目的:用全基因组测序技术分析深圳市人民医院2008—2016年碳青霉烯类耐药大肠埃希菌（CR-ECO）的耐药基因构成情况及相关分子流行病学特征。方法:收集深圳市人民医院2008年1月1日至2016年12月31日的CR-ECO菌株，采用改良碳青霉烯类失活法和EDTA碳青霉烯类失活法进行表型确证，并采用llumina HiSeq进行二代测序，分析其耐药基因及相关分子生物学特征。结果:共收集CR-ECO非重复菌株16株，经过全基因组测序发现携带IMP-4基因5株，IMP-26基因1株，NDM-1基因1株，NDM-5基因4株，NDM-13基因2株。16株菌株中检测出AmpC酶和（或）超广谱β内酰胺酶（ESBL）基因及各类外排泵基因，11株CR-ECO出现OmpC膜孔蛋白基因缺失；多位点序列分型、血清学分型呈多样化。结论:深圳市人民医院2008—2016年CR-ECO的耐药机制主要以产IMP型或NDM型碳青霉烯酶同时合并AmpC酶和（或）ESBL为主。利用全基因组测序可快速了解菌株在基因水平上的分子生物学信息。

目的 评价改良碳青霉烯类失活法(modified carbapenem inactivation method,mCIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)对肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型的筛选能力.方法 分别收集碳青霉烯类耐药和敏感肠杆菌科细菌102株和53株,采用mCIM和eCIM进行碳青霉烯酶表型筛选试验,PCR法检测blaKPC-2、blaNDM-1、blaIMP-4、blaVIM-1和blaOXA-48耐药基因,并对表型筛选试验结果与基因检测结果的一致性进行统计分析.结果 102株碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌中97株检出耐药基因,包括51株blaKPC-2基因、38株blaNDM-1基因、5株blaIMP-4基因以及3株同时携带blaKPC-2和blaNDM-1基因;mCIM检出阳性98株,阴性4株.98株mCIM阳性菌中,eCIM阳性46株,阴性52株.53株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌耐药基因检测及mCIM试验均为阴性.mCIM试验筛选碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌碳青霉烯酶产生的敏感性为99.0％,特异性为96.6％,与PCR结果一致性Kappa值为0.959;eCIM筛选金属酶敏感性为93.5％,特异性为94.6％,Kappa值为0.881;eCIM筛选丝氨酸碳青霉烯酶敏感性为92.6％,特异性为95.8％,Kappa值为0.882.结论 mCIM试验与eCIM试验联合检测,不仅可以有效筛选碳青霉烯酶产酶株,而且可同时区分碳青霉烯酶类型,对流行病学调查研究及疾病治疗有重要意义.

目的:研究江苏省仪征地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类药物耐药相关酶表型和基因型的分布情况,探讨该地区广泛耐药鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类耐药的主要机制.方法:根据常规药敏试验结果将鲍曼不动杆菌临床分离株分为广泛耐药组和普通组,分别选取25株和23株用改良EDTA纸片增效法检测金属β-内酰胺酶;用碳青霉烯失活法检测碳青霉烯酶;用双纸片协同试验法和三维试验法分别检测染色体和质粒介导的AmpC酶;用PCR方法检测耐药基因blaOXA-23、blaOXA-24、blaTEM、blaAmpC、blaVIM、blaNDM-1,对部分阳性产物进行测序比对.结果:鲍曼不动杆菌广泛耐药组和普通组分别占62.5％和37.5％.广泛耐药组中金属β-内酰胺酶阳性1株、碳青霉烯酶阳性4株、染色体和质粒介导的AmpC酶阳性分别为1株和23株;普通组中均未检出上述酶表型.广泛耐药组全部检出耐药基因blaOXA-23、blaTEM、blaAmpC,均未检出blaOXA-24、blaVIM、blaNDM-1;普通组中blaOXA-23、blaOXA-24、blaTEM、blaAmpC分别检出4、5、22、12株,未检出blaVIM、blaNDM-1.两组比较,质粒介导的AmpC酶和blaOXA-23、blaAmpC基因携带率的差异具有统计学意义(x2分别为40.627、34.183、15.511,P＜0.001).基因测序结果发现部分菌株的序列存在碱基插入或置换的改变.结论:鲍曼不动杆菌耐药性严重,产质粒介导的AmpC酶和blaOXA-23、blaAmpC基因介导的耐药机制是仪征地区鲍曼不动杆菌广泛耐药的主要机制.

目的 分析改良碳青霉烯类失活法(mCIM)试验与EDTA-碳青霉烯类失活法(eCIM)试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能.方法 80株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM),采用mCIM试验与eCIM试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型.以碳青霉烯酶基因检测结果为金标准,计算mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,计算eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶、丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,分析mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能.结果 80株菌株中,59株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其中57株试验菌株mCIM试验结果阳性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性为96.6％ (57/59).21株碳青霉烯酶基因阴性菌株,mCIM试验结果均阴性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的特异性为100.0％(21/21).33株金属-β-内酰胺酶基因(blaNDM、blaVIM、blaIMP基因)阳性,其中28株试验菌株eCIM试验结果阳性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的敏感性为84.8％ (28/33).47株金属-β-内酰胺酶基因阴性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的特异性为100.0％ (47/47).27株丝氨酸碳青霉烯酶基因(blaKPC基因)阳性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性为100.0％ (27/27).53株丝氨酸碳青霉烯酶基因阴性,其中51株试验菌株eCIM试验结果均阳性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的特异性为96.2％(51/53).结论 mCIM与eCIM联合实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型的敏感性和特异性较高.

