目的:探讨真核翻译起始因子2B3(EIF2B3)基因在肝细胞癌(HCC)中的表达及临床意义。方法:采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测30例新鲜HCC标本中EIF2B3 mRNA相对表达含量。采用免疫组织化学过氧化物酶标记的链酶卵白素(SP)法检测76例石蜡HCC标本EIF2B3表达，探讨其与HCC临床病理学资料及预后的关系。组间比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织比较，在肝癌组织EIF2B3 mRNA表达下调。76例HCC中，EIF2B3在癌组织的阳性表达率和癌旁组织中的阳性表达率分别为25.0%和82.0%( t＝6.530， P<0.05)。EIF2B3蛋白与肿瘤结节数目等临床病理特征密切相关。EIF2B3蛋白低表达组的HCC患者总体生存率与无瘤生存率明显低于EIF2B3高表达组的患者(Log-rank χ2＝10.325， P<0.001)。 结论:EIF2B3在HCC中发挥抑癌基因的作用，且对抑制HCC的复发转移有重要作用。

目的:探究肺泡表面活性蛋白A(surfactant protein A，SP-A)能否通过调控滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cell，Tfh)的分化参与调节哮喘病理过程。方法:6～8周的雌性野生型(wild-type，WT)及SP-A基因敲除( Sp- a-/-)型C57BL/6J小鼠，利用鸡卵白蛋白(ovalbumin，OVA)和氢氧化铝免疫构建哮喘模型(WT哮喘小鼠：8只， Sp- a-/-哮喘小鼠：8只)，并分别设立磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline，PBS)处理的对照组(WT对照小鼠：6只， Sp- a-/-对照小鼠：4只)。HE染色观察小鼠肺部病理改变，流式细胞术检测脾脏和纵隔淋巴结中Tfh细胞及其亚群的组成，Tfh亚群根据其胞内干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白细胞介素(interleukin，IL)-17和IL-4的表达情况，分别定义为IFN-γ ＋Tfh、IL-17 ＋Tfh和IL-4 ＋Tfh细胞。酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)用于检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)中免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)E的水平。将T-B细胞共培养，检测培养体系中IgE抗体的水平。在体外，给予人肺泡表面活性蛋白A(human SP-A，hSP-A)处理并设立对照组，培养5 d后检测体系中Tfh亚群的分布情况。 结果:OVA激发后小鼠BALF中和肺组织内有大量炎症细胞浸润，WT及 Sp- a-/-哮喘小鼠BALF中炎症细胞总数显著高于其相对应对照组小鼠[(11.38±1.43)×10 4比(6.40±0.68)×10 4，(14.38±1.52)×10 4比(6.25±0.48)×10 4， t值分别为2.61和3.64， P值均<0.05]，差异具有统计学意义。另外，OVA激发后，WT和 Sp- a-/-哮喘小鼠BALF中IgE的水平明显高于其相应的对照组小鼠[(16.85±2.50)pg/mL比(4.94±2.01)pg/mL，(25.52±3.17)pg/mL比(8.05±2.90)pg/mL， t值分别为3.63和3.58， P值均<0.05)]，且 Sp- a-/-哮喘小鼠BALF中IgE抗体的水平明显高于WT哮喘小鼠( t＝2.20， P<0.05)，差异具有统计学意义。进一步研究显示，Tfh亚群组成在哮喘模型的WT和 Sp- a-/-小鼠中存在不同，表现为 Sp- a-/-哮喘小鼠IL-4 ＋Tfh细胞比例高于WT哮喘小鼠，IFN-γ ＋Tfh细胞比例降低，但差异并不具有统计学意义( P>0.05)。Tfh细胞的亚群组成发生变化，其中IL-4 ＋Tfh比例与肺泡灌洗液中IgE水平呈正相关( r＝0.50， P<0.05)，而IFN-γ ＋Tfh比例与肺泡灌洗液中IgE水平呈负相关( r＝-0.56， P<0.05)。脾脏中IFN-γ ＋Tfh/IL-4 ＋Tfh的比值在 Sp- a-/-哮喘小鼠中显著低于WT小鼠( t＝2.31， P<0.05)，且与肺泡灌洗液中IgE呈负相关( r＝-0.55， P<0.05)。T-B细胞共培养实验发现， Sp- a-/-小鼠脾脏来源Tfh细胞具有更强的辅助B细胞合成IgE抗体的能力( t＝3.18， P<0.05)。后续的体外T细胞刺激实验证实，hSP-A处理可以上调培养体系中IFN-γ ＋Tfh细胞比例与IFN-γ ＋Tfh/IL-4 ＋Tfh的比值( t值分别为6.34和3.16， P值均<0.05)，但并未明显改变IL-4 ＋Tfh细胞比例( P>0.05)。 结论:异常的Tfh细胞亚群分布与哮喘的发生相关，SP-A可能通过稳定Tfh细胞亚群的分布，从而缓解哮喘气道炎症反应。

