目的 观察加减薯蓣丸对血管性痴呆(vascular dementia,VD)伴抑郁小鼠的疗效并探究其作用机制.方法 采用双侧颈总动脉狭窄法结合慢性不可预测温和刺激复制VD伴抑郁小鼠模型,将小鼠分为假手术组、模型组、加减薯蓣丸组以及氟西汀组.采用行为学实验检测小鼠抑郁行为,免疫荧光法检测小鼠胼胝体血小板衍生生长因子受体α(platelet-derived growth factor receptor alpha,PDGFRα)、髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达水平,Western blot法检测MBP、少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)、髓鞘相关糖蛋白(myelin associated glycoprotein,MAG)、酪氨酸蛋白激酶EPH受体A4(Ephrin receptor A4,EphA4)、Ras同源基因家族成员-A(Ras homolog gene family,member A,RhoA)、轴突生长抑制因子-A(neurite outgrowth inhibitor-A,Nogo-A)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(Rho associated coiled-coil forming protein kinase,Rock)、Nogo受体(Nogo receptor,NgR)的蛋白表达水平,劳克坚牢蓝(Luxol fast bue,LFB)染色法观察胼胝体髓鞘结构,超微透射电子显微镜观察髓鞘超微结构.结果 行为学检测结果显示,加减薯蓣丸组及氟西汀组小鼠在旷场实验中活动总路程显著增加(P<0.05),糖水偏好率显著升高(P<0.05),强迫游泳实验中不动时间明显增加(P<0.05);免疫荧光染色结果显示,加减薯蓣丸、氟西汀均可增加PDGFRα、MBP荧光强度;LFB染色结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠LFB髓鞘染色缺失,存在脱髓鞘改变,加减薯蓣丸能改善VD抑郁小鼠髓鞘着色程度;Western blot法检测结果显示,与假手术组比较,模型组小鼠胼胝体中MBP、MOG、MAG表达水平显著下降(P<0.05),加减薯蓣丸组小鼠MBP、MOG、MAG表达水平显著升高(P<0.05);加减薯蓣丸组小鼠胼胝体中EphA4、RhoA、Rock、No-go-A、NgR蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论 加减薯蓣丸可能通过抑制EphA4/RhoA/Rock通路促进髓鞘再生,改善VD小鼠的抑郁状态.

"脾失健运,肾精不足"是血管性痴呆(VaD)伴抑郁发生的病理基础,"脾肾两虚,痰瘀互结,神机失用,继而生郁"是VaD伴抑郁的基本病机,现代医学从髓鞘修复角度探讨VaD伴抑郁的治疗,与中医"健运后天之脾以充养先天肾精,健脾消痰,益肾生髓,以髓养髓,醒窍开郁"的治法精神契合,是加减薯蓣丸有效治疗VaD伴抑郁的治疗法则.

薯蓣丸临床应用广泛且效果显著,著名经方大家黄煌教授对薯蓣丸的应用有独到见解,他坦言:“薯蓣丸很奇特,适应面宽广,我多用薯蓣丸治疗肿瘤,因为肿瘤是消耗性疾病,患者多有虚劳的表现,薯蓣丸由八珍汤、炙甘草汤、半个小柴胡汤以及杏仁、桔梗、防风、神曲、豆卷、白蔹组成,其中大枣和甘草的用量都比较大,且方中山药和红枣都是食物,没有有毒的药物,也没有副作用,适合常服,常服能改善患者体质,增进食欲,增加体重.”童耀辉医师的说法别开生面:“薯蓣丸中有完整的当归芍药散,近年来我参照薯蓣丸的组成,以当归芍药散加减治疗肿瘤,有效缓解了肿瘤患者的痛苦.”

目的 检测慢性脑灌注不足大鼠海马组织单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)水平的变化,探讨加减薯蓣丸对海马神经细胞损伤的影响及其作用机制.方法 采用改良双侧颈总动脉阻断法复制慢性脑灌注不足模型,应用尼氏染色检测神经细胞损伤情况,应用Western blot法检测海马区AMPK及p-AMPK表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠海马CA1区的尼氏染色较浅,神经锥体细胞数减少,海马组织p-AMPK表达水平明显升高(P＜0.05);与模型组比较,中药组与西药组大鼠海马CA1区的尼氏染色加深,锥体细胞数量增加,p-AMPK表达水平明显下降(P＜0.05);中药组与西药组大鼠海马CA1区AMPK和p-AMPK表达水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 大鼠慢性脑灌注不足损伤后,AMPK过度激活,出现海马神经细胞损伤,加减薯蓣丸可抑制海马区AMPK的激活,减轻海马神经损伤.

