心肌细胞的钾通道电流按整流现象分为外向整流钾电流,例如瞬时外向钾电流(Ito)和延迟整流钾电流(IK),以及内向整流钾电流(IK1).已有研究认为药物的致心律失常作用与其阻断延迟整流钾通道IK有关.促胃肠动力药西沙必利就是如此.扎考必利是另一种促胃肠动力药,与西沙必利同属于5-羟色胺(5-HT)4受体激动剂,兼有5-HT3(5-HT3)受体拮抗剂的作用.我们曾观察比较了它与西沙必利对心功能和心律的影响,结果发现,与西沙必利相比,在一定的浓度范围内扎考比利对大鼠心功能无影响,也不引起心律失常,具有较好的安全性[1].本研究将同时观察扎考必利对Ito、IK、IK13种心肌细胞钾离子通道电流的影响以分析其心脏安全性的机制.

目的:研究内向整流钾通道(IK1)激动剂扎考必利(zacopride,Zac)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFb)细胞活力和凋亡的影响,探讨其抑制心肌纤维化的机制.方法:以组织块消化和差速贴壁法原代分离培养SD乳鼠心室成纤维细胞,用AngⅡ诱导细胞建立细胞活化模型.将分离培养的CFb随机分为空白对照组、AngⅡ模型组、Zac干预组、Zac+BaCl2干预组、Zac+氯喹干预组和AngⅡ+卡托普利阳性对照组.CCK-8法检测Zac对CFb活力的影响;ELISA法测定CFb上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测心肌内向整流钾通道蛋白Kir2.1表达的变化.结果:与空白对照组比较,AngⅡ模型组CFb活力及胶原合成显著增加,Kir2.1的表达降低(P<0.05);与AngⅡ模型组比较,Zac干预组CFb活力及胶原合成显著降低,凋亡率显著升高,Kir2.1的表达明显上调(P<0.05);IK1阻断剂BaCl2和氯喹可阻断Zac对IK1通道的激动效应,明显逆转Zac的抗心肌纤维化作用.结论:Zac可明显抑制AngⅡ诱发的心肌纤维化,其机制可能与激动心肌内向整流钾通道,进而抑制成纤维细胞活力并诱导其凋亡有关.

目的 在麻醉大鼠或离体灌流大鼠心脏建立缺血/再灌注(再灌注)性心律失常模型,应用心肌内向整流钾通道(IK1)激动剂扎考比利(Zacopride)缺血预处理观察Zacopride对再灌注性心律失常的效应并分析可能的机制.方法 在体实验:结扎SD大鼠心脏冠状动脉左前降支,局部缺血15 min,松扎后再灌15 min,建立再灌注性心律失常模型.在缺血前3 min(缺血预处理,pretreatment)分别给予1.5、15或50 μg/kgZacopride.应用利多卡因(Lidocaine)做阳性对照药.全程连续记录心电图.离体实验:麻醉SD大鼠,开胸取出心脏,建立Tyrode液-Langendorff离体灌流系统,结扎SD大鼠心脏冠状动脉左前降支,局部缺血15 min,松扎后再灌15 min,建立离体再灌注性心律失常模型.缺血前3 min分别给予0.1、1或10 μmol/L Zacopride观察预处理对离体再灌注性心律失常的影响,IK1非特异性阻断剂BaCl21 μmol/L拮抗Zacopride的效应.结果 在体实验:应用1.5～50 Zacopride缺血预处理可显著抑制再灌注诱发的心律失常,最适剂量为15 μg/kg(P＜0.05),与利多卡因效应相仿(P＞0.05);离体实验:Langendorff离体灌流心脏应用0.1～10 μmol/LZacopride缺血预处理可有效抑制再灌注心律失常的发生,1 μmol/L为Zacopride作用最适浓度,其效应被1 μmol/L BaCl2明显逆转.结论 大鼠在体和离体实验证明,Zacopride预处理可有效抑制再灌注性心律失常;应用低剂量的BaCl2可消除Zacopride的抗心律失常作用,表明Zacopride抗缺血-再灌注性心律失常作用是通过其激动IK1通道介导的.

目的:研究扎考比利 (zacopride, ZAC) 对腹主动脉缩窄所致大鼠压力超负荷性心室重构的改善作用.方法:通过腹主动脉缩窄构建大鼠压力超负荷心室重构模型, 预防性给予ZAC、氯喹 (chloroquine, Chlor) 及ZAC+Chlor.连续给药8周, 超声心动图评价心功能;计算心重/体重比 (HW/BW) 和左心室/体重比 (LVW/BW) ;左心室心肌组织HE染色;透射电镜观察心肌细胞超微结构;Western blot检测大鼠心肌组织内向整流钾通道 (IK1) 蛋白表达;RT-PCR法检测心肌组织Kir2.1的mRNA表达.结果:与模型 (vehicle) 组相比, ZAC组大鼠心功能明显改善, LVEDS和LVEDD明显降低 (P <0.05) , LVEF和LVFS显著升高 (P <0.01) , HW/BW和LVW/BW显著降低 (P <0.05) , 心肌肥大程度降低, 心肌细胞横断面积明显减小 (P <0.01) , 心肌超微结构明显改善.Chlor明显阻断了ZAC对腹主动脉缩窄所致压力超负荷大鼠心室重构的保护作用.与vehicle组相比, ZAC组大鼠心肌组织IK1蛋白表达和Kir2.1的mRNA显著升高 (P <0.01) .结论:心肌IK1激动剂ZAC显著减轻大鼠左心室压力超负荷诱发的心室重构.

目的:研究心肌内向整流钾电流(IK1)激动剂扎考比利对腹主动脉缩窄后大鼠心功能及心肌纤维化的改善作用.方法:腹主动脉缩窄造成大鼠压力超负荷心室重构模型,将建模成功的80只大鼠通过随机数字表分为模型组、扎考比利组、氯喹组、扎考比利+氯喹组(每组20只),后三组依次预防性给予扎考比利、IK1阻断剂氯喹、扎考比利+氯喹.另设假手术组(n=10),开腹后只挂线,不结扎.连续给药8周后,采用血流动力学指标评价各组大鼠心功能,放射免疫学方法测定血浆B型利钠肽(BNP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,马松染色观察心肌间质胶原沉积,免疫组织化学法测定心肌组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达并计算胶原Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值,逆转录聚合酶链反应法检测心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3和Smad7信使RNA(mRNA)表达.结果:与模型组相比,扎考比利组大鼠左心室收缩压(LVSP)、左心室压力上升最大速率(+dP/dtmax)、左心室压力下降最大速率(-dP/dtmax)均显著升高,左心室舒张末期压力(LVEDP)显著降低,血浆BNP和TNF-α水平显著降低,心肌间质胶原面积明显减小,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达下降,且Ⅰ型/Ⅲ型胶原比值显著降低,心肌组织TGF-β1、Smad3 mRNA表达明显降低,Smad7 mRNA表达明显升高,差异均有统计学意义(P均<0.05).氯喹组和扎考比利+氯喹组上述各项指标与扎考比利组相比,差异均有统计学意义(P均<0.05),变化趋势与扎考比利组和模型组比较的上述结果相反.结论:扎考比利能够明显改善腹主动脉缩窄后大鼠的心功能与心肌纤维化程度,其机制可能与TGF-β1/Smads信号通路有关.