该研究基于线粒体铁蛋白(ferritin mitochondrial,FtMt)抑制铁死亡探讨藁本内酯(ligustilide,LIG)减轻氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen and glucose-deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导小鼠海马神经元细胞(HT22)损伤的作用及机制.体外建立OGD/R诱导HT22细胞损伤的模型,HT22细胞随机分为正常组,模型组,LIG 5、10、20 μmol·L-1组,铁死亡抑制剂(ferrostatin-1,Fer-1,2 μmol·L-1)组.CCK-8法检测细胞活力,LDH试剂盒检测乳酸脱氢酶释放量,倒置显微镜观察HT22细胞形态,透射电镜观察线粒体的超微结构,化学发光法检测细胞内Fe2+含量.为进一步探究FtMt抑制铁死亡的机制,沉默HT22细胞的FtMt,并随机分为正常组、模型组、20 μmol·L-1LIG 组、si-NC 组、si-FtMt 组、si-FtMt+20 μmol·L-1LIG 组.免疫荧光和 Western blot 法检测FtMt的表达,化学发光法检测HT22细胞内NADPH/NADP+、GSH、MDA、ATP的含量,激光共聚焦观察mtROS荧光强度,流式细胞术检测细胞内Fe2+含量,Western blot法检测铁死亡相关蛋白Ferrtin、GPX4、ASCL4的表达.研究结果表明,与模型组相比,LIG可以显著提高HT22细胞存活率,改善损伤的HT22细胞形态及线粒体超微结构,降低细胞内Fe2+含量和降低促铁死亡蛋白ACSL4的表达,增加抗铁死亡蛋白Ferrtin、GPX4的表达.沉默FtMt后,LIG促进FtMt的表达;与si-FtMt组相比,LIG可以显著提高NADPH/NADP+、GSH含量,降低mtROS的荧光强度、MDA含量,提高ATP活性,降低HT22细胞内Fe2+含量,抑制促铁死亡蛋白ACSL4的表达,提高抗铁死亡蛋白Ferrtin、GPX4的表达.综上,LIG通过上调FtMt的表达改善线粒体功能抑制铁死亡,从而减轻OGD/R诱导HT22细胞损伤.

近年来,我国心血管疾病发病率和病死率仍在升高,疾病负担下降的拐点尚未出现.经皮冠状动脉介入(percutaneous coronary intervention,PCI)技术是治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的有效手段,其中药物洗脱支架及药物涂层球囊是目前临床中最常用的2种PCI器械,但仍存在再狭窄及晚期血栓事件的问题.如何在保护内皮细胞活性的同时抑制血管平滑肌细胞增殖,进而既抑制再狭窄又抗血栓形成,是研究的热点及难点.中药单体及提取物尤其是中药单体组合涂层具有多靶点潜力,是对人工合成化合物涂层的重要补充.该文综述了应用于PCI器械药物涂层的中药单体(三氧化二砷、紫杉醇、水蛭素、川芎嗪、大黄素、苦参素、姜黄素等)、中药单体组合(紫杉醇/水蛭素、栀子苷/黄芩苷)、中药提取物(莪术提取物、昆明山海棠提取物),并对其中存在的问题及未来发展进行讨论,以期为研发新的PCI器械提供参考.

为探讨补阳还五汤抗大鼠脑缺血再灌注损伤的机制,180只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤+miR-26a-5p激动剂(激动剂)组、补阳还五汤+激动剂阴性对照(激动剂阴性对照)组,每组36只;每组又按再灌注时间分为第3、7、14天3个亚组.除假手术组外,其余各组采用线栓法诱导大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,缺血90 min后再灌注.补阳还五汤组、激动剂组、激动剂阴性对照组建模24 h后开始给予补阳还五汤灌胃,每日2次;假手术组、模型组灌胃等量生理盐水,直至处死的前1 d.激动剂组和激动剂阴性对照组建模24 h后分别于侧脑室注射miR-26a-5p激动剂和miR-26a-5p激动剂阴性对照剂,其他各组注射等量生理盐水.各组建模24 h后腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU),每日1次,直至处死的前1 d.采用改良版神经损伤严重程度评分(mNSS)评价神经功能缺损,2,3,5-三苯四氮唑(TTC)染色检测脑梗死体积,TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡,免疫荧光双标记法检测BrdU/NeuN双阳性(BrdU+/NeuN+)细胞数评估新生神经元,双荧光素酶实验验证PTEN是miR-26a-5p的靶基因,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polyme rase chain reaction,RT-qPCR)检测 PTEN 及 miR-26a-5p 的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测 PTEN、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt 的表达.结果显示,与模型组比较,补阳还五汤可促进脑缺血大鼠神经功能恢复,缩小脑梗死体积,增加BrdU+/NeuN+细胞数,上调miR-26a-5p的表达,调控PTEN/PI3K/Akt信号通路,促进神经元新生;侧脑室注射miR-26a-5p激动剂后加强上述效应.综上所述,补阳还五汤可促进脑缺血大鼠神经功能恢复,减小脑梗死体积,促进脑缺血大鼠神经元新生,其机制可能是通过miR-26a-5p激活PTEN/PI3K/Akt信号通路.