目的 采用氢质子磁共振波谱(1 H-magnetic resonance spectroscopy,1 H-MRS)检查结合神经心理学量表的方法,评价加减薯蓣丸对老年期痴呆患者的治疗效果.方法 收集2015年12月至2017年4月湖北省中医院脑病科及老年病科的血管性痴呆(vascular dementia,VD)及阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)肾精亏虚证患者各20例,另选认知功能正常者20例作为对照组.入选老年期痴呆患者在内科治疗的基础上予以加减薯蓣丸治疗.对老年期痴呆患者治疗前后及对照组受试者进行简易精神状态评价量表(mini-mental state examination,MMSE)、日常生活能力量表(activities of daily living,ADL)、痴呆证候分型量表(syndromes differentiation scale for dementia,SDSD)评估及1 H-MRS检查.结果 加减薯蓣丸显著升高VD及AD患者降低的MMSE评分(P＜0.05),降低其升高的SDSD评分(P＜0.05),但对ADL评分的改善作用无统计学意义(P＞0.05).1H-MRS检查表明,加减薯蓣丸显著升高VD和AD患者双侧额叶下降的N-乙酰天门冬氨酸(N-aspart-acetyl,NAA)/肌酸(creatine,Cr)水平(P＜0.05),而降低双侧额叶升高的胆碱复合物(choline,Cho)/Cr作用无统计学意义(P＞0.05).加减薯蓣丸对VD患者和AD患者MMSE、SDSD、ADL评分和双侧额叶NAA/Cr、Cho/Cr的作用差异无统计学意义(P＞0.05).结论 加减薯蓣丸改善轻中度老年期痴呆患者认知功能的机制可能与促进损伤的神经细胞修复有关.

[目的]探讨加减薯蓣丸(Modified Dioscorea Pills,MDP)对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠学习记忆功能及海马突触再生与突触可塑性的影响.[方法]40只SD大鼠按照随机数字表分为手术组28只及假手术组12只.手术组采用改良双血管阻断(2-vessels occlusion,2-VO)法建立VD模型,术后按随机数字表再分为药物组12只、模型组11只,假手术组仅分离颈总动脉,不结扎.药物组用MDP浓缩汤剂(10g/kg.d)灌胃45d,模型组和假手术组以0.9％氯化钠溶液灌胃,剂量、疗程同药物组.采用水迷宫行为学实验评价各组大鼠智能差异,免疫组化测定海马CA1区突触素(synaptophysin,SYP)、突触后密度蛋白-95(postsynaptic density protein-95,PSD-95)及微管相关蛋白-2(microtubule associated protein-2,MAP-2)表达;透射电镜观察突触超微结构的改变.[结果]与模型组比较,药物组大鼠水迷宫行为学表现明显改善;药物组大鼠海马CA1区SYP、PSD-95、MAP-2蛋白表达明显升高,与模型组及假手术组比较均有统计学差异(P＜0.01);电镜下可见模型组大鼠海马CA1区突触间隙模糊,突触前后膜肿胀、空化,难以区分突触前后膜;突触小泡减少,线粒体固缩,内质网脱颗粒.药物组突触数量丰富,结构基本完整,线粒体正常、突触小泡较为丰富.[结论] MDP通过上调突触相关蛋白的表达保护缺血条件下的神经突触,并增强突触可塑性,促进突触再生,从而改善突触的信息传递,是其治疗VD取得临床良效的机制之一.

目的:探讨加减薯蓣丸对轻、中度阿尔茨海默病(AD)的临床疗效及可能机制.方法:将96例轻、中度AD患者随机分为治疗组(加减薯蓣丸浓缩汤剂,15 mL/次,1日2次)和对照组(盐酸多奈哌齐片,5 mg/次,睡前1次),每组48例,两组疗程均为12周.于治疗前后对患者进行神经心理测验量表及AD证候要素量表(AD-PES-11)评定.另收集同期认知功能正常的老年健康体检者(48例)为正常组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测两组治疗前后及正常组血清微小核糖核酸(microRNA,miRNA,miR),包括miR-132,miR-34a,miR-9,let-7i水平.采用Spearman相关系数分析法对神经心理测验量表评分,AD-PES-11积分与miRNAs表达之间进行相关性分析.结果:与本组治疗前比较,两组治疗后简易精神状态量表(MMSE)评分明显升高,日常生活能力量表(ADL)评分显著降低(P＜0.01);与本组治疗前比较,治疗组治疗后量表总积分、肾虚、脾虚、髓减、痰浊、血瘀积分明显降低(P＜0.05,P＜0.01),对照组治疗后脾虚积分明显升高(P＜0.05);与对照组治疗后比较,治疗组量表总积分、肾虚、脾虚、痰浊、血瘀积分显著降低(P＜0.01);与正常组比较,两组治疗前血清miR-132,miR-34a,let-7i表达明显升高,miR-9表达显著降低(P＜0.01);与本组治疗前比较,两组治疗后血清miR-132,miR-34a,let-7i表达明显降低,miR-9表达明显升高(P＜0.05,P＜0.01).相关性分析显示,miR-34a表达水平与肾虚、痰浊积分及总积分呈正相关(P＜0.01),miR-9表达水平与痰浊积分及总积分呈负相关(P＜0.05,P＜0.01).结论:加减薯蓣丸能有效改善AD患者认知功能和日常生活能力,改善中医肾虚、脾虚、髓减、痰浊、血瘀状态,其机制可能与调节血清miR-132,miR-34a,let-7i,miR-9表达有关.