目的:探讨下肢静脉曲张溃疡创面病原菌感染及耐药性变迁并分析感染对血管内皮生长因子(VEGF)/Notch基因表达的影响。方法:回顾性分析2011年1月至2020年12月承德医学院附属医院诊治的412例下肢静脉曲张溃疡患者临床资料，分为2011年1月至2015年12月组(A组)和2016年1月至2020年12月组(B组)。分析两组患者病原检出分布及耐药状况。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫组织化学链霉卵白素-生物素法(SP)法分别检测VEGF和Notch基因mRNA及蛋白表达。两组间均数比较采用 t检验；计数资料比较采用 χ2检验或Fisher精确概率法。 结果:A组和B组患者在革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌检出率的差异无统计学意义( χ2＝0.100、0.093、0.652， P>0.05)。B组患者金黄色葡萄球菌对青霉素G及头孢唑林耐药率显著高于A组患者(100.00%比70.59%、66.67%比29.41%)，差异有统计学意义( χ2＝9.176、13.438， P<0.05)。B组患者表皮葡萄球菌对克林霉素及头孢唑林耐药率显著高于A组患者(69.23%比36.36%、84.62%比36.36%)，差异有统计学意义( χ2＝7.654、9.533， P<0.05)。B组患者铜绿假单胞菌对氨苄西林、头孢唑林及头孢吡肟耐药率显著高于A组患者(93.10%比64.00%、82.76%比56.00%、58.62%比16.00%)，差异有统计学意义( χ2＝8.778、10.632、9.125， P<0.05)。B组患者大肠埃希菌对氨苄西林、头孢唑林、哌拉西林、头孢吡肟耐药率显著高于A组患者(84.85%比57.14%、75.76%比42.86%、48.48%比19.05%、36.36%比9.52%)，差异有统计学意义( χ2＝8.679、9.127、7.235、11.763， P<0.05)。感染患者VEGF和Notch基因mRNA相对表达量和蛋白表达阳性率均显著高于非感染患者(VEGF和Notch基因mRNA相对表达量分别为0.64±0.09比0.25±0.05、0.58±0.08比0.19±0.04，蛋白表达阳性率分别88.07%比76.38%、80.00%比63.78%)，差异有统计学意义( t/ χ2＝15.652、12.456、7.864、9.142， P<0.05)。 结论:下肢静脉曲张患者溃疡创面感染病原菌检出率及抗菌药物耐药率较高，溃疡创面VEGF /Notch信号通路表达异常与感染迁延有关。

