目的:探讨双氢睾酮和羟基氟他胺（以下称为DH）最佳配比，构建雄激素及其拮抗剂双重释放系统，分析该系统在小鼠Ⅲ度烧伤创面修复中的应用效果。方法:该研究为实验研究。取HaCaT细胞，按随机数字表法（分组方法下同）分为空白组（不加药物培养）、低基线组、中基线组、高基线组，对后3组细胞均分别加用3种配比的DH培养。中配比下，从低到高3个基线组中双氢睾酮质量依次为1.4、2.8、4.0 μg，羟基氟他胺质量依次为1.2、1.6、2.0 μg，以此为基准，小配比下，双氢睾酮质量减少1/2，羟基氟他胺质量增加1/2；大配比下，双氢睾酮质量增加1/2，羟基氟他胺质量减少1/2。培养2 d，采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平（样本数为4）。取16只6~8周龄雄性BALB/c小鼠，于其背部制备Ⅲ度烧伤创面后，分为空白组、小配比组、中配比组和大配比组（每组4只小鼠），伤后7 d于后3组小鼠创面局部滴加含不同配比DH的生理盐水［从小到大3个配比组中DH总量分别为127.5、165.0、202.5 μg，双氢睾酮与羟基氟他胺质量比（以下称为药物质量比）分别为8∶9、8∶3、8∶1］，之后每48小时重复给药1次，直至伤后27 d；对空白组小鼠创面于前述时间点滴加生理盐水。观察伤后0（即刻）、7、14、21、28 d创面愈合情况并计算伤后7、14、21、28 d创面愈合率（样本数为4）；伤后28 d，取创面组织，行苏木精-伊红染色后观察再上皮化情况，行Masson染色后观察胶原纤维情况并分析胶原纤维占比（样本数为3）。取20只6~8周龄雄性BALB/c小鼠，于其背部制备Ⅲ度烧伤创面后，分为普通支架组和小比例支架组、中比例支架组、大比例支架组（每组5只小鼠），伤后7 d开始对创面分别持续外敷运用静电纺丝技术制备的不含药物的聚己内酯支架和含药物质量比为1∶3、1∶1、3∶1的DH的聚己内酯支架（即雄激素及其拮抗剂双重释放系统，DH总量均约为1.7 mg）直至实验结束。同前动物实验于相同时间点行组织病理学分析（样本数为3）；伤后7、14 d，收集创面分泌物，通过16S核糖体RNA高通量测序分析菌群相对丰度（样本数为3）。结果:培养2 d，在小配比下，低基线组、高基线组HaCaT细胞增殖水平均显著高于空白组（ P<0.05）。随着伤后时间的延长，4组小鼠创面均不断缩小。伤后14 d，大配比组小鼠创面愈合率为72.5%（61.7%，75.1%），与空白组的53.3%（49.5%，64.4%）相近（ P>0.05）；小配比组与中配比组小鼠创面愈合率分别为74.2%（71.0%，84.2%）和70.4%（65.1%，74.4%），均显著高于空白组（ Z值均为-2.31， P<0.05）。伤后21 d，小配比组小鼠创面愈合率显著高于空白组（ Z=-2.31， P<0.05）。伤后28 d，3个配比组小鼠创面完全再上皮化且表皮均较空白组厚；与空白组比较，3个配比组小鼠创面组织中胶原纤维含量均更多且排列更有序，小配比组和大配比组小鼠创面组织中胶原纤维占比均明显增大（ P<0.05）。伤后28 d，普通支架组小鼠创面部分上皮化，3个比例支架组小鼠创面基本完全上皮化，其中小比例支架组小鼠创面表皮最厚；小比例支架组小鼠创面组织中胶原纤维占比较普通支架组明显增大（ P<0.05）。伤后7 d，4组小鼠创面分泌物中相对丰度较高的菌群包括棒状杆菌属、葡萄球菌属、红球菌属菌；伤后14 d，4组小鼠创面分泌物中相对丰度较高的菌群包括寡养单胞菌属、红球菌属、葡萄球菌属菌，且3个比例支架组小鼠创面分泌物中菌群种类数都多于普通支架组。 结论:药物质量比相对较小的DH，具有促进HaCaT细胞增殖的作用；8∶9为双氢睾酮与羟基氟他胺的最佳质量比，该质量比DH可以促进小鼠Ⅲ度烧伤创面再上皮化与胶原沉积，促进创面愈合。构建的含药物质量比为1∶3的DH的雄激素及其拮抗剂双重释放系统有助于小鼠Ⅲ度烧伤创面的再上皮化和胶原沉积，且可改善创面菌群多样性。

