目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)RP11-497E19.1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其机制.方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胃癌HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS细胞和永生化胃上皮细胞GES-1中RP11-497E19.1表达水平,筛选表达最高的细胞进行后续实验.将HS-746T细胞分为si-NC组和si-RP11-497E19.1组,分别转染阴性对照寡核苷酸或RP11-497E19.1小干扰RNA.集落形成实验和Transwell实验分析转染HS-746T细胞的增殖、侵袭能力.双荧光素酶报告基因实验验证RP11-497E19.1与微小RNA(miR)-545-5p的靶向关系.RT-qPCR检测转染HS-746T细胞miR-545-5p的表达.Western blot检测转染HS-746T细胞间质表皮转化因子(c-Met)/胆绿素还原酶(BVR)/活化复制因子2(ATF-2)分子通路相关蛋白的表达.结果:与GES-1 细胞比较,HS-746T、BGC823、NCI-N87、SGC7901、AGS 细胞中 RP11-497E19.1 表达水平均上升,且HS-746T细胞 RP11-497E19.1 表达水平最高(均 P＜0.05).与 si-NC 组比较,si-RP11-497E19.1 组 HS-746T 细胞活力和细胞侵袭数降低(均P＜0.05).双荧光素酶报告基因实验证实RP11-497E19.1靶向结合miR-545-5p,可负向调控 miR-545-5p 表达(P＜0.05).与 si-NC 组比较,si-RP11-497E19.1 组 HS-746T 细胞 c-Met/BVR/ATF-2 分子通路蛋白c-Met、BVR、p-ATF-2、锌指蛋白1(Snail1)、锌指蛋白2(Snail2)表达降低(均P＜0.05).结论:胃癌细胞中RP11-497E19.1呈高表达,沉默RP11-497E19.1通过靶向miR-545-5p/c-Met/BVR/ATF-2分子通路抑制胃癌HS-746T细胞的增殖及侵袭.

目的 探讨结直肠癌组织环状RNA PRKCI(circPRKCI)、微小RNA-545(miR-545)的表达及其对预后的影响.方法 收集2013年3月—2018年4月在郑州市第七人民医院行手术切除治疗的102例结直肠癌患者的癌组织和癌旁组织标本,分析circPRKCI、miR-545的表达与结直肠癌患者临床病理参数及预后的关系.结果 与癌旁组织相比,circPRKCI在结直肠癌组织中的表达显著上调(1.47±0.69 vs.0.82±0.42,t=8.644,P＜0.05),miR-545在结直肠癌组织中的表达显著下调(0.86±0.55 vs.1.60±0.66,t=8.908,P＜0.05).有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期患者circPRKCI表达升高,miR-545表达下降(P＜0.05).circPRKCI高表达、miR-545低表达患者的预后较差(P＜0.05),circPRKCI和miR-545是结直肠癌患者预后不良的独立影响因素,两者表达呈负相关关系.结论 circPRKCI、miR-545与结直肠癌患者的不良病理参数和预后相关,circPRKCI可能调控miR-545参与结直肠癌的进展.

目的 探讨微小RNA-545-3p(miR-545-3p)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对血管内皮生长因子A(VEGFA)/血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)信号通路的调控作用.方法 qRT-PCR检测miR-545-3p在不同前列腺癌细胞中的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-545-3p与VEGFA的相互作用;MTT实验与流式细胞术检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞增殖能力及凋亡行为的变化;Western blot检测miR-545-3p过表达及VEGFA过表达后前列腺癌细胞CDK1、Bcl2、Bax及VEGFA/VEGFR2信号通路蛋白的表达水平变化.结果 miR-545-3p在前列腺癌细胞中的表达水平降低,与其他前列腺癌细胞相比,DU145细胞中miR-545-3p的表达水平较低;双荧光素酶实验证实miR-545-3p可调控VEGFA的表达及活性;miR-545-3p过表达可减弱前列腺癌细胞增殖能力,促进细胞凋亡;miR-545-3p过表达可下调VEGFA、p-VEGFR2、CDK1、Bcl2的表达,同时过表达VEGFA后可逆转miR-545-3p对前列腺癌细胞增殖及凋亡的作用.结论 miR-545-3p过表达可通过抑制VEGFA/VEGFR2信号通路而抑制前列腺癌细胞增殖及诱导癌细胞凋亡.