目的:探讨特异性免疫治疗(SIT)对哮喘小鼠肺部炎症反应的影响及其机制.方法:小鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、SIT组及地塞米松组.模型组、SIT组及地塞米松组均建立哮喘小鼠模型,建模激发阶段后SIT组注射1 mg的卵白蛋白(OVA),地塞米松组灌胃0.075 mg/mL 地塞米松溶液,其余小鼠注射等体积的PBS溶液,后进入雾化阶段.采用肺功能仪检测气道反应;瑞氏-吉姆萨染色观察肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞;ELISA检测BALF中细胞因子IL-13、IL-4、IL-5及干扰素-γ(IFNγ);H-E染色观察肺组织病理形态;过碘酸雪夫(PAS)染色观察肺气道上皮杯状细胞;流式细胞术检测肺组织中IFNγ及IL-4占比.结果:在6.25、12.50、25.00 μg/kg及50.00 μg/kg的乙酰胆碱作用下,模型组小鼠气道反应高于对照组,SIT组及地塞米松组的气道反应均低于模型组,但SIT组及地塞米松组间差异无统计学意义.与对照组相比,模型组小鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞(%)、嗜酸性粒细胞(%)、IL-4、IL-5、IL-13、气道上皮杯状细胞、辅助型T细胞2(Th2)均升高,IFNγ降低;与模型组相比,SIT组BALF中细胞总数、中性粒细胞(%)、嗜酸性粒细胞(%)、IL-4、IL-5、IL-13、气道上皮杯状细胞降低,IFNγ升高,SIT组与地塞米松组间差异无统计学意义.对照组小鼠肺泡及气道结构规整,气道壁较薄,管腔无狭窄;模型组小鼠肺组织结构破坏显著,气道壁较厚,肺泡结构破坏显著,炎症浸润明显且血管周围存在水肿.SIT组及地塞米松组小鼠肺组织炎症浸润改善,血管水肿程度降低,管腔狭窄缓解.结论:SIT可缓解哮喘小鼠气道高反应性,抑制BALF中炎症细胞及炎症因子活性,通过抑制气道上皮杯状细胞增生而改善通气,其机制与改善肺组织中辅助型T细胞1/辅助型T细胞2免疫失衡相关.

目的 探究肾素—血管紧张素系统在哮喘患者肠道微生态中的作用.方法 将20只Ba1b/c雌性小鼠随机分为对照组、哮喘组、抗生素组和鼠李糖乳酪杆菌(LGG)组,每组5只.通过卵白蛋白致敏并激发的方法建立哮喘小鼠模型,小鼠饮用水中添加新鲜广谱抗菌药物进行肠道菌群耗竭.采用苏木精—伊红染色观察各组小鼠肺组织的病理变化;流式细胞术检测脾中Th1/Th2比例;RT-PCR法检测肺组织中GATA3、T-bet、ACE、ACE2、AngⅡ、AT1R、AT2R 的 mRNA 表达以及细胞因子受体 IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ的mRNA表达水平;收集粪便样本进行16S rRNA基因高通量测序,分析肠道菌群组成与多样性.结果 与对照组相比,哮喘组小鼠气道炎症程度显著增加;脾脏中Th1/2比例升高;肺组织中炎症因子受体 IL-4、IL-5、IL-13 mRNA 表达升高,IFN-γ mRNA 表达降低,GATA3、ACE、AngⅡ、AT1R、AT2R 的mRNA表达升高,T-bet、ACE2mRNA表达降低;肠道微生物中门、纲、目、科、属、种水平无显著差异.相比于哮喘组,抗生素组与LGG组均能减轻哮喘小鼠气道炎症,抑制ACE/AngⅡ/AT1R轴,但LGG组效果更为显著,且肠道菌群多样性程度更高.结论 补充LGG可以保护肠道微生态的平衡,其产生的代谢物可能经血液循环,通过抑制ACE/AngⅡ/AT1R轴,抑制Th2相关细胞因子的释放,对哮喘产生治疗作用,其中的具体机制仍需进一步验证.

目前皮肤小神经纤维蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)染色主要为免疫组化中的超敏二步法和卵白素-生物素复合物(avidin biotin complex,ABC)法[1-2],超敏二步法灵敏度较高,而ABC法在神经组织染色方面也具优势,还未见对两种方法的比较研究.本实验室通过对两种PGP9.5免疫组化染色结果的统计学分析及光镜下观察,对比两种染色方法的优缺点.

