120环和160环。B/Yamagata流行株均位于3进化分支，与疫苗株B/Phuket/3073/2013相比，HA(NA)核苷酸同源性98.71%~99.04%(98.69%~99.27%)，未发现抗原决定簇区氨基酸改变。神经氨酸酶抑制实验显示，所测的乙型流感病毒对奥司他韦和扎那米韦均敏感。结论:2017—2020年乙型流感病毒流行株与疫苗株抗原性匹配度不佳，需持续做好乙型流感病毒监测及病原学特征分析，为流感疫苗筛选及药物研发提供科学依据。

目的:建立H5N1假病毒的体内感染模型，并对抗体FHA3的体内中和活性进行鉴定。方法:依据A/Anhui/1/2005/H5N1毒株血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)的序列信息，构建重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1，并与质粒pNL4-3.Luc.R-E-共转染293T细胞制备H5N1假病毒上清，电镜观察上清中假病毒颗粒形态。假病毒上清感染MDCK细胞后，测定病毒滴度；经腹腔注射入BALB/c小鼠体内，在感染后2、5、8、12 d进行生物发光成像，检测假病毒体内感染情况。利用建立的小鼠感染模型，评价抗体FHA3的体内功能活性。结果:重组表达质粒pcDNA3.1-HA5和pcDNA3.1-NA1构建正确，与pNL4-3.Luc.R-E-质粒共转染293T细胞可制备出高滴度的假病毒上清，电镜下可见圆形的病毒颗粒。H5N1假病毒感染后，小鼠体内发出较强的荧光，而攻毒前给予抗体FHA3处理可减弱其荧光信号。结论:成功构建出H5N1假病毒体内感染模型，并证实抗体FHA3对假病毒的感染具有体内保护作用。

目的:比较H1N1流感病毒疫苗株在MDCK和MDCK-G1细胞中的最佳培养条件、产毒量、病毒滴度和细胞代谢情况。方法:通过棋盘法摸索两种细胞的最佳种毒条件，然后比较2株细胞在最佳条件种毒后的血凝滴度、半数组织感染剂量(TCID 50)、葡萄糖和乳酸的代谢情况。 结果:MDCK-G1细胞以感染复数(MOI)＝0.001、1 μg/ml TPCK胰酶接种H1N1流感病毒后，72 h时血凝滴度达到峰值(1∶512)，病毒滴度为10 7.4TCID 50/ml；MDCK细胞以MOI＝0.000 1、1 μg/ml TPCK胰酶接种H1N1流感病毒后，72 h时血凝滴度达到峰值(1∶256)，病毒滴度为10 6.6TCID 50/ml。 结论:MDCK-G1比MDCK细胞更适合流感病毒的增殖。本研究为细胞基质流感疫苗的研究提供了参考数据。

目的:分析陕西省首例人感染G4基因型欧亚类禽H1N1猪流感病毒（EA H1N1 SIV）的基因特征。方法:采集患者咽拭子标本，接种MDCK细胞进行病毒分离获得毒株，采用全基因组深度测序方法获得分离株的8个基因节段序列，通过GenBank数据库中Blast程序进行核苷酸同源性分析，构建系统进化树，分析病毒基因特征。结果:病例咽拭子标本经实验室确诊为EA H1N1 SIV，后分离毒株命名为A/Shaanxi-Weicheng/1351/2022（H1N1v）。同源性分析显示，该分离株的PB2、NP、HA、NA和M基因均与A/swine/Beijing/0301/2018（H1N1）核苷酸同源性最高，分别为98.29%、98.73%、97.41%、97.52%和99.08%。进化树显示，该分离株属于G4基因型EA H1N1 SIV，其中PB2、PB1、PA、NP和M基因来自pdm/09 H1N1，HA和NA基因来自EA H1N1，NS基因来自三源重配H1N1。其HA蛋白裂解位点为IPSIQSR↓G，为低致病性流感病毒的分子特征。NA蛋白未出现与神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变。PB2蛋白701N、PA蛋白P224S突变、NP蛋白Q357K突变、M蛋白P41A突变和NS蛋白92D均说明其对哺乳动物的适应性增强。结论:该患者为陕西省首例人感染G4基因型EA H1N1 SIV病例，该病毒为低致病性，但其对哺乳动物的适应性增强，需要加强对此类SIVs的监测。

