[背景]2016年6月福建省海水鱼类苗种繁育科研中试基地养殖的双斑东方鲀出现皮肤溃烂症,病鱼特征为:游动缓慢,停止摄食,口角、表皮、鳍条溃烂,肾脏、脾脏充血严重.[目的]对发生皮肤溃烂症双斑东方鲀病原进行鉴定,以期为该疾病有效防治提供技术支撑.[方法]从濒死病鱼肾脏、脾脏和病灶部位肌肉组织分离出优势菌株,经人工肌肉注射感染证实其为致病菌.经菌株形态学、生理生化特征分析、16S rRNA基因序列分析和系统发育树构建等手段综合鉴定并进行药敏分析.[结果]从患病鱼体脾脏分离得到一株优势菌株SBDFT-1#,人工感染实验证实为致病菌.结合形态、生理生化和分子生物学鉴定确定该菌为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi),该菌为革兰氏阴性菌,极生单鞭毛,呈短杆状,菌体大小0.9×2.0 μm.该菌株在2216E平板培养基菌落呈乳白色,边缘透明,中间凸起;在TCBS培养基菌落呈黄色,边缘整齐,中央隆起.该菌对苯唑西林、头孢噻肟、氧氟沙星、链霉素、复方新诺明、多粘菌素B等14种抗生素敏感,对氨苄西林、青霉素、四环素、麦迪霉素等9种抗生素耐药.[结论]哈维氏弧菌是海水养殖经济鱼类的常见致病菌,但从患病双斑东方鲀体内分离出属首次报道,对防治双斑东方鲀皮肤溃烂症具有积极的指导意义.

河豚鱼皮中富含胶原蛋白,是一种优质的胶原多肽制备原料.鱼皮的精深加工不仅能减缓资源的浪费也能扩大我国河豚鱼的加工模式.本研究以双斑东方鲀鱼皮为实验对象,通过单因素实验和正交实验制备得到双斑东方鲀鱼皮多肽(Fugu bimaculatus collagen peptide,FBCP)并对其功效性及皮肤刺激性进行了研究.结果 显示,碱性蛋白酶制备FBCP的最佳工艺条件为固液比1∶10、酶解温度50℃、加酶量8000 U/g、酶解pH值9.0、酶解时间4h.在此条件下,FBCP的肽得率为39.65％.利用超滤膜将胶原多肽提取液分离成不同分子量的四种组分,分别为FBCP1(Mw＜1 kDa)、FBCP2(1 kDa＜ Mw ＜5 kDa)、FBCP3(5 kDa＜ Mw＜ 10 kDa)和FBCP4(Mw＞ 10 kDa).吸湿保湿试验中,FBCP1组分显示出优于其它组分的吸湿和保湿性能.体外抗氧化实验结果表明,FBCP1自由基清除活性最好,其对超氧阴离子O2-·、羟基自由基·OH和DPPH的IC50分别为1.659、5.582和1.801 mg/mL.多次皮肤刺激和急性眼刺激实验表明,涂抹高达50％ (W/V) FBCP对受试兔皮肤及兔眼均无刺激性.综上所述,FBCP具有良好的抗氧化和保湿功效且对皮肤和眼睛无刺激性,可为其在化妆品中的应用提供基础参考.

本研究利用MISA软件对四种河鲀全基因组中的微卫星进行筛选并分析.结果如下:在红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)(391.49 Mb)、菊黄东方鲀(T.flavidus)(366.29 Mb)、双斑东方鲀(T.bimaculatus)(371.68 Mb)及黑青斑河鲀(Tetraodon nigroviridis)(342.40 Mb)全基因组中,分别筛选出142 885个、135 009个、147 549个和179 703个完整型微卫星.相对丰度分别为365个/Mb,369个/Mb,397个/Mb和525个/Mb.微卫星总长度分别为2 876 322 bp,2 689 710 bp,3 140 445 bp 和3 615 069 bp,分别占基因组序列总长度的0.73％,0.73％,0.84％和1.06％.在1～6个不同碱基重复类型完整型微卫星中,四种河鲀的6种碱基类型数目排序是一致的.均是单碱基重复数目最多,然后依次是二碱基、三碱基、四碱基、五碱基和六碱基.其中AC,A,C,AG,AGG,AT,AAT和AAC是四种河鲀共有的常见核心重复类别.东方鲀属(Takifugu)三种河鲀基因组微卫星分布特征极为相似,分析红鳍东方鲀和双斑东方鲀的遗传距离可能更为接近.鲀属(Tetraodon)黑青斑河鲀与其他三种东方鲀属河鲀除部分微卫星特征相似外,在微卫星总数、微卫星相对丰度和密度、部分碱基类型数目及类别方面和东方鲀属差距较大.这可能与两属鱼类地理分布及进行滑动复制的碱基组成有关,推测东方鲀属和鲀属基因组可能具有独特的进化机制.本研究为多种河鲀基因组特征分析、多种河鲀微卫星引物设计、不同属种河鲀遗传距离及亲缘关系的探究等奠定了基础.