目的 基于转录组测序研究加味桃红四物汤对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及作用机制.方法 将15只SPF级大鼠随机分为假手术组、模型组和加味桃红四物汤组,每组5只,加味桃红四物汤组予加味桃红四物汤预灌胃5 d,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型.心脏超声检测大鼠心功能,试剂盒检测血清氧化应激和炎症因子含量,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,取心肌组织进行转录组测序,对差异基因进行韦恩图及热图分析,对共同差异基因进行GO功能分析和KEGG通路富集分析.RT-qPCR验证差异基因PTX3和EGR2表达.结果 与假手术组比较,模型组大鼠射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)明显降低(P<0.01),心肌组织细胞凋亡率及血清乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6含量明显升高(P<0.01),SOD活性和IL-10含量明显降低(P<0.01);与模型组比较,加味桃红四物汤组大鼠EF和FS明显升高(P<0.05),心肌组织细胞凋亡率及血清肌酸激酶同工酶、LDH、TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.01),SOD活性和IL-10含量明显升高(P<0.01).转录组测序得到假手术组与模型组差异基因4 227个(2 259个上调、1 968个下调),假手术组与加味桃红四物汤组差异基因1 933个(1301个上调、632个下调),模型组与加味桃红四物汤组差异基因94个(46个上调、48个下调),3组共同差异基因35个,差异基因主要富集到流体剪切力和动脉粥样硬化、泛素介导的蛋白质降解、C型凝集素受体信号通路、鞘脂类信号通路、细胞周期、趋化因子信号通路、脂质和动脉粥样硬化等信号通路.RT-qPCR验证结果显示,模型组心肌组织PTX3和EGR2基因表达较假手术组明显升高(P<0.01),加味桃红四物汤组PTX3和EGR2基因表达较模型组明显降低(P<0.01).结论 加味桃红四物汤对心肌缺血再灌注损伤具有缓解作用,表现为改善模型大鼠心功能、减少细胞凋亡和炎症因子释放及减轻氧化应激水平,其机制可能与调控PTX3和EGR2基因表达有关.

目的 探讨天灸"肺俞"穴对健康大鼠辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)免疫平衡的影响.方法 将48只大鼠随机分为假天灸组10只,天灸组38只.假天灸组大鼠将空白的穴位贴贴敷于双侧"肺俞"穴,天灸组大鼠将填有复方斑蝥膏的穴位贴贴敷于双侧"肺俞"穴,贴敷时间为8 h.8 h后天灸组大鼠成功发泡30只,再随机分为天灸1天组、天灸3天组、天灸7天组,每组10只.实验期间记录大鼠一般情况;天灸不同时间组在相应时间取材,采用HE染色观察大鼠贴敷区域皮肤的病理改变;采用流式细胞术检测外周血Th17、Treg细胞表达,计算Th17/Treg值;采用ELISA法检测血清白细胞介素17A(IL-17A)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)含量.结果 与假天灸组比较,天灸1天组大鼠贴敷区域可见水泡,大鼠经常搔抓天灸区域皮肤,皮肤出现角质层松散,棘层、颗粒层增厚,基底层细胞缺失,炎性细胞浸润,外周血Treg及血清IL-17A、IL-6水平升高(P＜0.01);天灸3天组天灸区域结痂并可见部分脱落,皮肤病理改变最明显,外周血Th17、Treg表达及血清IL-17A、IL-6、IL-10水平升高(P＜0.01);天灸7天组天灸区域皮肤损伤及病理改变基本恢复.天灸1、3、7天组Th17/Treg值均较假天灸组降低(P＜0.05或P＜0.01).与天灸1天组比较,天灸3天组外周血Th17、Treg表达及血清IL-17A升高;天灸7天组外周血Treg表达及血清IL-17A、IL-6降低,Th17/Treg值升高(P＜0.05或P＜0.01).与天灸3天组比较,天灸7天组外周血Th17、Treg表达及血清IL-17A、IL-6、IL-10降低,Th17/Treg值升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 天灸"肺俞"穴能使健康大鼠Th17/Treg平衡向Treg偏移,使其逐渐趋向免疫平衡,并调节血清中相关的炎症因子防止炎症的发生发展.