目的 探讨轻、中度阿尔茨海默病患者血清微小RNA(microRNA,miRNA)表达及加减薯蓣丸对其影响.方法 检索Pubmed和中国知网数据库中研究AD患者外周血miRNAs文献,选择多篇(≥2篇)文献中一致性差异表达的miRNAs(至少1篇以血清为样本)作为目标miRNAs进行研究.56例轻、中度阿尔茨海默病患者给予加减薯蓣丸浓缩汤剂口服,每日2次,每次15 mL,疗程12周.另收集同期认知功能正常的老年健康体检者56例为对照组.采用荧光定量PCR法检测AD患者治疗前后及对照组血清目标miRNAs水平.结果 与对照组比较,AD组治疗前血清miR-107、miR-29a、miR-29b、miR-181c、miR-125b、miR-135a、miR-342-3p表达明显降低,miR-146a表达明显升高(P＜0.01);与治疗前比较,AD组治疗后血清miR-107、miR-29a、miR-29b、miR-181c、miR-125b、miR-342-3p表达明显升高(P ＜0.05～0.01),miR-146a表达明显降低(P＜0.01).结论 通过检测血清miR-107、miR-29a、miR-29b、miR-181c、miR-125b、miR-135a、miR-342-3p及miR-146a表达水平可能有助于AD患者早期诊断;加减薯蓣丸可能通过调节AD患者血清miR-107、miR-29a、miR-29b、miR-181c、miR-125b、miR-342-3p、miR-146a表达水平而发挥治疗AD的作用.

目的 观察加减薯蓣丸对血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马区糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)表达的影响,探讨其防治VD的机制.方法 将40只SPF级雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、西药组和中药组,每组10只.采用改良双侧颈总动脉结扎法复制VD模型.中药组、西药组分别给予加减薯蓣丸、尼莫地平灌胃,正常组和模型组均给予生理盐水灌胃,均连续灌胃6周.光镜下观察大鼠海马神经细胞的组织形态学变化,Western-blot法检测海马区GSK-3β表达水平,免疫荧光法检测海马区Cyclin D1表达水平.结果 光镜下可见中药组、西药组VD大鼠海马神经细胞病变较模型组明显减轻.Western blot和荧光免疫法显示,中药组、西药组VD大鼠海马区GSK-3β水平较模型组显著降低(P＜0.05),海马区Cyclin D1表达水平较模型组明显升高(P＜0.05);中药组与西药组GSK-3β、Cyclin D1表达水平比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 加减薯蓣丸可能通过激活Akt通路抑制GSK-3β表达,上调Cyclin D1表达,从而保护VD大鼠海马神经细胞.

目的 研究脑慢性低灌注(CCH)条件下海马神经胶质重构及加减薯蓣丸(MDP)干预,阐明CCH对海马神经胶质的影响及MDP作用机制.方法 40只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组及药物组.采用改良的双血管阻断(2-VO)法制作CCH模型,药物组以加减薯蓣丸浓缩汤剂(湖北省中医院制剂室提供)进行灌胃45 d(10 g· kg-1·d-1),模型组和假手术组以生理盐水灌胃,剂量、疗程同药物组.疗程结束后采用水迷宫行为学实验对各组大鼠进行智能测定;取大鼠海马进行病理学观察及免疫组化测定Olig 2及GFAP表达,RT-PCR测定GAP 43mRNA表达.结果 与模型组相比,药物组可明显降低定位航行逃避潜伏期(P＜0.05),增加跨越平台次数(P＜0.01);与假手术组相比,模型组海马组织辐射层、分子层、腔隙层纤维结构疏松,排列紊乱,星型胶质细胞明显增生;药物组海马辐射层,分子层及腔隙层纤维排列致密,星型胶质细胞增生明显减少,少突胶质细胞明显增生;药物组GFAP平均光密度值较模型组低,但较假手术组高,均达到极显著性差异(P＜0.01);药物组Olig-2平均光密度值较模型组高,较假手术组低,达到显著性差异(P＜0.01,P＜0.05).假手术组、模型组、药物组GAP-43mRAN相互之间比较均达到统计学差异(P＜0.01及P＜0.05).结论 CCH条件下海马神经胶质发生重构,表现为轴突丢失及髓鞘化程度低、胶质增生,可能是大鼠学习记忆受损的原因之一;加减薯蓣丸通过促进轴突的生成及髓鞘化,抑制星型胶质细胞增生,从而保持持神经纤维的正常有序联系,可能是其改善CCH状态下学习记忆能力的机制之一.