目的:用全基因组测序技术分析深圳市人民医院2008—2016年碳青霉烯类耐药大肠埃希菌（CR-ECO）的耐药基因构成情况及相关分子流行病学特征。方法:收集深圳市人民医院2008年1月1日至2016年12月31日的CR-ECO菌株，采用改良碳青霉烯类失活法和EDTA碳青霉烯类失活法进行表型确证，并采用llumina HiSeq进行二代测序，分析其耐药基因及相关分子生物学特征。结果:共收集CR-ECO非重复菌株16株，经过全基因组测序发现携带IMP-4基因5株，IMP-26基因1株，NDM-1基因1株，NDM-5基因4株，NDM-13基因2株。16株菌株中检测出AmpC酶和（或）超广谱β内酰胺酶（ESBL）基因及各类外排泵基因，11株CR-ECO出现OmpC膜孔蛋白基因缺失；多位点序列分型、血清学分型呈多样化。结论:深圳市人民医院2008—2016年CR-ECO的耐药机制主要以产IMP型或NDM型碳青霉烯酶同时合并AmpC酶和（或）ESBL为主。利用全基因组测序可快速了解菌株在基因水平上的分子生物学信息。

目的 分析碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的临床分布、耐药表型、耐药基因和同源性,为临床抗菌药物的合理使用及减少医院感染的暴发流行提供实验室依据.方法 收集宣武医院2015年1月至2016年6月临床分离的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌菌株,采用Whonet5.6分析耐药情况及分布,产酶表型检测采用改良Hodge试验和碳青霉烯酶失活法(CIM)试验,PCR方法扩增耐药相关基因(K PC、OXA48、NDM、IMP、VIM、TEM、DHA),运用质谱技术分析试验菌的同源性.结果 共收集耐碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌50株,占同期该院分离肺炎克雷伯菌的比例为28.1％(50/178),对常用抗菌药物均表现出高耐药性;50例中Hodge试验和耐碳青霉烯失活试验阳性者均占84.0％(42/50),二者同时阳性者占82.0％(41/50),符合率为97.6％.PCR扩增KPC基因型的阳性率为82.0％(41/50),其他耐药基因型阳性检出率分别为TEM 52.0％(26/50)、IMP 20.0％(10/50)、DHA14.0％(7/50)、VIM 12.0％(6/50)、NDM6.0％(3/50)和OXA48 2.0％(1/50),同时存在3种耐药基因型的菌株占36.0％(18/50),同时存在2种耐药基因型的菌株占26.0％(13/50),未检测到任何耐药基因菌株占10.0％(5/50).质谱同源性分析分为两大群,包括A1(42.0％)、A2(25.5％)和B(33.3％)型.结论 该院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌的临床分离率高,携带NDM、DHA、IMP、VIM、TEM、OXA-48等多种耐药基因型,以KPC-2基因型最多见;同源性以A型为主要流行株.

目的:探讨3种碳青霉烯酶检测方法——改良hodge试验、Carba NP试验、碳青霉烯类失活法(mCIM)筛选碳青霉烯类抗生素耐药肠杆菌科细菌的差异.方法:对23例待测菌株分别用3种方法进行检测并记录,然后进行比较分析.结果:改良hodge试验17株阳性,阳性率为73.9％;Carba NP试验19株阳性,阳性率为82.7％;mCIM试验20株阳性,阳性率为87.0％.结论:改良hodge试验步骤简单易行,结果稳定,阳性率高,但用时较长,可用于试验结果的再次验证,也可用于大量临床住院标本.Carba NP试验前期准备及步骤复杂,对操作者技术要求高,但它最短30 min内出现结果,颜色对比显著,可用于实验初期的快速检验.mCIM试验操作简单,符合率和特异性高,结果易于观察,可用于常规实验室碳青霉烯类的检测.

目的 评估碳青霉烯类失活法(carbapenem inactivation method,CIM)和改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型筛选的能力.方法 选取110株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌及25株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌,分别进行CIM和mCIM表型筛选试验,采用PCR法检测KPC-2、NDM-1、IMP-4、VIM-1、OXA-48耐药基因,结果进行统计学分析.结果 110株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中,有99株耐药基因检测阳性,包括77株KPC-2型、15株NDM-1型、2株同时携带KPC-2和NDM-1型、4株IMP-4型和1株VIM-1型.未检出OXA-48型基因.25株碳青霉烯类敏感菌株基因检测均为阴性.CIM试验敏感度为87.9％,特异度为94.4％;mCIM试验敏感度为95.0％,特异度为91.7％.为了比较抑菌环直径大小对实验结果的影响,将CIM试验阴性菌株分为2组,耐药基因阳性组抑菌圈直径明显低于基因阴性组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 通过对试验步骤及结果判读标准的优化,mCIM试验不仅保留了成本低、操作简单、敏感度高、特异度好等优点,其碳青霉烯酶筛选能力也得到明显提升,是一种经济高效的表型筛选方法.