目的 分析2015-2019年广州暨南大学附属第一医院肺炎克雷伯菌的感染情况和耐药性变迁,并进一步探讨其耐药机制,为临床防治肺炎克雷伯菌感染用药提供实验室依据.方法 采用回顾性分析方法,对我院2015-2019年分离的1514株肺炎克雷伯菌进行标本来源、科室分布、耐药性变化等分析,并对其中123株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)采用改良碳青霉烯类失活法(mCIM)和EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)进行碳青霉烯酶表型筛选试验,并通过PCR方法检测blaKPC、blaVIM、blaIMP和blaNDM4种最常见的碳青霉烯酶耐药基因.结果 2015-2019年期间我院肺炎克雷伯菌每年的平均分离率为9.44％,从临床标本分布来看,主要分离自痰液(47.36％)、尿液(23.51％)和血液(16.51％);从临床科室分布来看,分离率最高的依次是ICU病区(17.83％)、呼吸病房(17.83％)和神外病房(9.11％).肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物的耐药率相对较低(10％～30％),但在2019年明显上升;对喹诺酮类、头孢类、单环类、四环素类、磺胺类药物耐药率较高(30％～50％);除头孢哌酮/舒巴坦和复方磺胺甲噁唑外,对其他抗菌药物的耐药率均呈上升趋势.123株CRKP中全部菌株mCIM试验阳性(100％),118株检测出blaKPC基因(95.9％),5株eCIM试验阳性(4.1％),均检测出bla1MP基因,未检测出blaVIM和blaNDM基因.结论 ICU病区、呼吸病房和神外病房感染肺炎克雷伯菌的情况较为严重,肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物的耐药率呈明显上升趋势,mCIM试验和eCIM试验联合检测能够有效筛选产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌,产KPC型碳青霉烯酶是我院肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南耐药的主要机制.

目的 评估胶体金免疫层析法在产碳青霉烯酶肠杆菌目细菌(CPE)中的应用价值.方法 收集福建医科大学附属第一医院分离的65株肠杆菌目细菌,包括41株碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)和24株非CRE菌株.采用PCR法检测5种碳青霉烯类耐药基因(blaKPC、blaIMP、blaVIM、blaOXA-48-like、blaNDM),改良碳青霉烯类失活法(mCIM)与EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)以及胶体金免疫层析法检测碳青霉烯酶并分型,以PCR结果为参考,评估各方法的检测性能;挑取其中29株CRE与24株非CRE构建模拟阳性血培养瓶,报阳后以胶体金免疫层析法进行分型检测并评估其性能.结果 PCR结果发现25株菌携带blaKPC基因、7株携带blaNDM基因、4株携带blaIMP基因、4株同时携带blaKPC+NDM基因、1株同时携带blaKPC+NDM+IMP基因,另外24株未检出相应耐药基因.41株CRE的mCIM试验结果均为阳性,其中11株eCIM试验结果阳性.24株非CRE菌株的mCIM试验结果均为阴性.mCIM试验与eCIM联合试验检测丝氨酸酶的敏感性与特异性均为100.00％,Kappa值为1.000;检测金属酶的敏感性为68.75％、特异性为100.00％,Kappa值为0.725.胶体金免疫层析法均能准确检出临床分离株与血培养阳性标本中的碳青霉烯酶,与PCR法的分型结果一致,因此其敏感性与特异性均为100.00％,Kappa值为1.000.结论 胶体金免疫层析法操作简便、用时较短,具有较高的敏感性与特异性,同时可大大缩短CPE血流感染的诊断时间,适合临床的推广应用.

目的 了解某院临床分离耐碳青霉烯类肠杆科细菌(CRE)的耐药基因分布,为抗感染治疗提供依据.方法 收集某院2016-2019年临床分离的CRE菌株,用改良碳青霉烯类失活法(mCIM)及EDTA碳青霉烯类失活法(eCIM)分析耐药表型,PCR法检测碳青霉烯酶(CPAs)基因(blaKPC、blaGEs、blasME、blaIMP、blaNDM、blaVIM、blaIXA-48);分析主要菌种CAPs基因的占比差异.结果 65株CRE中,mCIM和eCIM试验的阳性率分别为93.8％(61/65)和61.5％(40/65);共检出CPAs基因60株,其中blaNDM1和blaNDM-5各19株,blaKPC 2 18株,blaIMP 3株,blaVIM-63 1株,未检出blaGEs、blasME及blaIXA-48.主要菌种CAPs基因占比差异有统计学意义.结论 某院临床分离的CRE主要携带的CPAs基因是blaNDM-1、blaNDM-5及blaKPC-2;不同菌种主要携带的CPAs基因不全相同.