目的 探讨微小RNA(miRNA,miR)-423-5p在脂肪间充质干细胞(MSC)外泌体治疗老龄心力衰竭(HF)大鼠的作用机制.方法 选择18月龄SPF级大鼠38只,随机分为治疗组24只和模型组14只,2组腹腔注射异丙肾上腺素14 d,构造HF模型.治疗组给予心肌内注射脂肪MSC外泌体后饲养2周.用Western blot鉴定其纯度;通过苏木精-伊红染色和Masson染色检测心肌损伤及纤维化程度;通过TargetScan和miRDB数据库对miR-423-5p的靶基因进行预测,并预测信号通路;用实时荧光定量PCR检测miR-423-5p、磷脂酰肌醇3激酶(P13K)和蛋白激酶B(Akt)基因表达,Western blot检测P13K和Akt蛋白表达.结果 与模型组比较,治疗组miR-423-5p表达量明显降低(P<0.05).苏木精-伊红和Masson染色显示,治疗组心肌损伤和纤维化均较模型组明显改善.Tar-getScan和miRDB数据库预测显示,miR-423-5p的靶基因分别是141个和545个,Draw Venn分析显示,2个数据库共同靶基因为52个,占总量的8.2％.预测分析显示,通路富集出4条信号通路,排在首位的为PI3K-Akt信号通路.与模型组比较,治疗组PI3K、Akt基因和蛋白表达显著下降(P<0.05).结论 脂肪MSC外泌体能治疗老龄HF大鼠,其机制可能通过miR-423-5p调节PI3K-Akt信号通路的途径产生作用.

目的 研究微小RNA-545-3p在结直肠癌(CRC)进展中的作用和调控机制.方法 正常培养的人结直肠黏膜上皮细胞系NCM460以及人CRC细胞系(HCT-15、HCT-116和HCT-8)分为NCM460组、HCT-15组、HCT-116组和HCT-8组.将miR-545-3p模拟物、模拟物阴性对照、miR-545-3p抑制剂、抑制剂阴性对照和血管内皮生长因子A(VEGFA)过表达载体、miR-545-3p模拟物和VEGFA过表达载体分别转染至HCT-116细胞,分别为miR-545-3p mimic组、mimic-NC组、miR-545-3p inhibitor组、inhibitor-NC组、mimic-NC+VEGFA组、miR-545-3p mimic+VEGFA组.以实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测CRC患者癌组织和细胞系中miR-545-3p和VEGFA的表达水平.以细胞计数法-8(CCK-8)检测细胞增殖能力;以Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;以原位末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡;以蛋白质印迹(Western blot)法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和VEGFA蛋白的表达;以双荧光素酶实验检测miR-545-3p和VEGFA之间的靶向关系.结果 mimic-NC组、miR-545-3p mimic组、mimic-NC+VEGFA组、miR-545-3p mimic+VEGFA组在48 h时的光密度值分别为1.12±0.06,0.58±0.04,1.26±0.08,0.61±0.09,细胞迁移数分别为96.24±7.20,53.32±8.60,134.24±9.97,57.34±10.62,细胞侵袭数分别为85.24±6.71,47.64±8.59,121.35±11.28,63.21±7.42.以上指标,miR-545-3p mimic组与mimic-NC组相比差异均有统计学意义(均P<0.05),miR-545-3p mimic+VEGFA组与mimic-NC+VEGFA组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 miR-545-3p可通过调控VEGFA的表达进而调控结直肠癌的进展.

目的 探究胰腺癌组织中皮层肌动蛋白(cortical actin,CTTN)、微小核糖核酸(micro RNA,miR)-545-3p的表达情况及其与患者预后的相关性.方法 募集2016年1月～2018年12月南通大学附属医院行腹腔镜胰腺癌切除手术的胰腺癌患者138例,采集胰腺癌组织和癌旁正常组织,通过实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)检测CTTN mRNA和miR-545-3p表达,二者的相关性通过Pearson法进行分析,分析CTTN mRNA和miR-545-3p表达与临床病理特征的关系,绘制Kapplan-Meier生存曲线分析胰腺癌组织中CTTN mRNA和miR-545-3p表达与患者生存率的关系,经COX回归对影响胰腺癌患者生存的危险因素进行分析.结果 与癌旁正常组织比较,胰腺癌组织中CTTN mRNA表达上调(2.11±0.87 vs 1.02±0.46),miR-545-3p表达下调(0.45±0.19 vs 0.97±0.42),差异均有统计学意义(t=12.895,13.251,均P=0.000);胰腺癌组织中CTTN mRNA和miR-545-3p之间具有负相关性(r=-0.410,P<0.05);CTTN mRNA和miR-545-3p表达均与肿瘤分化程度、TNM分期以及淋巴结转移有关(t=2.473～11.418,均P<0.05).根据CTTN mRNA和miR-545-3p表达量的均值将所有患者依次分为CTTN mRNA高表达组和CTTN mRNA低表达组,miR-545-3p高表达组和miR-545-3p低表达组.生存曲线分析得出,CTTN mRNA低表达组三年生存率高于CTTN mRNA高表达组(24.62％vs 9.59％),miR-545-3p高表达组三年生存率高于miR-545-3p低表达组(25.37％vs 8.45％),差异均有统计学意义(χ2=4.560,P=0.033;χ2=5.941,P=0.015).存在淋巴结转移、高CTTN mRNA表达、低miR-545-3p表达是胰腺癌患者术后三年死亡的危险因素(Waldχ2=1.885,1.562,0.625,均P<0.05).结论 胰腺癌组织中CTTN mRNA高表达和miR-545-3p低表达均与患者预后不良有关.