CRISPR/Cas是原核生物在进化过程中获得的一种免疫防御系统,用于抵抗外来遗传物质的入侵,近年来被开发成为高效的基因编辑、基因调控以及分子诊断工具.其可编程靶向机制揭开了利用该系统进行基因组操作的序幕,并允许在活性范围内实现动态调节和控制基因表达.作为现有基因修饰手段中灵活性最强和成本最低的技术之一,已被广泛应用于临床疾病治疗、工农业生产、可持续染料开发和化学品加工等领域.随着对CRISPR/Cas系统的不断深入挖掘和探索,大量研究报道了 gRNA工程改造及优化方法,包括改变间隔序列长度、调节恒定区和可变区的结构、向末端或中间延伸添加额外功能序列及化学合成修饰等,以期降低脱靶突变率,提高作用效率,充分激发CRISPR基因操纵工具在生物医学方面的潜力.基于此,本综述将介绍CRISPR/Cas9和CRISPR/Cas12系统中gRNA工程化设计方法及应用研究的最新进展,分析探讨了当前工程化gRNA技术面临的机遇和挑战,旨在为获得性能更加优异的gRNA提供思路和方向,从而提高利用CRISPR/Cas系统探测人类细胞基因组的能力,进一步为可编程生物学带来更多可能性.

目的 基于铁死亡通路探究大叶茜草素抑制肝细胞癌的作用机制.方法 体外培养肝癌HepG2细胞,根据IC50分为对照组、大叶茜草素低剂量组(10 μmol/L)、大叶茜草素中剂量组(20 μmol/L)和大叶茜草素高剂量组(40 μmol/L),CCK-8法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞毒性,克隆形成实验观察细胞克隆能力,检测细胞谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、超氧化物、脂质过氧化物含量及线粒体膜电位(MMP),Western blot检测细胞铁死亡抑制蛋白1(FSP1)、GTP环化水解酶1(GCH1)、二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)4蛋白表达,RT-qPCR检测FSP1、DHODH、GCH1、GPX4 mRNA表达.在过表达和沉默GPX4条件下观察大叶茜草素对HepG2细胞活力和GSH、MDA含量的影响.结果 中、高剂量大叶茜草素可减少HepG2细胞克隆形成数目,降低细胞GSH含量和SOD活性,升高MDA、超氧化物、脂质过氧化物和ROS含量,降低MMP(P<0.001).大叶茜草素干预对HepG2细胞FSP1、GCH1、DHODH蛋白和mRNA表达无显著影响,可降低GPX4蛋白和mRNA表达(P<0.001),过表达和沉默实验验证GPX4是大叶茜草素调控铁死亡的核心靶点.结论 大叶茜草素主要通过调节GPX4介导的铁死亡发挥抗肝细胞癌作用.

目的 探讨血必净联合核因子E2相关因子2(Nrf2)激活药对脂多糖(LPS)诱导的肝细胞损伤的保护作用.方法 将人正常肝细胞L-02随机分为对照组(正常培养)、LPS组(40 μg·mL-1LPS)、血必净组(稀释25倍的血必净)、抑制药组(40 μg·mL-1 LPS+5 μmol·L-1 Nrf2 抑制药 ML385)、激活药组[40 μg·mL-1 LPS+15μg·mL-1萝卜硫素(Nrf2激活药)]、血必净+激活药组(40 μg·mL-1 LPS+稀释25倍的血必净+15 μg·mL-1萝卜硫素);处理24 h后,用蛋白质印迹法检测细胞核Nrf2,用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(Edu)实验检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用荧光探针法检测各组细胞活性氧(ROS)水平.结果 对照组、LPS组、血必净组、抑制药组、激活药组、血必净+激活药组细胞核Nrf2蛋白表达水平分别为0.83±0.08、0.40±0.04、0.59±0.07、0.26±0.04、0.90±0.10 和 1.24±0.13,Edu 阳性细胞率分别为(42.99±4.37)％、(16.30±1.42)％、(30.08±2.10)％、(14.67±1.27)％、(28.66±2.54)％和(38.31±2.54)％,细胞凋亡率分别为(4.39±0.42)％、(25.17±3.70)％、(14.44±0.99)％、(28.14±1.26)％、(17.99±1.30)％和(10.50±0.86)％,ROS 平均光密度值分别为 1.00±0.04、3.48±0.34、1.88±0.15、4.25±0.37、1.87±0.19 和 1.26±0.12;LPS 组上述指标与对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05);血必净组、抑制药组、激活药组上述指标与LPS组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05);血必净+激活药组上述指标分别与血必净组、激动剂组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 血必净联合Nrf2激活药可通过增强抗氧化系统减轻LPS诱导的肝细胞损伤,其联合治疗效果优于血必净单独用.