目的 探究吴茱萸碱对哮喘模型大鼠炎症反应及上皮细胞凋亡的影响及潜在机制.方法 将SD大鼠分为对照组、模型组、吴茱萸碱低剂量组(10 mg/kg)、吴茱萸碱高剂量组(20 mg/kg)、地塞米松组(阳性对照,0.5 mg/kg)、表皮细胞生长因子(EGF)组[丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激活剂,10 μg]、吴茱萸碱高剂量+EGF组(20 mg/kg吴茱萸碱+10 μg EGF),每组10只.除对照组外,其余各组大鼠以10%卵白蛋白(OVA)-氢氧化铝混合液3点注射致敏联合2%OVA雾化液吸入激发的方式建立哮喘模型.检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中的炎症细胞(巨噬细胞、淋巴细胞)数,观察大鼠肺组织的病理变化,检测大鼠肺组织中气道上皮细胞凋亡情况、血清炎症因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素6、白细胞介素4)水平、通路相关蛋白[p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、信号转导及转录激活因子1(STAT1)]及凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)]的表达水平.结果 与对照组比较,模型组大鼠肺组织可见支气管黏膜水肿、肺泡间隔增厚和大量炎症细胞浸润,炎症细胞数显著增多;气道上皮细胞凋亡率、炎症因子水平、p-38 MAPK/p-38 MAPK和Bax、STAT1蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2蛋白表达水平和Bcl-2/Bax均显著降低(P＜0.05).与模型组比较,吴茱萸碱低、高剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理改变均有不同程度缓解,上述各指标均显著逆转,而EGF组上述指标的变化趋势则相反(P＜0.05);EGF能显著减弱高剂量吴茱萸碱对哮喘大鼠炎症反应的改善作用(P＜0.05).结论 吴茱萸碱可减轻哮喘大鼠炎症反应并减少气道上皮细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p38 MAPK/STAT1信号通路有关.

目的 基于文献挖掘探讨紫癜性肾炎动物模型的造模特点,为制备规范化的紫癜性肾炎动物模型提供参考.方法 通过计算机检索中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed中英文数据库中相关研究文献,获取近 20 年紫癜性肾炎动物实验文献,将实验动物种类、造模方法、给药剂量、给药周期、成模标准及检测指标进行人工筛选,应用Microsoft Excel 2021 软件建立数据库并进行统计分析,运用SPSS Modeler 18.0 对高频指标进行关联规则分析并运用Cytoscape 3.6.1 软件对关联网络图进行可视化升级.结果 归纳总结符合纳入标准的 106 篇文献,建立紫癜性肾炎动物模型多选用SD大鼠和KM小鼠,造模方式多选用药源性诱导,造模药物以牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)+脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)+蓖麻油、卵白蛋白(ovalbumin,OVA)+弗氏完全佐剂、麦胶蛋白+印度墨水、牛血清白蛋白+葡萄糖菌肠毒素B(staphylococcus enterotoxin B,SEB)复刻紫癜性肾炎吻合度较高的动物模型,周期一般在5～14 周,成模标准多选用皮肤紫癜,尿红细胞数增多,尿蛋白阳性,肾组织可见肾小球系膜增生及以免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)为主的免疫复合物沉积于小血管表示造模成功.检测指标共涉及 36 个医学指标,其中肾及尿液相关的检测指标 23 个,血液相关检测指标 9 个,其中使用频率≥10%的有 24h尿蛋白定量、白细胞介素、肾病理、尿红细胞计数、IgA及循环免疫复合物(circulation immune complex,CIC)、肌酐(creatinine,Cr)等 10 个指标,对高频指标进行聚类分析,结果表明多采用24h尿蛋白定量-白细胞介素-肾病理-尿红细胞数-IgA综合评价模型.结论 现有的紫癜性肾炎动物实验多选用SD雄性大鼠和KM雌性小鼠,造模方式多采用药源性诱导,其中瘀热证复合IgA肾病法(病证结合法)具有重复性强、成模率高的优点,可为HSPN动物实验模型选择提供参考.

