目的:了解肺炎支原体肺炎(MPP)患儿支气管肺泡灌洗液(BALF)中肺炎支原体(MP)耐药基因和13种呼吸道病原的分布情况。方法:回顾性选择2018年1月至2019年1月北京大学第三医院和北京大学第一医院100例MPP患儿的BALF标本，采用荧光定量PCR法检测MP核酸及其耐药基因，采用多重PCR核酸检测技术测定甲型流感病毒、甲型流感病毒H 1N 1、甲型流感病毒H 3N 2、乙型流感病毒、人副流感病毒、腺病毒、人博卡病毒、人鼻病毒、肺炎衣原体、人偏肺病毒、MP、人冠状病毒和呼吸道合胞病毒核酸，采用 χ2检验进行分析。 结果:100例BALF标本，荧光定量PCR法检测MP及耐药基因，83例(83.00%)MP阳性，其中78例(93.98%)耐药，均为23S rRNA结构域V区A2063G的点突变。多重PCR法检测13种呼吸道病原，89例(89.00%)阳性。79例(79.00%)检测到MP，其中74例(74.00%)仅检出MP，5例(5.00%)同时检出MP合并其他病原。10例(10.00%)检测出其他病原。0~4岁组病毒检出率高于>4~6岁组( P＝0.042)和>6岁组( P＝0.002)，差异均有统计学意义。 结论:MPP患儿的BALF标本绝大部分可检测到MP，耐药现象严重，以A2063G的点突变为主。少数BALF标本中可检测到其他呼吸道病原和2种或3种病原。

目的:了解河南省急性呼吸道感染(ARI)病例中人副流感病毒3型(HPIV3)血凝素-神经氨酸酶(HN)的基因特征。方法:对河南省漯河市采集的严重急性呼吸道感染(SARI)病例标本和郑州市采集的流感样病例(ILI)标本进行人副流感病毒(HPIVs)核酸检测，HPIV3检测阳性标本使用RT-PCR法进行HN基因扩增并测序，使用CExpress以及MEGA7.0软件进行序列编辑、进化树构建和基因特征分析。结果:漯河市和郑州市共采集ARI咽拭子标本374份，其中HPIV3核酸检测阳性标本20份(5.3%)，对阳性标本进行靶基因扩增后获得18条序列，经分析全部为C3亚群，其中有16条序列为C3f基因型，有2条序列为C3a基因型。18株HPIV3的HN基因序列的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.6%~100.0%和99.3%~100.0%，与原株型Wash/47885/57相比差异较大，发生了12处共同的氨基酸突变，其中H295Y、I391V、D556N和I53T是功能相关突变位点。与流行株China/BCH4210A/2014相比同源性较高，未发生共同的氨基酸突变，未发现新的功能相关突变位点。结论:河南省近年流行的HPIV3为C3亚型的C3f和C3a分支，可能建立了本土循环流行。应对HPIV3的C3亚型进行持续深入的监测，为防控HPIV3相关疾病提供科学依据。

目的:建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay，DAS-ELISA)检测呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)滴度。方法:以RSV融合前F蛋白的两种抗体AM14与D25作为捕获抗体和检测抗体，通过对其抗体浓度的优化来确定DAS-ELISA较适反应条件，并对该方法的特异性、重复性、灵敏度及适用性进行验证。结果:选择用AM14抗体作为捕获抗体，D25作为检测抗体。捕获抗体AM14较适工作浓度为20 μg/mL，检测抗体D25的稀释比例为1∶3 000。建立的DAS-ELISA与轮状病毒(rotavirus，RV)和人3型副流感病毒(human parainfluenza virus type 3，HPIV-3)无交叉反应，且不同稀释倍数的RSV病毒进行批内与批间重复试验的变异系数(coefficient of variation， CV)均<10%；不同亚型的RSV及蛋白进行试验，均能检测到病毒滴度；检测结果与CCID 50比较，可检测的稀释倍数略高。 结论:建立了检测RSV滴度的DAS-ELISA，该方法可为实验室RSV病毒滴度检测提供依据。

