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基于肠道菌群及其代谢产物SCFA探讨左归降糖通脉方对2型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响
编辑人员丨2024/4/13
目的 基于肠道菌群及代谢产物短链脂肪酸(short-chain fatty acid,SCFA)探讨左归降糖通脉方(Zuogui Jiangtang Tongmai formula,ZJTF)干预 2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的可能机制.方法 取 12 只SD大鼠为空白(Control)组,喂食普通饲料;48 只大鼠为造模组,以高脂饲料联合链脲佐菌素(streptozocin,STZ)制备T2DM模型.造模成功后随机分为模型(DM)组、ZJTF低剂量(ZJTF.L,12 g·kg-1)组、ZJTF高剂量(ZJTF.H,24 g·kg-1)组、二甲双胍 150 mg·kg-1+阿托伐他汀 10 mg·kg-1(M.A)组,药物干预 4 周.监测大鼠精神状态、体质量与随机血糖;ELISA 检测血清胰岛素(insulin,INS)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、炎症因子的水平;生化分析法检测血脂常规含量;HE染色观察结肠病理改变;16SrRNA观察肠道菌群结构;GC-MS检测血清SCFA水平.结果 与Control组比较,DM组出现多饮、多食、多尿、体质量减轻等症状;血糖、INS、HbA1c明显上升(P<0.01);总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平升高,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)明显降低(P<0.01);白细胞介素-1β(inter-leukin-1 β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平均明显升高(P<0.01);结肠固有层出现部分中断和消失,细胞肿胀、绒毛紊乱.DM组厚壁菌门和变形菌门、肠杆菌科、埃希菌-志贺菌属的相对丰度增加;血清乙酸、丁酸含量下降(P<0.05,P<0.01).与DM组比较,ZJTF组血糖、INS、HbAlc均明显降低(P<0.05,P<0.01);TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高(P<0.01);IL-1β、IL-6 及TNF-α水平明显降低(P<0.01);结肠细胞肿胀及炎性浸润缓解;拟杆菌门和疣微菌门、乳酸菌科、阿克曼菌属丰度增加;血清丁酸、乙酸含量升高(P<0.05,P<0.01).结论 左归降糖通脉方可能通过调节肠道菌群和SCFAs水平起到降血糖、稳血脂、减轻炎症反应的作用.
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编辑人员丨2024/4/13
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左归降糖通脉方含药血清对晚期糖基化终末产物诱导脑微血管内皮细胞损伤的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨左归降糖通脉方治疗糖尿病血管并发症的可能作用机制.方法 将30只大鼠随机分为空白组、中药组和西药组,每组10只.中药组给予左归降糖通脉方36 g/(kg·d)灌胃,西药组给予尼莫地平片18.35 mg/(kg·d)及格列齐特缓释片27.5 mg/(kg·d)灌胃,空白组予以4 ml蒸馏水灌胃,均每日1次,连续5天,制备含药血清.将晚期糖基化终末产物(AGEs)设为50、100、200、400 mg/L 4个浓度组,分别作用12、24、48h 3个时间点,观察AGEs对大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)形态结构改变的影响来筛选最佳干预浓度和时间.将左归降糖通脉方含药血清分为2.5%、5%、10%3个浓度组,作用于BMECs 24h后,测定BMECs增殖率来确定左归降糖通脉方中药含药血清的最佳作用浓度.再将BMECs分为空白组、模型组、中药组、西药组,中药组和西药组分别加入相应含药血清进行干预.检测各组细胞上清液中白细胞介素1β (IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的含量.结果 AGEs的最佳干预浓度和时间点为200 mg/L作用24h,中药含药血清的最佳作用浓度为5%.与空白组比较,模型组上清液中IL-1β、ICAM-1、VCAM-1含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,中药组和西药组IL-1β、ICAM-1、VCAM-1明显下调(P<0.05). 结论 左归降糖通脉方能下调IL-1β、ICAM-1、VCAM-1表达,从而抑制炎症反应,可能是其治疗糖尿病血管并发症的作用机制之一.
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编辑人员丨2023/8/6
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基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方对大鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用
编辑人员丨2023/8/5
目的 观察左归降糖通脉方对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的干预作用,并基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方的作用机制.方法 将30只SD大鼠随机均分为空白组(同体积蒸馏水)、中药组[左归降糖通脉方36 g/(kg·d)]和西药组[尼莫地平18.35 mg/(kg·d)+格列齐特27.5 mg/(kg·d)],每日灌胃1次,连续5 d,用于制备含药血清.将BMECs随机分为空白组、模型组、左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)抑制剂(FPS-ZM1)组及吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(pyrrolidinedithiocarbamate ammonium,PDTC)组,BMECs加入200 mg/L的AGEs作用24 h后,分别予空白血清、空白血清、左归降糖通脉方含药血清、尼莫地平+格列齐特含药血清、FPS-ZM1、PDTC干预.通过形态学观察及CCK-8法检测细胞存活率,采用Western blot、RT-PCR法检测RAGE、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白和mRNA表达情况.结果 与空白组比较,模型组细胞存活率明显下降(P<0.01);与模型组比较,左归降糖通脉方组及尼莫地平+格列齐特组细胞存活率上升(P<0.05);相较于空白组,模型组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显上调(P<0.01);相较于模型组,左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、FPS-ZM1组及PDTC组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显下调(P<0.05);左归降糖通脉方组与FPS-ZM1组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 左归降糖通脉方可能通过抑制AGEs与RAGE的结合,抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路的激活,下调下游炎症因子的释放,对BMECs起到保护作用.
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编辑人员丨2023/8/5
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基于AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路探讨左归降糖通脉方对AGEs合并缺糖缺氧星形胶质细胞炎性损伤的影响
编辑人员丨2023/8/5
目的:探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物(AGEs)合并缺糖缺氧(OGD)损伤后星形胶质细胞(AS)的影响及干预机制.方法:使用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方(ZGJTTMP)含药血浆的作用浓度;将星形胶质细胞随机分为空白组、模型(AGEs+OGD)组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C)组、AMPK激动剂(AICAR)组、ZGJTTMP+AICAR组,倒置显微镜下观察各组细胞形态结构,CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目,免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞LC3、p62、磷酸化(p)-AMPK、AMPK、磷酸化(p)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、mTOR、磷酸化(p)-UNC-51样激酶1(ULK1)、ULK1蛋白的表达情况.结果:选择AGEs 200 mg·L-1合并OGD 6 h作为最适造模条件,5%作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数.倒置显微镜下见造模后细胞受损严重,ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善;ELISA结果示模型组IL-lβ、IL-6、TNF-α的含量显著增加(P<0.01),ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降(P<0.01);电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加(P<0.01),ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少,LC3表达面积显著减少(P<0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组细胞LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高(P<0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK 1显著下降(P<0.01),与模型组比较,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内 LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p-AMPK/AMPK 蛋白表达显著下降(P<0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1 显著升高(P<0.01).结论:ZGJTTMP对AGEs合并OGD炎性损伤的星形胶质细胞具有保护作用,这一作用是通过抑制了 AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路的激活,从而抑制了自噬的过度表达实现的.
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编辑人员丨2023/8/5