目的 分析ⅡA/ⅡB期睾丸精原细胞瘤术后患者放疗前后肿瘤标志物、淋巴细胞/单核细胞比值(LMR)动态变化及其与放疗效果的关系.方法 回顾性分析山西省肿瘤医院2012年7月至2020年7月收治的70例ⅡA/ⅡB期睾丸精原细胞瘤术后患者的临床资料,根据放疗近期疗效情况将患者分为有效组(n=16)和无效组(n=54).记录并整理患者基线资料、放疗前后肿瘤标志物水平及LMR值,分析肿瘤标志物、LMR与放疗近期疗效的关系.结果 肿瘤直径＞40 mm、睾丸血管浸润是影响ⅡA/ⅡB期睾丸精原细胞瘤术后患者放疗近期效果的危险因素(P＜0.05).有效组放疗后血清乳酸脱氢酶(LDH)水平低于放疗前,LMR值高于放疗前(P＜0.05);无效组放疗前、后血清LDH水平高于有效组,LMR值低于有效组(P＜0.05).两组放疗前、后血清甲胎蛋白(AFP)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平比较及组内比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).放疗前、后血清LDH水平与肿瘤直径、睾丸血管浸润均呈正相关(r＞0,P＜0.05);放疗前、后LMR值与肿瘤直径、睾丸血管浸润均呈负相关(r＜0,P＜0.05).放疗前血清LDH水平、LMR值及联合预测放疗无效的曲线下面积均＞0.7,联合预测的价值更高.结论 睾丸精原细胞瘤患者术后血清LDH水平、LMR值与放疗近期疗效密切相关.

目的 探讨CIB1对三阴性乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制.方法 通过慢病毒转染构建过表达CIB1的MDA-MB-231和MDA-MB-468细胞,实验分为NC组和CIB1组.采用细胞计数试剂盒8(CCK8)、5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力.同时,采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测细胞内β-catenin、活化蛋白C(APC)、糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、c-myc的mRNA和蛋白表达情况.结果 MDA-MB-231 细胞内 NC 组和 CIB1 组 CIB1 蛋白表达水平分别为 0.75±0.17 和 1.53±0.38,t=3.267,P=0.031.MDA-MB-468 细胞内 NC 组和 CIB1 组 CIB1 蛋白表达水平分别为 0.91±0.01 和 1.12±0.07,t=4.953,P=0.008.CCK8实验结果显示,MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义,F组别=120.088,P组别＜0.001;F时间=408.784,P时间＜0.001;F组别×时间=14.177,P组别×时间＜0.001.MDA-MB-468细胞中NC组和CIB1组增殖力差异有统计学意义,F组别=277.649,P组别＜0.001;F时间=1 281.882,P时间＜0.001;F组别×时间=33.378,P组别×时间＜0.001.EdU实验结果显示,MDA-MB-231细胞中NC组和CIB1组增殖率分别为(31.42±0.01)％和(46.20±0.02)％,t=14.610,P＜0.001;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组增殖率分别为(30.57±0.02)％和(42.61±0.03)％,t=6.397,P=0.003.MDA-MB-231 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞凋亡率分别为(4.77±0.01)％和(2.07±0.10)％,t=3.785,P=0.019;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞凋亡率分别为(9.53±0.00)％、(3.90±0.00)％,t=19.390,P＜0.001.MDA-MB-231 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞迁移率分别为(46.20±0.01)％和(64.35±0.10)％,t=3.386,P=0.028;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组细胞迁移率分别为(24.84±0.05)％和(56.83±0.06)％,t=7.278,P=0.002.MDA-MB-231 细胞中 NC 组和 CIB1 组穿膜细胞数分别为(300.67±25.17)和(411.67±24.99)个,t=5.421,P=0.006;MDA-MB-468 细胞中 NC 组和 CIB1 组穿膜细胞数分别为(257.00±31.43)和(388.00±8.72)个,t=6.956,P=0.002.qRT-PCR 和蛋白质印迹实验结果显示,MDA-MB-231 和 MDA-MB-468 细胞中 CIB1 组 β-catenin、APC、c-myc mRNA和蛋白表达均升高,GSK-3β mRNA和蛋白表达均降低,差异均有统计学意义,均P＜0.05.结论 CIB1促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,抑制细胞凋亡,可能通过促进Wnt/β-catenin信号通路的激活发挥促癌作用.