肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)尚无有效的治疗方法,目前已经发现多个致病基因以及修饰基因可导致ALS.反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)是可以调节目的mRNA的分子工具,可以针对ALS的突变基因进行治疗.本文综述ASOs在ALS治疗中研究进展,从治疗机制、研究情况等方面进行总结,目前针对超氧化物歧化酶基因1(superoxide dismutase 1,SOD1)、反式激活反应-DNA-结合蛋白(transactive response DNA binding protein,TARDBP)、9号染色体开放阅读框72(chromosome 9 open reading frame 72,C9ORF72)、肉瘤融合基因(fused in sarcoma,FUS)的ASOs在动物实验中得到其有效的结果,多项临床试验正在进行,但在药物体内分布、药物用量把控、ALS不同类型适用性等方面的问题尚待解决,以研制出减缓疾病进展且副作用小的ASOs.

目的:构建带myc/his标签的pcDNA3.1/TDP-43及其截断体质粒,探讨myc/his-TDP-43融合蛋白对tau外显子10可变剪接的影响.方法:采用PCR法扩增TDP-43基因及其各截断体,将扩增产物和载体pcDNA3.1双酶切后回收,连接载体和目的片段,获得重组质粒.在HEK-293FT细胞中转染pcDNA3.1/TDP-43·myc·his及其截断体质粒,Western印迹法检测相关蛋白的表达.TDP-43或siTDP-43和tau迷你基因SI9/SILO共转,RT-PCR检测TDP-43对tau外显子10可变剪接的影响.结果:成功构建了pcDNA3.1/TDP-43·myc·his全长及各截断体质粒,并在HEK-293FT细胞中检测到其蛋白表达.Myc/his-TDP-43融合蛋白可呈剂量依赖性促进4R-tau的表达(P＜0.05或0.01).结论:Myc/his-TDP-43融合蛋白可促进4R-tau的表达,携带myc/his标签不影响TDP-43对tau外显子10可变剪接的促进作用,为后续研究奠定了基础.

肌萎缩性侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)是成人中最常见的运动神经元疾病.反式激活反应-DNA结合蛋白(TAR DNA-binding protein 43,TDP43)是ALS患者神经元内泛素化蛋白聚集物的主要成分.这些异常TDP43聚集物中存在多种修饰,如磷酸化、泛素化、乙酰化或SUMO化.这些翻译后的修饰如何以及在多大程度上促成病理TDP43聚集物的形成,有待进一步研究.

肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis muscular atrophy,ALS)分为家族性 ALS (familial amyotrophiclateral sclerosis,FALS)和散发性 ALS (sporadic amyotrophic lateral sclerosis,SALS).关于ALS的基因组学特征,现阶段研究较明确的有铜/锌超氧化物歧化酶1(Cu/Zn superoxide dismu-tase,SOD1)、反式激活反应-DNA结合蛋白(TARDBP)基因、C9orf72 基因、肉瘤熔合(FUS)基因,占到家族性 ALS的20％,占到散发型ALS 的1％[1-2].与 SOD1 基因相关的亚型称为ALS1 亚型,目前SOD1 基因已经报告了 200 余种基因突变类型[ 3 ] ,中国 ALS 人群中的研究共报告了SOD1 基因突变26 种[4-8],国内报告较多的SOD1 基因突变H46R、V47A、G37R、Cys111Tyr 和 Gly147Asp ,多集中于华北地区及华东地区[9].甘肃为亚高原,多民族杂居,ALS 基因组学有其特征性表现,本研究收集甘肃地区FALS 患者家系进行SOD1 基因突变检测,分析SOD1 突变患者的临床特点及突变与临床表型关系.

目的 探究鸢尾素靶向反式激活DNA结合蛋白43(Transactive response DNA binding protein 43,TDP-43)调节p38MAPK信号通路对骨关节炎(Osteoarthritis,OA)大鼠软骨细胞的干预机制.方法 60只大鼠随机均分为Sham组、OA组、OA+鸢尾素组和OA+鸢尾素+SB203580组(n=15).左侧膝关节腔内注射碘乙酸钠(30 μl,10 d)构建OA模型,局部注射鸢尾素(0.5 mg/mL)和p38MAPK抑制剂SB203580(1 mg/kg).比较各组大鼠膝关节水肿和承重情况,通过番红0染色检测软骨损伤.检测各组白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平以及软骨组织中TDP-43 mRNA、蛋白以及p38蛋白磷酸化水平.结果 4组大鼠各指标比较差异有统计学意义(P＜0.05).OA组的膝盖水肿、膝关节承重不对称性、IL-1β、IL-6、p-p38/p38显著高于Sham组(P＜0.05),TDP-43 mRNA和蛋白显著低于Sham组(P＜0.05).OA+鸢尾素组的膝盖水肿、膝关节承重不对称性、IL-1β、IL-6、p-p38/p38显著低于OA组(P＜0.05),TDP-43 mRNA和蛋白显著高于OA组(P＜0.05).OA+鸢尾素+SB203580组的膝盖水肿、膝关节承重不对称性、IL-1p、IL-6、p-p38/p38显著低于OA+鸢尾素组(P＜0.05).OA+鸢尾素+SB203580组的TDP-43 mRNA和蛋白与OA+鸢尾素组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 鸢尾素可以通过调控TDP-43/p38MAPK抑制炎性反应,从而缓解软骨损伤.