目的 探讨固本防哮饮防治支气管哮喘缓解期慢性气道炎症的可能作用机制.方法 36只雌性Balb/c小鼠随机分为正常组,模型组,固本防哮饮低、中、高剂量组,孟鲁司特钠组,每组6只.除正常组外,其余各组小鼠采用卵白蛋白联合呼吸道合胞病毒诱导建立支气管哮喘缓解期小鼠模型.造模后固本防哮饮低、中、高剂量组分别给予固本防哮饮12、24、36 g/(kg·d)灌胃,孟鲁司特钠组给予孟鲁司特钠颗粒2.6 mg/(kg·d)灌胃,正常组、模型组小鼠给予双蒸水20 ml/(kg·d)灌胃,均每天1次,共28天.检测小鼠肺组织白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)水平;HE染色观察肺组织病理并进行炎症评分;DHE染色观察肺组织活性氧(ROS)水平;检测肺组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V活性;检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)及三磷酸腺苷(ATP)水平;Western blot法检测小鼠肺组织中磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)及cAMP应答元件结合蛋白(CREB)蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组小鼠肺组织病理结果显示气道周围炎症细胞增多,炎症评分升高;DHE染色显示ROS水平升高,肺组织IL-4、IL-5水平升高;血清SOD、CAT及ATP水平降低,MDA水平升高;肺组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V活性降低,p-AMPK、Nrf2、CREB蛋白表达降低(P＜0.05).与模型组比较,固本防哮饮各剂量组及孟鲁司特钠组小鼠肺组织炎症细胞减少,炎症评分降低;肺组织ROS及IL-4、IL-5水平降低;血清CAT及ATP水平升高,MDA水平降低;肺组织线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ活性及CREB蛋白表达升高(P＜0.05).与固本防哮饮高剂量组比较,固本防哮饮中剂量组MDA水平降低(P＜0.05).固本防哮饮中剂量组肺组织线粒体呼吸链复合物V活性较孟鲁司特钠组升高,固本防哮饮中、高剂量组肺组织线粒体呼吸链复合物Ⅳ活性较固本防哮饮低剂量组升高(P＜0.05).结论 固本防哮饮能够抑制支气管哮喘缓解期模型小鼠肺组织氧化应激,改善线粒体功能,缓解慢性气道炎症,其作用机制可能与激活肺组织AMPK/Nrf2/HO-1信号通路有关.

目的 探讨木犀草素(Lut)对变应性鼻炎(AR)大鼠磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响.方法 SPF级雄性大鼠,随机取 12 只SD大鼠作为对照组,其余大鼠通过腹腔注射卵白蛋白抗原佐剂混悬液及卵白蛋白溶液滴鼻构建AR模型.将造模成功的大鼠随机平分为AR组、Lut组(1 mg/kg Lut)、740 Y-P组(10 mg/kg 740 Y-P)、Lut+740 Y-P组(1 mg/kg Lut+10 mg/kg 740 Y-P),每组 12 只.观察大鼠打喷嚏、抓鼻子以及流鼻涕情况;酶联免疫吸附(ELISA)检测炎性因子水平;流式细胞术检测Th1/Th2 水平;HE染色检测鼻粘膜组织病理变化;Western blot检测T-bet、GATA-3 以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达.结果 对照组大鼠鼻粘膜组织结构正常,与对照组相比,AR组鼻黏膜组织上皮紊乱、细胞剥落、固有层嗜酸性粒细胞浸润、腺体肿胀和黏膜下血管充血,行为学评分、IL-4、IL-13 和OVA-sIgE水平、Th2 水平、GATA-3、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、mTOR蛋白水平显著增加(P<0.05),INF-γ水平、Th1 水平、T-bet蛋白水平显著降低(P<0.05);与AR组相比,Lut组大鼠嗜酸性粒细胞浸润减少,上皮排列有序,鼻粘膜细胞剥落减少,行为学评分、IL-4、IL-13 和OVA-sIgE水平、Th2 水平、GATA-3、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、mTOR蛋白水平显著降低(P<0.05),INF-γ水平、Th1 水平、T-bet蛋白水平显著升高(P<0.05),而740 Y-P组结果与Lut组趋势相反(P<0.05);740 Y-P减弱了Lut对AR大鼠的治疗效果.结论 Lut可能通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路对AR大鼠起到改善作用.