目的 利用光学相干断层扫描血管造影(optical coherence tomography angiography,OCTA)技术比较新西兰兔和猫角膜上皮、角膜全层厚度与人类的差别,探讨不同动物作为异种角膜移植实验模型的形态学依据.方法 雄性新西兰白兔和雄性猫各12只,分为A、B两组,每组各12只,OCTA技术测量每组样本双眼角膜上皮和角膜全层的厚度,所得数据以瞳孔为中心,根据距离角膜中央区的距离不同,利用系统软件将角膜划分为17个区域.中央区角膜是角膜正中间直径为2 mm的区域,内环和外环直径分别是5 mm和6 mm.在内外环分别又分出八个区域:上方(S)、鼻上(SN)、鼻侧(N)、鼻下(IN)、下方(I)、颞下(IT)、颞侧(T)、颞上(ST),测量各区域角膜上皮和角膜全层厚度.比较新西兰兔和猫角膜上皮、角膜全层厚度与人类的差别.结果 猫角膜上皮和角膜全层厚度均大于兔.角膜厚度:猫角膜全层是中央薄、周边厚,其中在T5、ST5、S5、SN5、N5区与中央区的厚度差异均有统计学意义(均为P＜0.05),角膜上皮在ST5、S5、SN5区与中央区厚度的差异均有统计学意义(均为P＜0.05);兔角膜全层同样为中央薄、边缘厚,其中在T5、IT5、IN5、N5、T6、N6区与中央区厚度差异均有统计学意义(均为P＜0.05),角膜上皮ST5、S5、SN5、ST6、S6、SN6区与中央区厚度差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与人类角膜相比,两种实验动物与人在角膜全层和角膜上皮厚度方面差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 猫角膜与人类角膜在角膜全层厚度和角膜上皮厚度及其分布方面具有相似的区域,同时,猫角膜全层厚度和角膜上皮厚度均较人类厚,这在异种角膜移植后的屈光调节中也具有优势.猫较兔更适合作为人类异种角膜移植的潜在供体.

目的 探讨将全飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中获得的角膜基质透镜用于周边板层角膜移植的方法和技术以及移植术后的结果.方法 新西兰白兔10只均分为A、B两组,每组均采用右眼为实验眼,12点至3点钟方位制作周边角膜基质缺损模型.A组采用单纯折叠的方法,B组将纤维蛋白胶涂布于折叠好的透镜组织层间的方法构建板层角膜移植片.A组用10-0尼龙线直接将构建好的板层角膜移植片缝合到右眼植床,而B组则采用纤维蛋白胶将构建好的板层角膜移植片粘合于右眼植床,再用10-0尼龙线缝合.术后观察移植片表面平整度、角膜上皮化完成和维持情况、周边角膜形态、植床和移植片的吻合度、移植片的透明度等指标.观察期末行组织病理学检查.结果 两组术后3～5d上皮化均完成,且移植片表面平整,移植片和植床吻合度佳.A组5眼中有4眼移植片均出现新生血管长入,轻、中度水肿混浊,但1个月之后移植片完全透明,新生血管完全消退;A组另1眼在术后10d出现强烈的排斥反应,予眼球摘除.而B组在术后早期5眼中即有4眼移植片发生强烈的异种排斥反应,予眼球摘除;而另1眼的发展过程类似A组4眼,最终移植片完全透明.观察期末组织病理学检查发现A组4眼和B组1眼最终保持透明的移植片内为正常的角膜基质细胞,透镜层间融合良好,植床和移植片交界处有少许散在单核淋巴细胞和成纤维细胞;A组1眼和B组4眼出现类似化脓样的白色浸润病灶,有大量堆积的单核淋巴细胞在透镜层间和表面,并在移植片表面出现组织坏死脱落.结论 利用飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术中获得的角膜基质透镜经冰冻保存后用于构建周边板层角膜移植片,并将其用于周边板层角膜移植术是可行有效的,因纤维蛋白胶来源于人纤维蛋白可增加异种排斥反应.

目的:观察结膜下注射复方倍他米松对鸵鸟-兔眼板层角膜移植术后免疫排斥反应的缓释治疗作用.方法:16只6周龄健康新西兰白兔角膜(单眼)行板层角膜移植术,植片应用鸵鸟脱细胞的角膜基质,术后分成两组,实验组术毕及术后结膜下注射复方倍他米松注射液(每隔7d一次),对照组术毕及术后结膜下注射地塞米松磷酸钠注射液(每隔7d一次).分别于术后1、2wk,1、2mo取兔角膜组织做石蜡包埋切片,进行HE染色观察组织特点,同时进行间接免疫荧光法检测CD4+、CD8+T淋巴细胞的变化.结果:术后2mo,实验组角膜植片在位,并保持透明,新生血管极少,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,仅见少许中性粒细胞浸润,未见CD4+、CD8+T淋巴细胞;对照组炎症反应明显,角膜植片混浊,组织切片HE染色和间接免疫荧光染色结果显示,炎性反应以中性粒细胞浸润为主,可见CD4+、CD8+T淋巴细胞.结论:复方倍他米松作为长效缓释剂可有效抑制鸵鸟-兔板层角膜移植术后免疫排斥反应,延长植片的存活时间.

