-
透明颤菌血红蛋白基因在龟裂链霉菌中的表达及其对土霉素合成的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 考察透明颤菌血红蛋白基因(vgb)在大肠埃希菌(E.coli)和龟裂链霉菌(S.rimosus)中的表达,研究在不同溶氧条件下表达的透明颤菌血红蛋白(VHb)对龟裂链霉菌生长和土霉素合成的影响.方法 将vgb插入表达型质粒pET-28a中,导入E.coli BL21 (DE3)用以表达VHb并测定其活性.以整合型质粒pSET152为载体,利用ermE*启动子组成型表达vgb基因,将构建的质粒通过接合转移整合到S.rimosusM4018基因组上,利用CO差示光谱法和SDS-PAGE鉴定两个重组菌中的血红蛋白.在5L罐上考察不同溶氧条件下VHb的表达对重组龟裂链霉菌生长和土霉素合成的影响.结果 重组大肠埃希菌和重组龟裂链霉菌都能够表达具有生物活性的VHb,发酵结果表明,在117h时与对照菌相比,重组龟裂链霉菌在高氧和低氧条件下的干重分别提高了6％和32％,同时单位干重土霉素的产量分别提高了41％和93％.结论 VHb在重组龟裂链霉菌中成功表达,改善了菌体的生长和土霉素的合成,为解决工业发酵过程中氧限制问题提供了策略.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
异源重构白色链霉菌土霉素生产菌株
编辑人员丨2023/8/5
[目的 ]土霉素(oxytetracycline,OTC)属于第一代四环素类抗生素,对革兰氏阳性菌和阴性菌具有很好的抑菌效果,目前主要应用于畜牧业、水产养殖业和作为原料药生产二代、三代四环类抗生素.因此,在生产上具有提高产量、降低成本的迫切需求.为了解决工业菌株改造中面临着遗传操作比较困难、周期长的问题,我们通过异源重构白色链霉菌(Streptomyces albus)De114并作为底盘生产菌株,进而评估该菌株OTC生物制造细胞工厂的潜力.[方法]通过理性工程重构,获得一系列衍生菌株 De114:Oxy、Del14:Oxy1K、De114:Oxy1K△otrR,De114B:Oxy1K△otrR.对上述菌株进行摇瓶发酵以及HPLC检测发酵产物;通过RT-qPCR检测OTC生物合成基因簇(otc cluster)相关结构基因的转录水平.[结果]S.albus Del14生长快、不结球,对OTC具有一定的耐受性.通过操纵簇内调控因子OtcR和OtrR,最终使重组菌株Del14B:Oxy1K△otrROTC产量在第6天达到了 1.1 g/L,与原始生产菌株龟裂链霉菌(S.rimosus)M4018在第8天产量相当.[结论]本研究首次在S.albus De114中异源表达了土霉素生物合成基因簇,初步证实了一个很有潜力的OTC生物制造底盘,为这一OTC生产菌株的进一步优化改造奠定了基础.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/5