目的 评价改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型的筛选能力.方法 分别收集碳青霉烯类耐药和敏感肠杆菌科细菌102株和53株,采用mCIM和eCIM进行碳青霉烯酶表型筛选试验,PCR法检测blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48耐药基因,并对表型筛选试验结果与基因检测结果的一致性进行统计分析.结果 102株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中97株检出耐药基因,包括51株blaKPC-2基因、38株blaNDM-1基因、5株blaIMP-4基因以及3株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因;mCIM检出阳性98株,阴性4株.98株mCIM阳性菌中,eCIM阳性46株,阴性52株.53株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌耐药基因检测及mCIM试验均为阴性.mCIM试验筛选碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶产生的敏感性为99.0％,特异性为96.6％,与PCR结果一致性Kappa值为0.959;eCIM筛选金属酶敏感性为93.5％,特异性为94.6％,Kappa值为0.881;eCIM筛选丝氨酸碳青霉烯酶敏感性为92.6％,特异性为95.8％,Kappa值为0.882.结论 mCIM试验与eCIM试验联合检测,不仅可以有效筛选碳青霉烯酶产酶株,而且可同时区分碳青霉烯酶类型,对流行病学调查研究及疾病治疗有重要意义.

目的 分析临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)对临床常用药物的耐药情况及碳青霉烯类失活法(CIM)、改良Hodge试验(MHT)对产碳青霉烯酶的筛选能力.方法 使用聚合酶链式反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳的方法检测菌株携带碳青霉烯酶相关基因结果为标准,评估CIM和MHT对医院2016年1月-2017年9月临床分离的非重复30株CRKP及40株敏感菌株的碳青霉烯酶(CSKP)表型筛选能力.结果 30株CRKP对替加环素、阿米卡星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率分别为0、13.33％、16.67％,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦和美罗培南耐药率分别为86.67％、93.33％、93.33％,对其他9种β-内酰胺类抗菌药物的耐药率为100.00％;除磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢唑林及替加环素外,CRKP对其他抗菌药物的耐药性较CSKP差异有统计学意义(P＜0.05).PCR结果表明30株CRKP均携带碳青霉烯酶基因;CIM和MHT灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100.00％、100.00％、100.00％和100.00％;96.67％、100.00％、100.00％和97.56％.结论 CRKP对常用抗菌药物表现出较高耐药性,碳青霉烯酶的产生是主要耐药机制,提示临床应加强抗菌药物的管理;与PCR相比,MHT和CIM均具有较高的灵敏度、特异度和预测值,可在常规实验室开展,CIM具有结果更准确、更易于观察、结果读取时间短等优势.

目的:研究江苏省仪征地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药相关酶表型和基因型的分布情况,探讨该地区广泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的主要机制.方法:根据常规药敏试验结果将鲍曼不动杆菌临床分离株分为广泛耐药组和普通组,分别选取25株和23株用改良EDTA纸片增效法检测金属β-内酰胺酶;用碳青霉烯失活法检测碳青霉烯酶;用双纸片协同试验法和三维试验法分别检测染色体和质粒介导的AmpC酶;用PCR方法检测耐药基因blaOXA-23、blaOXA-24、blaTEM、blaAmpC、blaVIM、blaNDM-1,对部分阳性产物进行测序比对.结果:鲍曼不动杆菌广泛耐药组和普通组分别占62.5％和37.5％.广泛耐药组中金属β-内酰胺酶阳性1株、碳青霉烯酶阳性4株、染色体和质粒介导的AmpC酶阳性分别为1株和23株;普通组中均未检出上述酶表型.广泛耐药组全部检出耐药基因blaOXA-23、blaTEM、blaAmpC,均未检出blaOXA-24、blaVIM、blaNDM-1;普通组中blaOXA-23、blaOXA-24、blaTEM、blaAmpC分别检出4、5、22、12株,未检出blaVIM、blaNDM-1.两组比较,质粒介导的AmpC酶和blaOXA-23、blaAmpC基因携带率的差异具有统计学意义(x2分别为40.627、34.183、15.511,P＜0.001).基因测序结果发现部分菌株的序列存在碱基插入或置换的改变.结论:鲍曼不动杆菌耐药性严重,产质粒介导的AmpC酶和blaOXA-23、blaAmpC基因介导的耐药机制是仪征地区鲍曼不动杆菌广泛耐药的主要机制.

