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哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列分析
编辑人员丨2023/8/6
[目的]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列.[方法]应用差速离心以及滚环扩增的方法得到纯度较高的线粒体DNA,采用Illumina HiSeq X Ten技术对扩增得到的哈氏蜈蚣线粒体DNA进行测序,采用从头组装和mapping近缘种的方法拼接组装线粒体基因组,应用MITOS在线注释及与近缘种进行本地注释等方法注释线粒体基因组.[结果]获得14538 bp哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列.其共有20个tRNA及13个蛋白基因,2个rRNA(16S rRNA、12S rRNA).[结论]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列,并可用于药用蜈蚣的资源调查与保护研究.
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编辑人员丨2023/8/6
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特异性PCR鉴别蜈蚣及其混伪品
编辑人员丨2023/8/6
目的:蜈蚣是我国传统的中药材,具有良好的药用价值.目前市场上蜈蚣的混伪品日益增多,临床用药的安全性和有效性难以保证.该研究建立了一种蜈蚣基原物种的特异性聚合酶链式反应(PCR)方法,以准确、简便的鉴别蜈蚣及其常见混伪品.方法:通过比较蜈蚣及其混昆伪品基原物种的COI基因序列差异,根据变异位点设计蜈蚣正品少棘巨蜈蚣的特异性鉴别引物WG-500.F和WG-500.R,采集蜈蚣原动物样本及药材样本,优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证.结果:少棘巨蜈蚣原动物样本及蜈蚣正品药材使用设计的蜈蚣鉴别引物经PCR扩增和凝胶电泳后出约500 bp的单一明亮条带,其他混伪品如多棘蜈蚣、模棘蜈蚣、哈氏蜈蚣、海南蜈蚣等均无条带出现.结论:PCR鉴别方法可准确鉴别蜈蚣原动物和药材的真伪,具有高度特异性,为中药材蜈蚣的真伪鉴别提供了良好的科学依据.该方法具有简单、直观等特点,有利于广泛的普及与应用,在中药材鉴定方面有着广阔的应用前景.
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编辑人员丨2023/8/6
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UFLC-MS/MS法分析蜈蚣中3种多肽成分以及在蜈蚣鉴别中的应用
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立超高效液相色谱-质谱联用(UFLC-MS/MS)法分析蜈蚣中3种酶解多肽成分TD1(LEEDLERSEERL)、TD2(EEKDKALQNAEGEVAAL)、TD3(MILPTGASSF),比较不同品种蜈蚣中肽类成分的差异,寻找蜈蚣特异性多肽,用于蜈蚣的鉴别.方法 3种肽类成分的UFLC-MS/MS法,色谱柱为XSelect HSS T3(4.6 mm×150 mm,3.5μm);流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液,梯度洗脱.采用三重四极杆质谱检测器,电喷雾离子化(ESI),正离子模式下多反应监测(MRM)进行信号采集.样品采用正交试验方法,对蛋白提取方法进行优化,最终确定提取方法为蛋白裂解液超声处理60 min.得到的蜈蚣蛋白提取溶液经胃蛋白酶酶解并脱盐后,注入液质联用仪分析.测定了20批蜈蚣及8批其他动物药中3种肽类成分,并对结果进行比较.结果 在地龙、僵蚕、水蛭、土鳖虫和全蝎中未检出TD2和TD3,TD1与TD2在少棘巨蜈蚣与哈氏蜈蚣、墨江蜈蚣中存在较大差异,TD3在少棘巨蜈蚣与黑头蜈蚣、多棘蜈蚣中有较大差异.结论 该方法可用于区分少棘巨蜈蚣与地龙、僵蚕、水蛭、土鳖虫和全蝎,同时通过比较3种肽段的差异,区分药典品种少棘巨蜈蚣和4种常见非药典品种蜈蚣,为蜈蚣的质量评价和基础研究提供参考.
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编辑人员丨2023/8/5