目的:观察猪脱细胞角膜基质进行人板层角膜移植术后角膜植片上皮化的临床过程.方法:收集2017年1月至2018年1月在佛山市第二人民医院经药物治疗无效的感染性角膜炎患者5例.采用脱细胞角膜基质(商品名:艾欣瞳)行板层移植术,以对侧眼为对照.术后3d,7d,1个月,3个月,6个月对患者进行随访,在裂隙灯显微镜下观察移植后植片上皮化完成过程.术后1,3,6个月共聚焦显微镜观察植片上角膜上皮细胞密度及上皮下神经纤维修复情况.结果:脱细胞角膜基质板层角膜移植术后3d开始出现上皮化,术后10d上皮化逐步完成,但角膜上皮排列疏松,荧光素染色仍有点状染色.激光扫描共聚焦显微镜检查结果显示:术后1,3,6个月角膜上皮细胞排列规则、紧密,与对侧眼比较角膜上皮细胞密度差异无统计学意义(P＞0.05).结论:应用脱细胞角膜基质行板层角膜移植术后植片上皮化过程能够顺利完成.

异种角膜材料和生物工程角膜材料的应用可以在一定程度上缓解人类供体角膜的紧张情况.供体脱细胞处理方式和手术方式上的改进使异种来源的角膜植片能够应用于临床治疗.猪眼角膜被认为是一种具备替代人供体的材料之一.目前,很多研究将猪来源的供体角膜作为异种移植材料,也在一定程度上取得了初步成果,这为临床试验的开展打下了基础.近年来很多关于脱细胞处理后的猪眼角膜应用于异种移植的研究相继被报道,未来猪眼角膜可能应用于临床以缓解临床供体的紧张现状.

目的:对生物工程角膜移植术后发生免疫排斥反应患者进行激光共焦显微镜观察和免疫病理研究,初步探究生物工程角膜移植排斥反应的发生机制.方法:回顾性病例研究.纳入2018-09/2020-12我院收治的感染性角膜炎行生物工程角膜移植术后发生免疫排斥患者5例5眼.裂隙灯检查角膜透明度、角膜新生血管;激光共焦显微镜对角膜进行动态观察,记录免疫排斥反应后角膜上皮下朗格罕氏细胞和基质炎症细胞密度,并以对侧眼作为对照进行统计分析.行同种异体角膜移植时取下生物工程角膜,免疫组织化学染色后对CD4+细胞和CD8+细胞及炎症细胞的浸润和分布进行观察.结果:激光共焦显微镜显示,术眼角膜上皮下可见大量活化郎格罕氏细胞,其活化比例与对侧眼比较有差异(χ2=38.29,P<0.001).基质层大量炎症细胞,与对侧眼比较具有差异(t=32.5,P<0.05).对生物工程角膜组织进行免疫组织化学染色和HE染色,角膜基质层均可见CD4+细胞和CD8+细胞,仅1眼角膜基质层可见大量嗜酸性粒细胞.结论:生物工程角膜移植术后免疫排斥反应经免疫病理证实以T细胞介导的细胞免疫在发病机制中具有重要作用,对异种抗原的超敏反应可能参与其中.

本实验分为二组.第一组是鸡角膜给兔移植,供片及植床的钻径均为5.5mm,共作家兔14只,观察时间2-9月,结果6只透明,3只半透明,5只全混.第二组用人角膜给猕猴(学名Macaca mulatta;英名Rhesus monkey)移植,共作4只,第1只和第4只猴的供片直径是7.5mm,植床直径为7.0mm,第2和第3只猴的供片直径为6.2mm,植床直径为6.0mm.结果:第1只猴17天死亡,死前植片透明.第2、3只猴植片透明达一年以上,第4只猴植片透明4.5月.实验兔No.3术后3个月内皮细胞密度为2400个/mm2.术后8个月,下降到1933个/mm2;实验猴No.2术后8个月内皮细胞的密度为2570个/mm2,术后13个月时为1800个/mm2.植片内皮的丢失率超过生理下降速度.扫描电镜检查证实:鸡角膜内皮可在兔生存9个月以上,人角膜内皮可在猴眼生存14个月以上.免疫排斥反应,早期和轻型者可用激素控制,后期和新生血管明显者,激素难以奏效.这两种动物实验模型的初步成功,为今后研究异种角膜移植提供了有用的资料.

本文以鸡给兔的穿透性角膜移植为实验模型,运用微量全血3H-TdR掺入法和ELISA,对术后动物机体的细胞和体液免疫功能状态变化进行了10周动态观察.发现:(1)术后同种和异种组外周血中淋巴细胞转化程度均增高,以3～4周最明显.(2)异种组术后2～8周血清中明显出现特异性抗角膜抗体,第3周达峰值,结合形态学观察证明:(1)术后免疫排斥反应主要是细胞介导的免疫应答,也有体液免疫的参与,异种移植休液免疫参与更明显,(2)运用微量全血3H-TdR掺入法可有效监测术后机体免疫功能状态的变化.(3)使用免疫抑制剂应该重视术后3～4周.