目的 分析改良碳青霉烯类失活法(mCIM)试验与EDTA-碳青霉烯类失活法(eCIM)试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能.方法 80株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM),采用mCIM试验与eCIM试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型.以碳青霉烯酶基因检测结果为金标准,计算mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,计算eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶、丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,分析mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能.结果 80株菌株中,59株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其中57株试验菌株mCIM试验结果阳性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性为96.6％ (57/59).21株碳青霉烯酶基因阴性菌株,mCIM试验结果均阴性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的特异性为100.0％(21/21).33株金属-β-内酰胺酶基因(blaNDM、blaVIM、blaIMP基因)阳性,其中28株试验菌株eCIM试验结果阳性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的敏感性为84.8％ (28/33).47株金属-β-内酰胺酶基因阴性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的特异性为100.0％ (47/47).27株丝氨酸碳青霉烯酶基因(blaKPC基因)阳性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性为100.0％ (27/27).53株丝氨酸碳青霉烯酶基因阴性,其中51株试验菌株eCIM试验结果均阳性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的特异性为96.2％(51/53).结论 mCIM与eCIM联合实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型的敏感性和特异性较高.

目的 了解武汉大学人民医院碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床感染特点和耐药性,探讨乙二胺四乙酸-碳青霉烯类失活法(eCIM)联合改良碳青霉烯类失活法(mCIM)的临床应用,为有效防控院内感染和合理使用抗菌药物提供依据.方法 分析分离自不同类型临床样本的非重复CRE的药物敏感性试验数据.另随机选取80株亚胺培南和/或美罗培南敏感性降低[最小抑菌浓度(MIC)≥2μg/mL]的CRE,联合mCIM和eCIM判断其产金属β-内酰胺酶和丝氨酸碳青霉烯酶的情况.结果 共检出329株CRE,以肺炎克雷伯菌为主(59.0％),分布科室广泛,其中重症医学科和神经外科分别占16.4％和16.1％,感染部位多见于呼吸道(39.2％).CRE总体对米诺环素和替加环素耐药率较低,分别为25.1％和2.9％,对其他常用抗菌药物的耐药率均高于50.0％.随机选取的80株CRE中有57株产碳青霉烯酶,其中产金属β-内酰胺酶的CRE 28株.结论 武汉大学人民医院CRE耐药形势严峻,应随时监测,并根据药物敏感性试验结果合理用药.eCIM联合mCIM检测成本低、操作简单,是一种经济、高效的表型筛选方法.

目的 探讨呼吸机相关性肺炎(VAP)患者碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)感染的分子流行病学特征及影响因素.方法 选择非重复CRE感染的VAP患者58例(CRE感染组)、同期非CRE感染VAP患者116例(对照组).用DL-96细菌测定系统鉴定CRE,MIC法进行药物敏感试验与结果判断,用改良碳青霉烯灭活实验(mCIM)和四乙酸碳碳青霉烯类失活法(eCIM)检测碳青霉烯酶表型,用PCR法检测CRE耐药基因,用单因素及多因素非条件Logistic回归分析CRE感染的影响因素.结果 CRE感染组检出58株病原菌,感染患者多分布于ICU、神经外科及呼吸内科等;58株CRE中最常见的为肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌,所有分离的菌株对多黏菌素均高度敏感,对米诺环素、复方新诺明和阿米卡星等抗生素也具有较高的的敏感性;58株CRE仅mCIM阳性23株,mCIM与eCIM均阳性30株;肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌及产酸克雷伯菌均检测出不同种类的耐药基因,弗氏柠檬酸杆菌、黏质沙雷氏菌未检测出耐药基因.入住ICU＞7 d(OR=3.431,95％ CI 1.251 ～4.152)、含β-内酰胺酶抑制剂抗生素使用(OR=3.018,95％ CI1.102～5.394)、碳青霉烯类抗生素使用(OR =5.232,95％ CI2.579～7.561)是VAP患者CRE医院感染的独立危险因素.结论 VAP患者CRE医院感染的主要耐药基因为KPC-2和NDM-1;入住ICU＞7 d及使用含β-内酰胺酶抑制剂抗生素、碳青霉烯类抗生素的VAP患者易感染CRE.