目的:探讨百日咳婴幼儿合并病毒感染情况及其对病情的影响。方法:对2019年1月至2020年3月汕头大学医学院第二附属医院收治的100例确诊百日咳的住院婴幼儿，采集鼻咽拭子进行包括百日咳在内的10种病原体检测，即呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒(PIV)、百日咳杆菌(BP)、人鼻病毒(HRV)、博卡病毒(HBoV)、人偏肺病毒(hMPV)、流感病毒B型(INF-B)、腺病毒、流感病毒A型和巨细胞病毒(CMV)。根据病原体检出结果分为百日咳单检出组(单检出组)和合并病毒共检出组(共检出组)，对两组患儿的临床资料进行回顾性分析，探讨临床特征的差异及对其病情的影响。结果:100例婴幼儿中，男54例(54.0%)，女46例(46.0%)，年龄分布在28 d~2岁5个月，中位年龄3.5个月。百日咳单检出56例，合并病毒共检出44例，其中合并CMV 14例(31.8%，14/44)，HRV 7例(15.9%，7/44)，PIV 7例(15.9%，7/44)，RSV 4例(9.1%，4/44)，hMPV 1例(2.2%，1/44)，CMV+HRV 8例(18.2%，8/44)，HRV+HBoV 1例(2.2%，1/44)，CMV+PIV 1例(2.2%，1/44)，CMV+PIV+INF-B 1例(2.2%，1/44)。单检出组患儿治疗前合并发绀、需要头罩中流量吸氧、收治PICU、合并重症肺炎或心肌酶异常的例数均高于共检出组( P均<0.05)，而出生月龄低于共检出组( P<0.05)。3月龄以上患儿比较临床特征时，仅发现单检出组治疗前合并发绀例数和住院天数高于共检出组( P<0.05)，其余临床特征比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:百日咳单检出组患儿需要头罩中流量吸氧、合并重症肺炎或心肌酶异常的例数均高于共检出组，其原因可能主要与月龄偏小有关。

目的:了解北京市西城区急性上呼吸道感染病例和肺炎病例呼吸道传染病病原体的分布状况及变化规律，为制定相关防治策略提供依据。方法:在北京市西城区三家哨点医院，采集门诊上感病例、肺炎病例及住院重症肺炎病例的呼吸道标本，用实时荧光PCR方法进行副流感病毒（PIV）、博卡病毒（HBoV）、鼻病毒（HRV）、冠状病毒（CoV）、流感病毒（Flu）、人偏肺病毒（HMPV）、腺病毒（AdV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、肠道病毒（EV）、肺炎支原体（MP）、肺炎衣原体（CP）11种呼吸道病原的检测。结果:2014—2020年，共调查并检测4 941例呼吸道感染病例，总阳性率31.1%。总检出率排在前三位的病原分别是Flu9.2%（455/4 941）、MP5.0%（245/4 941）、PIV4.8%（238/4 941）。5~14岁年龄组检测阳性率最高，60岁以上年龄组阳性率最低。重症肺炎病例检出率排在前三位的病原分别是PIV6.6%（82/1 241）、Flu6.2%（77/1 241）和RSV5.2%（65/1 241）。8.21%病例为两种以上病原混合感染。结论:本研究通过长期系统监测，发现北京市西城区的急性呼吸道病感染的病原体主要为Flu、MP和PIV，并初步阐明了其流行季节、人群好发年龄等流行特征，为后续制订针对性的防控措施，提供了重要的参考。

目的:探讨自动巢式多重PCR系统检测儿童重症社区获得性肺炎病原效果，了解佛山地区儿童重症社区获得性肺炎的病原感染情况。方法:选取2016年1月至2018年12月入住佛山市第一人民医院PICU的重症社区获得性肺炎患儿，采集鼻咽分泌物，运用自动巢式多重PCR检测腺病毒、冠状病毒(HKUl型、NL63型、229E型、0C43型)、人类偏肺病毒、甲型流感病毒(H1亚型、H1-2009亚型、H3亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(1型、2型、3型、4型)、呼吸道合胞病毒、百日咳杆菌、肺炎衣原体和肺炎支原体。结果:自动巢式多重PCR系统检测290份标本中，阳性246份(84.83%)。单一病原阳性样本166份，检出2种病原阳性样本60份，3种病原阳性样本17份，4种病原阳性样本3份。病毒检出阳性病例中，小于6月龄最常见病原为呼吸道合胞病毒(62.39%，73/117)；7月龄～1岁最常见病原体为人鼻病毒/肠病毒(3.48%，20/46)；1～3岁患儿最常见病原为腺病毒(37.50%，18/48)；3～6岁最常见病原为人鼻病毒/肠病毒(35.00%，7/20)；大于6岁最常见病原为流感病毒(46.67%，7/15)。腺病毒检出率每年5月份最高，呼吸道合胞病毒检出率8月份最高，流感病毒检出率7月份最高，肺炎支原体及百日咳杆菌感染全年均有散发。结论:自动巢式多重PCR系统可高效、快速、准确检测多种病原；不同年龄组重症社区获得性肺炎的常见病原体不同；不同地区因气候不同，常见病原的流行季节不同。

