目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)CYP1B1-AS1对急性髓系白血病细胞增殖和迁移的影响及机制.方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CYP1B1-AS1在急性髓系白血病细胞系THP-1、NB4、HL-60、KG-1、SKM-1和骨髓基质细胞HS-5中的表达量.通过5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理急性髓系白血病细胞系,RT-qPCR检测5-Aza-CdR对CYP1B1-AS1表达的影响.根据转染物不同分别将HL-60细胞分为NC组和CYP1B1-AS1组.克隆形成实验和划痕实验依次检测HL-60细胞的增殖和迁移能力.双荧光素酶实验验证CYP1B1-AS1 与微小 RNA(miR)-1306-5p 的靶向关系.RT-qPCR 检测 CYP1B1-AS1 对 HL-60 细胞 miR-1306-5p表达的影响.免疫印迹法检测CYP1B1-AS1对HL-60细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期素E(Cyclin E)和转录因子(Twist)、纤维连接蛋白(Fibronectin)表达的影响.结果:与HS-5细胞比较,CYP1B1-AS1在急性髓系白血病细胞系中表达量降低,且HL-60细胞系中CYP1B1-AS1表达量最低(均P＜0.05).5-Aza-CdR能够明显促进急性髓系白血病细胞系中CYP1B1-AS1的表达(均P＜0.05).与NC组比较,CYP1B1-AS1组HL-60细胞增殖能力和迁移率降低(均P＜0.05).过表达miR-1306-5p能够抑制野生型CYP1B1-AS1的荧光素酶活性(P＜0.05).与NC组比较,CYP1B1-AS1组HL-60细胞中miR-1306-5p表达减少,细胞增殖和迁移相关蛋白CDK2、Cyclin E、Twist、Fibronectin表达降低(均P＜0.05).结论:过表达CYP1B1-AS1可能通过靶向下调miR-1306-5p表达抑制急性髓系白血病细胞的增殖和迁移.

目的 观察微小RNA-1306-5p(miR-1306-5p)在急性髓系白血病(AML)患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对人白血病细胞株HL60增殖凋亡和迁移侵袭调控作用.方法 分别提取初诊AML患者和再生障碍性贫血(AA)患者骨髓组织单个核细胞,采用qRT-PCR法检测单个核细胞miR-1306-5p;②取HL60细胞,分别转染过表达和敲低miR-1306-5p质粒(mimics control、miR-1306-5p mimics、inhibitor control、miR-1306-5p inhibitor,计为1、2、3、4组),转染48 h后采用CCK8法检测各组细胞OD值,流式细胞术和Transwell法分别检测各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数.结果 AML患者和AA患者miR-1306-5p相对表达量分别为0.27±0.07、1.00±0.08,两者比较,P<0.05.与mimics control组比较,miR-1306-5p mimics组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数降低,凋亡率升高(P均<0.05);与inhibitor control 组比较,miR-1306-5p inhibitor组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数升高,凋亡率降低(P均<0.05).结论 AML患者骨髓组织单个核细胞miR-1306-5p表达降低,转染过表达miR-1306-5p质粒的HL60细胞增殖、迁移、侵袭能力减弱及凋亡能力增强,敲低miR-1306-5p质粒的HL60细胞增殖、迁移、侵袭能力增强及凋亡能力减弱.

目的 探究大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤后微小核糖核酸(microRNA)表达谱差异,并通过生物信息学分析预测差异表达microRNA在星形胶质细胞被损伤诱导活化后的作用.方法 使用细胞损伤控制仪Ⅱ型构建大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤模型,阀门压力设置为40 PSI,模拟重型颅脑损伤.损伤后24 h收集对照组及损伤组星形胶质细胞总RNA,使用Agilent microRNA芯片检测差异表达microRNA,通过R语言软件构建火山图及聚类分析热图;利用DIANA TOOLS和miRDB数据库预测microRNA的靶基因,并对靶基因集进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析;使用STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络,应用Cytoscape软件筛选关键基因.结果 大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤24 h后共有9个microRNA差异表达[| Log2 Fold Change(FC)|≥0.26,P＜0.05],其中5个表达上调,分别是rno-miR-34a-5p、rno-miR-34b-5p、rno-miR-129-5p、rno-miR-140-3p 和 rno-miR-7a-5p;4 个表达下调,分别是 rno-miR-199a-3p、rno-miR-199a-5p、rno-miR-221-3p 和 rno-miR-1306-3p.rno-miR-34b-5p 差异表达倍数最为显著,对其进行靶基因预测共获得154个基因,进一步的GO和KEGG富集分析发现,rno-miR-34b-5p靶基因参与蛋白磷酸酶2A结合及磷脂酶C活性正向调节,并调控磷脂酶D信号通路、MAPK信号通路及PI3K-AKT信号通路,与颅脑创伤(TBI)后神经修复及再生密切相关.同时使用靶基因集构建PPI网络,筛选5个关键基因,分别为Tp53、Notch 1、Ki tlg、Pdgfrb和Pdgfra.结论 大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤后rno-miR-34b-5p显著升高,生物信息学预测rno-miR-34b-5p靶向抑制Notch1及PDGFRA基因的表达,降低PI3K-AKT信号通路活性,可能使损伤星形胶质细胞向A1型转化,阻碍TBI后神经修复及再生.本研究为TBI后康复治疗提供了潜在的作用新靶点及新的研究方向.