目的 制备自载体的pH响应核-壳型紫杉醇-阿霉素(PTX-DOX)双药纳米棒,用于非小细胞肺癌的协同性靶向治疗,评价其临床应用效果.方法 采用溶剂交换法制备PTX纳米棒,化学偶联法制备同时包含亲水基团PEG和疏水基团PMHC18的DOX前药DOX-PEG-PMHC18,按照5:1的体积比均匀混合两种药物,依次经超声和搅拌处理后组装并制备出核-壳型双药联合纳米棒复合体系PTX-DOX,用扫描电镜(SEM)、透射电镜(TEM)表征纳米棒的形貌和尺寸,紫外-可见分光光度计表征两种药物的复合情况,在不同pH值(pH=7.4,5.0)的生理缓冲液中测试药物的释放曲线,用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)实时表征纳米药物的细胞内吞过程,MTT法测试纳米药物对肿瘤细胞的协同抑制效果,并评价功能化聚合物的生物相容性.结果 经过严格控制实验条件,成功地大量制备形貌尺寸均匀的核-壳型PTX-DOX双药纳米棒(长度500 nm,直径40 nm),505 nm处的特征吸收峰验证了DOX的成功组装,纳米双药可在PBS缓冲液中稳定分散6个月以上而不出现团聚体,当体外释放250 h时,药物在pH=7.4的缓冲液中的释放率为30％,而在pH=5.0的酸性缓冲液中的释放率大于75％,该纳米双药可被肿瘤细胞快速内吞,当细胞与药物纳米棒共孵育2 h时达到内吞峰值且稳定,另外,纳米双药表现出协同增强的抗肿瘤活性,抗癌效果明显优于单药及双药混合物.结论 新型的自载体pH响应核-壳型PTX-DOX双药纳米棒分散性好、性能稳定,可被肿瘤细胞快速内吞并表现出酸性响应的药物释放和协同增强的抗肿瘤活性,为恶性肿瘤靶向治疗提供新的药物设计思路和用药指导.

目的 制备尺寸均匀、形貌可控的无载体吉非替尼-羟基喜树碱(GET-HCPT)双药纳米颗粒(nanoparticles,NPs),用于非小细胞肺癌的协同靶向治疗,探索该制备策略的技术普适性和所得纳米药物的临床应用效果.方法 采用阳极氧化铝(AAO)模板辅助法制备吉非替尼-羟基喜树碱纳米颗粒(GET-HCPT NPs,GET与HCPT的摩尔比为1:1),酰胺化反应合成同时包含亲水基团聚乙二醇(PEG)和疏水基团聚马来酸酐-丙二酸丙二醇酯-十八烯(PMHC18)的两亲性功能试剂PMHC18-PEG,将其按照PMHC18聚合物与纳米药物1:5的体积比加入药物纳米颗粒中,经超声处理对其进行表面功能化,得到尺寸均匀、形貌稳定的核-壳型纳米双药.采用紫外-可见分光光度计(UV-vis)表征两种药物的复合情况,扫描电子显微镜(SEM)和透射电子显微镜(TEM)表征纳米颗粒的形貌、尺寸及多功能纳米药物在PBS缓冲液中室温储存6个月的稳定性.用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)实时表征纳米药物的细胞内吞过程及内吞机制,噻唑蓝比色法(MTT法)检测纳米药物对非小细胞肺癌细胞的协同抑制活性和功能化聚合物的生物相容性.将该模板法制备策略用于可控制备其他多种抗癌药物纳米结构,以明确其普适性.结果 成功制备形貌尺寸均匀的GET-HCPT双药NPs(50 nm).用PMHC18-PEG功能化后,核-壳结构清晰可见,10 nm的聚合物保护层均匀地附着在纳米颗粒表面.多功能纳米药物具有良好的水分散性和生理环境稳定性,在生理缓冲液中室温储存6个月无明显变化.该纳米系统以能量依赖的内吞机制被A549细胞迅速内化,并在给药后3 h达到内吞峰值,具有高信噪比.纳米药物展现出协同增强的抗非小细胞肺癌活性,而所用功能化聚合物PMHC18-PEG在0～200μg/ml浓度范围内作用于A549细胞,细胞存活率均保持95％以上.该制备策略普适于制备其他多种疏水抗癌药物的NPs:紫杉醇NPs,他莫西芬NPs,替尼泊苷NPs,甲氨蝶呤NPs,及制备不同形貌的GET:GET NP、GET纳米棒(NR)、GET NP+NR.结论 新型的无载体GET-HCPT双药纳米颗粒形貌可控、尺寸可调、分散性好、性能稳定,可被非小细胞肺癌细胞快速内吞并表现出肿瘤靶向的药物释放和协同增强的抗癌活性.该纳米制备技术普适于其他多种药物和生物活性分子体系,为恶性肿瘤靶向治疗提供新的药物设计思路和临床用药指导.