目的:了解淡豆豉水煎液体外抗流感病毒作用，为抑制病毒的新型中药开发提供基础。方法:以A/Puerto Rico/8/1934(H1N1)（以下简称PR8病毒）感染狗肾上皮细胞(MDCK)作为模型，应用噻唑兰(MTT)法评估淡豆豉水煎液的安全性。以血液凝集抑制实验和神经氨酸酶活性抑制实验检测淡豆豉水煎液对流感病毒吸附和释放的影响。设立PR8病毒+淡豆豉水煎液组和PR8病毒组，以实时荧光定量PCR、Western印迹试验、免疫荧光的方法检测淡豆豉水煎液对病毒基因转录水平和蛋白表达水平的影响。结果:6.25 mg/mL的淡豆豉水煎液能够抑制1 HAU流感病毒的吸附。PR8+淡豆豉水煎液组的子代病毒血凝效价为PR8组的1/8。2 000 μg/mL的淡豆豉水煎液能够抑制大于80%的神经氨酸酶活性。在第24小时，PR8+淡豆豉水煎液组的NP和M1基因转录水平分别为3 444.52±378.35和98 737.80±1 643.00；NP、M1a和M2e蛋白表达水平分别为0.39±0.03、0.54±0.01和0.82±0.02，均低于PR8组( t=-16.03、-16.17、-39.26、-272.80和-220.00， P均<0.05)。 结论:淡豆豉水煎液通过影响流感病毒生命周期的吸附、基因转录和翻译、流感子代病毒释放多个阶段，在体外发挥直接抗流感病毒作用。

目的:针对3种实验室常规消毒方法对流感病毒灭活效果进行评价。方法:采用紫外照射物理方法及乙醇和84消毒液2种化学方法，分别对流感病毒进行消杀，不同时间或浓度的消毒方法处理病毒样本后感染MDCK细胞，观察细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)鉴定对流感病毒灭活效果。结果:紫外照射流感病毒时间≥1 min、或75%乙醇处理流感病毒0.25～32 min、或84消毒液有效氯浓度≥400 mg/L且室温消杀流感病毒时间≥1 min，上述3种条件下均检测不到病毒感染性。结论:摸索了实验室常规消毒方法灭活流感病毒的条件，为建立流感病毒实验室防护规范和应急处置技术方案提供了参考数据。

目的:研究不同基因型别乙型脑炎病毒在不同细胞系上的生长特点，为乙脑病毒的研究中细胞系的选择提供科学依据。方法:选择BHK-21、Vero、C6/36、PK-15、DF-1、N2a、SH-sy5y和MDCK细胞系，通过空斑测定法和RT-qPCR法评价基因1型(G1, NX1889株)、基因3型(G3, P3株)和基因5型(G5, XZ0934株)乙脑病毒在上述细胞系中的增殖能力。结果:3种基因型别乙脑病毒在BHK-21、Vero、C6/36、DF-1、N2a和PK-15细胞系中存在明显的细胞病变效应(CPE)，在同一种细胞系中引起CPE的特点并未观察到明显不同。病毒感染SH-sy5y和MDCK细胞系后没有明显的CPE出现，但是在SH-sy5y细胞系中存在病毒的增殖，而MDCK细胞系为非敏感细胞系。G1、G3和G5型乙脑病毒在BHK-21、Vero和SH-sy5y细胞系中的增殖曲线没有明显差异；在C6/36和PK-15细胞系中，G1型乙脑病毒的滴度高于其他两型乙脑病毒；在DF-1细胞系中，G5型高于其他两者，在N2a细胞系中，G5型低于其他两者。结论:3种不同基因型别的乙脑病毒在不同细胞系中的增殖存在差异，可为针对乙脑病毒不同方向的研究提供选择参考。

