目的 探讨定心方三号方(Dingxin RecipeⅢ,DXRⅢ)是否能通过调节ACE2-Ang(1-7)-Mas轴对抗血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)引起的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤.方法 制备DXRⅢ含药血清,HUVEC细胞分为5组,除外对照组,其余组均采用10 mol·L-1的AngⅡ刺激建立HUVECs损伤模型,造模后,分别予以空白血清、5％DXRⅢ含药血清、10％DXRⅢ含药血清以及20％DXRⅢ含药血清进行干预.BCECF-AM荧光染色观察HUVECs的黏附性改变,Western Blot法检测血管紧张素转换酶2(angiotensin-coverting enzyme,ACE2)、Mas、细胞间黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞黏附分子(vascular cell adhesion protein 1,VCAM-1)和p-p38蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清中IL-6和血管紧张素1-7[angiotensin1-7,Ang(1-7)]水平.结果 单核细胞黏附实验结果显示黏附细胞数量随着DXRⅢ含药血清浓度增加而减少(P<0.01);Western Blot结果显示,DXRⅢ中、高剂量组可促进ACE2和Mas蛋白的表达(P<0.01),抑制ICAM-1、VCAM-1以及p-p38蛋白的表达(P<0.05);ELISA结果显示,DXRⅢ中、高剂量组可抑制IL-6释放(P<0.05),增加Ang(1-7)水平(P<0.01).结论 DXRⅢ可能通过调控ACE2-Ang(1-7)-Mas轴拮抗AngⅡ诱导的HUVECs损伤后p-p38磷酸化,进而抑制ICAM-1、VCAM-1和IL-6的表达,从而起到保护内皮细胞功能的作用.

目的:观察定心方Ⅲ号方对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响.方法:40只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型对照组、定心方Ⅲ号方6 g/kg、12 g/kg、24 g/kg组和辛伐他汀5mg/kg组,每组8只,并设同龄C57BL/6J雄性小鼠为正常对照组.ApoE-/-小鼠连续喂养高脂饲料12 w复制NAFLD模型后,各组分别连续给药12 w.末次给药后禁食8h,检测小鼠空腹血糖、体质量和肝湿质量,计算肝指数;采用生化法检测小鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),酶标法检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活力,HE染色观察小鼠肝脏病理形态,Western Blot检测小鼠肝脏中磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、脂肪酸合成基因(SREBP-1C)、核孔糖蛋白62 (p62)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白的表达情况.结果:与正常对照组小鼠比较,模型对照组小鼠的血糖、体质量、肝湿质量和肝指数明显升高(P＜0.05或P＜0.01),肝细胞中脂滴明显聚集,肝索排列紊乱或消失,NAFLD病理评分显著升高(P＜0.01),血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C、ALT、AST和MDA的浓度明显升高(P＜0.05或P＜0.01),SOD和GSH活性显著降低(P＜0.01),肝组织中p-Akt、p-mTOR、SREBP-1C、p62、LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高(P＜0.05或P＜0.01);与模型对照组小鼠比较,给药组小鼠血糖、体质量、肝湿质量和肝指数均降低,肝组织病理形态学明显改善,NAFLD评分显著下降,血清中TC、LDL-C、TG、ALT、AST和MDA浓度均有不同程度的下降,HDL-C、SOD和GSH含量活性均升高,肝组织中p-Akt、p-rmTOR、SREBP-1C、p62、LC3Ⅱ蛋白表达均明显下降,与模型对照组比较,其中以定心方Ⅲ号方24 g/kg组和辛伐辛伐他汀5 mg/kg组变化最为明显(P＜0.05或P＜0.01).结论:定心方Ⅲ号方可降低血脂水平、抑制氧化应激、调节自噬、改善肝功能,从而有效改善非酒精性脂肪的病变程度,其机制可能与抑制Akt/mTOR/SREBP-1C通路有关.

目的 探讨定心方Ⅲ号方(DXR Ⅲ)调控蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对肥胖小鼠脂肪组织慢性炎症的影响.方法 32只8周龄雄性ApoE-/-小鼠按随机数字表法分为模型组,DXR Ⅲ低、中、高剂量组,每组8只,另取8只同龄C57BL/6J雄性小鼠作为正常组.ApoE-/-小鼠连续喂食西方饮食饲料12周建立肥胖模型后,DXRⅢ低、中、高剂量组分别予6.5、13、26 g/kg DXR Ⅲ中药煎剂灌胃,正常组和模型组以等量生理盐水灌胃.各组均每天给药1次,连续给药12周.每周测量小鼠体重.干预结束后,取小鼠内脏脂肪组织称重并计算内脏脂肪指数;采用生化法检测小鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C水平;HE染色观察小鼠内脏脂肪组织病理学变化;IL-1 β免疫组化染色分析内脏脂肪组织炎症浸润程度;RT-PCR检测脂肪组织炎症因子IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达,巨噬细胞极化标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和精氨酸酶-1(Arg-1)mRNA表达;Western Blot检测小鼠脂肪组织JAK2、磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、iNOS、Arg-1蛋白表达.结果 与正常组比较,模型组小鼠体重、体重增加值、内脏脂肪重量、内脏脂肪指数与血清中TC、TG、LDL-C、HDL-C水平均升高(P＜0.05,P＜0.01),HE染色显示脂肪细胞肥大,免疫组化染色显示IL-1 β水平上调,脂肪组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、iNOS mRNA 表达增加,iNOS 蛋白、JAK2、STAT3 蛋白磷酸化水平亦增加(P＜0.05,P＜0.01),Arg-1 mRNA及蛋白表达降低(P＜0.05);与模型组比较,DXR Ⅲ各剂量组小鼠体重增加值、内脏脂肪重量、内脏脂肪指数与血清中TC、LDL-C水平均下降(P＜0.05,P＜0.01),HE染色显示脂肪细胞变小,免疫组化染色显示IL-1β水平下调;DXR Ⅲ低、中剂量组小鼠血清TG水平下降(P＜0.05),脂肪组织IL-1 β、IL-6、iNOS mRNA表达下降,iNOS蛋白、JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平亦下降(P＜0.05,P＜0.01),Arg-1 mRNA及蛋白表达增加(P＜0.05,P＜0.01);DXR Ⅲ高剂量组小鼠血清HDL-C水平上升(P＜0.01),脂肪组织MCP-1 mRNA表达及JAK2、STAT3蛋白磷酸化水平均下降(P＜0.05,P＜0.01).结论 DXR Ⅲ可减轻内脏脂肪组织慢性炎症,作用机制可能与其抑制JAK2/STAT3信号通路,改善巨噬细胞极化失衡相关.