目的:分析北京市西城区急性呼吸道感染病原谱及流行特征，为呼吸道传染病防治策略的制定提供科学依据。方法:应用荧光PCR法，对2018年北京市西城区3家哨点医院就诊的急性呼吸道感染病例呼吸道标本进行多种病原体检测。结果:803例样本中，呼吸道感染总阳性率为28.27%（227/803）。肺炎病例和门诊病例中，下呼吸道标本的阳性率均高于上呼吸道标本（ x2=7.332， P=0.007； x2=13.698， P<0.01）。病原体感染前5位依次为流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、肠道病毒和支原体。急性呼吸道感染高峰主要集中在3月、8月和12月，不同病原体的季节特征各不相同。14岁及以下儿童副流感病毒感染阳性率较高（ x2=12.411， P<0.01）；14岁以上人群流感病毒和支原体感染阳性率较高（ x2=10.306， P=0.001； x2=6.470， P=0.011）。 结论:流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、肠道病毒和支原体为北京市西城区急性呼吸道感染的主要病原体，不同病原体有各自的季节特征，且不同年龄组病原谱不同。

目的:分析儿童急性呼吸道感染常见病毒的分布及其流行病学特征。方法:7 248例急性呼吸道感染患儿统计其呼吸道病毒检出情况，统计不同年龄段、性别、临床诊断及季节患儿呼吸道病毒检出情况。结果:7 248例急性呼吸道感染患儿中共检出呼吸道病毒感染2 015例，检出率为27.80%，其中单一呼吸道病毒感染1 977例，检出率27.28%，混合呼吸道病毒感染38例，检出率0.52%。不同年龄段急性呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、人类偏肺病毒（human metapneumovirus，hMPV）、副流感病毒（parainfluenza virus，PIV）、乙型流感病毒（influenza B virus，FluB）、腺病毒（adenovirus，ADV）、博卡病毒（human bocavirus，hBoV）、甲型流感病毒（influenza A virus，FluA）检出率差异具有统计学意义（ P<0.05）。下呼吸道感染hBoV、FluA、ADV检出率高于上呼吸道感染（ P<0.05）。RSV、PIV、hBoV、hMPV、FluA、FluB、ADV混合感染检出率不同季节存在差异（ P<0.05）。 结论:急性呼吸道感染患儿主要呼吸道病毒检出种类为RSV、PIV、hBoV、hMPV、FluA、FluB、ADV，不同年龄段、临床诊断、季节患儿呼吸道病毒种类分布存在差异。

目的:对一种六重呼吸道病毒real-time PCR试剂在儿童急性下呼吸道感染病毒病原检测中的应用效果进行评价。方法:采用多重荧光探针real-time PCR法，对下呼吸道感染患儿的300份鼻咽拭子进行常见6种呼吸道病毒检测(甲型/乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感Ⅰ型和副流感Ⅲ型病毒)，并应用液相悬浮芯片试剂进行对比检测；另外对136份免疫荧光法抗原检测阳性的下呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物标本进行验证分析。结果:300份鼻咽拭子中，该六重荧光探针real-time PCR试剂检出阳性标本173例，液相芯片法检出阳性标本159例，该real-time PCR试剂检出率高于液相芯片法。此外，在136份抗原检测阳性标本中，该试剂还检测出22例抗原法未检到的2种或2种以上病毒病原混合感染样本。结论:该多重呼吸道病毒real-time PCR试剂在儿童下呼吸道病毒病原检测中具有较高的灵敏度和特异性，在儿童下呼吸道感染的临床诊疗方面具有良好的应用价值。

目的:了解徐州市儿童急性呼吸道感染（parainfluenza virus，ARTI）中常见呼吸道病毒包括流感病毒（influenza virus，IFV）、呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、副流感病毒（parainfluenza virus，PIV）、鼻病毒（human rhinovirus，HRV）、肠道病毒（human enterovirus，HEV）、腺病毒（adenovirus，ADV）、博卡病毒（human bocavirus，HBoV）以及偏肺病毒（metapneumovirus，MPV）的流行病学和病原学特征，为临床诊治及科学防控提供依据。方法:依托徐州市流感监测哨点医院（徐州市儿童医院），采用PCR的方法对2018—2020年间共3 140例流感样病例患儿的咽或鼻咽拭子样本核酸进行常见呼吸道病毒检测。结果:26.59%（835/3 140）急性呼吸道疾病的患儿拭子样本中检出呼吸道病毒核酸，检出率由高到低依次为IFV 9.68%、RSV 5.32%、PIV 5.29%、HRV 3.63%、HEV 1.91%、ADV 1.53%、HBoV 1.02%、MPV 0.29%；病毒混合感染率为7.43%（62/835）；不同年龄段患儿阳性率差异有统计学意义（ x2=21.71， P<0.05），1~<3岁组儿童病毒总检出率最高；12—3月为病毒检出率高峰期；IFV和HEV常作为单一的致病因子感染使儿童发病。 结论:徐州市儿童病毒性急性呼吸道感染主要以IFV、RSV、PIV和HRV为主，不同时间呼吸道病毒检出率不同，流行期也有较大差异，尤其在流感流行期间其他呼吸道病毒常呈低检出率。