目的:比较悬浮细胞MDCK和贴壁细胞MDCK两种培养体系对流感病毒分离培养的差异，探讨悬浮细胞的应用前景。方法:通过细胞计数记录两种细胞的活细胞密度和细胞特定生长速率，使用WHO推荐疫苗株进行病毒感染实验，连续传代5次后观察血凝效价并对HA和NA基因进行测序，观察基因突变情况。结果:悬浮细胞的24 h、48 h活细胞密度较贴壁细胞更稳定；病毒连续传代培养至第三代时悬浮细胞培养的病毒HA滴度可达1∶256以上，而贴壁细胞则无滴度；悬浮细胞培养的H3N2和BV亚型流感病毒第四代和第五代HA基因各发生1个氨基酸位点突变，贴壁细胞两个代次内未发现基因突变，NA基因均未发现基因突变。结论:悬浮MDCK细胞较贴壁细胞生长更为稳定，且病毒分离培养效率高，连续传代病毒突变率低，在基于细胞培养技术的流感疫苗生产工艺中具备一定的可行性。

目的:分析甘肃省2010—2018年度流感监测结果及流行特征，为流感防控策略的制定和调整提供依据。方法:在甘肃省19家国家级流感监测哨点医院采集流感样病例(influenza-like illness, ILI)标本，全省各级流感网络实验室采用Real-time RT－PCR法进行核酸检测，用犬肾细胞(canine kidney cell, MDCK)进行流感病毒分离培养。结果:2010年1月份至2018年12月份共检测ILI标本93 334份，检出流感病毒核酸阳性标本13 440份，流感病毒核酸检测阳性率为14.40%，阳性标本中乙型流感病毒所占比率最高(37.02%)，其次为季节性H3N2型流感病毒(35.25%)、甲型H1N1型流感病毒(26.78%)。不同时期优势型别不同。每年12月份至次年3月份为流感高峰期，其中5～14岁年龄组发病率最高(20.34%)，其余年龄组发病率相近，不同年龄组流感阳性率差异有统计学意义( χ2＝775.153， P<0.001)。男性、女性流感病毒感染无统计学差异。对16 101份ILI标本进行病毒分离培养，共分离到3 892株流感病毒，其中乙型流感病毒占比最高(37.82%)，其次为季节性H3N2型流感病毒(33.04%)、甲型H1N1型流感病毒(28.96%)。 结论:甘肃省流感病毒的流行规律较为明显，呈冬春季单峰流行，要加强对学龄期青少年儿童的流感防控。

目的:对昆明市1株人感染H9N2禽流感病毒进行全基因组测定，分析病毒基因进化及氨基酸位点变异情况。方法:通过real-time RT-PCR方法对病例标本进行流感病毒分型检测，使用MDCK细胞进行病毒分离，应用Illumina Miseq高通量测序仪进行病毒全基因组序列测定，下机数据应用CLC Genomicsworkbench 8.0软件进行拼接，使用Mega 7.0软件对序列进行比对分析和进化树构建。结果:病例咽拭子标本检测结果显示甲型H9N2亚型阳性，通过分离培养收获H9N2毒株并进行全基因组序列测定，获得分离株全基因组序列。分离株8个基因片段相似度最高序列来源不完全一致，系统进化分析显示，HA、NA和PB2基因位于G9-like分支，M基因位于G1-like分支，NS1、PB1、PA、NP均位于F/98-like分支。HA基因受体结合位点表现为I155T、H183N、Q226L突变，M1基因上表现为N30D、T215A、V15I突变，M2、NS1、PB1基因上分别存在L55F、P42S、L13P突变，PA基因上存在K356R、S409N突变。结论:昆明分离株8个基因片段来源不一致，受体结合特性趋于优先结合人类受体，致病性有增强的趋势，后续应开展更多频次的主动监测及时发现病毒分布变化和变异情况。