目的 基于肠道菌群及代谢产物短链脂肪酸(short-chain fatty acid,SCFA)探讨左归降糖通脉方(Zuogui Jiangtang Tongmai formula,ZJTF)干预 2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)的可能机制.方法 取 12 只SD大鼠为空白(Control)组,喂食普通饲料;48 只大鼠为造模组,以高脂饲料联合链脲佐菌素(streptozocin,STZ)制备T2DM模型.造模成功后随机分为模型(DM)组、ZJTF低剂量(ZJTF.L,12 g·kg-1)组、ZJTF高剂量(ZJTF.H,24 g·kg-1)组、二甲双胍 150 mg·kg-1+阿托伐他汀 10 mg·kg-1(M.A)组,药物干预 4 周.监测大鼠精神状态、体质量与随机血糖;ELISA 检测血清胰岛素(insulin,INS)、糖化血红蛋白(glycosylated hemoglobin,HbA1c)、炎症因子的水平;生化分析法检测血脂常规含量;HE染色观察结肠病理改变;16SrRNA观察肠道菌群结构;GC-MS检测血清SCFA水平.结果 与Control组比较,DM组出现多饮、多食、多尿、体质量减轻等症状;血糖、INS、HbA1c明显上升(P<0.01);总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)水平升高,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)明显降低(P<0.01);白细胞介素-1β(inter-leukin-1 β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平均明显升高(P<0.01);结肠固有层出现部分中断和消失,细胞肿胀、绒毛紊乱.DM组厚壁菌门和变形菌门、肠杆菌科、埃希菌-志贺菌属的相对丰度增加;血清乙酸、丁酸含量下降(P<0.05,P<0.01).与DM组比较,ZJTF组血糖、INS、HbAlc均明显降低(P<0.05,P<0.01);TC、TG、LDL-C明显降低,HDL-C明显升高(P<0.01);IL-1β、IL-6 及TNF-α水平明显降低(P<0.01);结肠细胞肿胀及炎性浸润缓解;拟杆菌门和疣微菌门、乳酸菌科、阿克曼菌属丰度增加;血清丁酸、乙酸含量升高(P<0.05,P<0.01).结论 左归降糖通脉方可能通过调节肠道菌群和SCFAs水平起到降血糖、稳血脂、减轻炎症反应的作用.

目的 探讨左归降糖通脉方治疗糖尿病血管并发症的可能作用机制.方法 将30只大鼠随机分为空白组、中药组和西药组,每组10只.中药组给予左归降糖通脉方36 g/(kg·d)灌胃,西药组给予尼莫地平片18.35 mg/(kg·d)及格列齐特缓释片27.5 mg/(kg·d)灌胃,空白组予以4 ml蒸馏水灌胃,均每日1次,连续5天,制备含药血清.将晚期糖基化终末产物(AGEs)设为50、100、200、400 mg/L 4个浓度组,分别作用12、24、48h 3个时间点,观察AGEs对大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)形态结构改变的影响来筛选最佳干预浓度和时间.将左归降糖通脉方含药血清分为2.5％、5％、10％3个浓度组,作用于BMECs 24h后,测定BMECs增殖率来确定左归降糖通脉方中药含药血清的最佳作用浓度.再将BMECs分为空白组、模型组、中药组、西药组,中药组和西药组分别加入相应含药血清进行干预.检测各组细胞上清液中白细胞介素1β (IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的含量.结果 AGEs的最佳干预浓度和时间点为200 mg/L作用24h,中药含药血清的最佳作用浓度为5％.与空白组比较,模型组上清液中IL-1β、ICAM-1、VCAM-1含量明显升高(P＜0.05);与模型组比较,中药组和西药组IL-1β、ICAM-1、VCAM-1明显下调(P＜0.05). 结论 左归降糖通脉方能下调IL-1β、ICAM-1、VCAM-1表达,从而抑制炎症反应,可能是其治疗糖尿病血管并发症的作用机制之一.

目的 观察左归降糖通脉方对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)损伤的干预作用,并基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方的作用机制.方法 将30只SD大鼠随机均分为空白组(同体积蒸馏水)、中药组[左归降糖通脉方36 g/(kg·d)]和西药组[尼莫地平18.35 mg/(kg·d)+格列齐特27.5 mg/(kg·d)],每日灌胃1次,连续5 d,用于制备含药血清.将BMECs随机分为空白组、模型组、左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)抑制剂(FPS-ZM1)组及吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(pyrrolidinedithiocarbamate ammonium,PDTC)组,BMECs加入200 mg/L的AGEs作用24 h后,分别予空白血清、空白血清、左归降糖通脉方含药血清、尼莫地平+格列齐特含药血清、FPS-ZM1、PDTC干预.通过形态学观察及CCK-8法检测细胞存活率,采用Western blot、RT-PCR法检测RAGE、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)的蛋白和mRNA表达情况.结果 与空白组比较,模型组细胞存活率明显下降(P<0.01);与模型组比较,左归降糖通脉方组及尼莫地平+格列齐特组细胞存活率上升(P<0.05);相较于空白组,模型组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显上调(P<0.01);相较于模型组,左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、FPS-ZM1组及PDTC组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达水平明显下调(P<0.05);左归降糖通脉方组与FPS-ZM1组RAGE、NF-κB的蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 左归降糖通脉方可能通过抑制AGEs与RAGE的结合,抑制AGEs/RAGE/NF-κB通路的激活,下调下游炎症因子的释放,对BMECs起到保护作用.

目的:探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物(AGEs)合并缺糖缺氧(OGD)损伤后星形胶质细胞(AS)的影响及干预机制.方法:使用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方(ZGJTTMP)含药血浆的作用浓度;将星形胶质细胞随机分为空白组、模型(AGEs+OGD)组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂(Compound C)组、AMPK激动剂(AICAR)组、ZGJTTMP+AICAR组,倒置显微镜下观察各组细胞形态结构,CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测各组细胞中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目,免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞LC3、p62、磷酸化(p)-AMPK、AMPK、磷酸化(p)-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、mTOR、磷酸化(p)-UNC-51样激酶1(ULK1)、ULK1蛋白的表达情况.结果:选择AGEs 200 mg·L-1合并OGD 6 h作为最适造模条件,5％作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数.倒置显微镜下见造模后细胞受损严重,ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善;ELISA结果示模型组IL-lβ、IL-6、TNF-α的含量显著增加(P＜0.01),ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降(P＜0.01);电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加(P＜0.01),ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少,LC3表达面积显著减少(P＜0.01);Western blot结果显示,与空白组比较,模型组细胞LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高(P＜0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK 1显著下降(P＜0.01),与模型组比较,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内 LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ、p-AMPK/AMPK 蛋白表达显著下降(P＜0.01),p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1 显著升高(P＜0.01).结论:ZGJTTMP对AGEs合并OGD炎性损伤的星形胶质细胞具有保护作用,这一作用是通过抑制了 AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路的激活,从而抑制了自噬的过度表达实现的.