基于高通量测序技术,对采自中国江西省宜丰县杨柳镇、贵州省石阡县白沙镇、贵州省湄潭县、贵州省凤岗县和贵州省施秉县5个不同地区的新古尼异虫草Metacordyceps neogunnii的真菌生态位进行研究.结果显示,新古尼异虫草生境土壤、菌表及其内菌核的真菌类群共涉及子囊菌门Ascomycota、担子菌门Basidiomycota、接合菌门Zygomycota、类原生动物门Rozellomycota 4个门及一些未定门的真菌;共17纲、43目、77科、129个属的177种真菌.在属的水平上,新古尼异虫草生境土壤(Cg1)的优势属为被孢霉Mortierella,相对丰度为84.86％,其次是分类地位未定的真菌(4.58％),毛壳菌科Chaetomiaceae 1属(1.22％);虫草菌表(Cg2)的优势属或种为新古尼异虫草M.neogunnii (83.66％),其次是粉红螺旋聚孢霉Clonostachys rosea(9.48％),帚枝霉属Sarocladium (2.07％)和被孢霉属(1.12％).而来自江西(JX)、石阡(SX)、凤岗(FG)、施秉(Cg3)4个不同地区的新古尼异虫草样本的内菌核优势属真菌均为新古尼异虫草,其相对丰度分别为:99.74％、99.50％、99.73％和98.82％,其余属相对丰度均小于1％.来自湄潭的干标本内菌核优势属为麦角菌科Clavicipitaceae的一个未定属,相对丰度则高达99.97％.综上结果表明,来自5个不同地区的新古尼异虫草种群的内菌核中不仅是新古尼异虫草M.neogunnii,同时有其他真菌存在.施秉样本周围的土壤真菌群落较虫草样本内菌核具明显的多样性.但有趣的是,采集虫草的土壤中不含新古尼异虫草,而具有相对丰度较大的被孢霉Mortierella spp.和木霉Trichoderma spp..来自湄潭的干标本,不含新古尼异虫草而是相对丰度较高的麦角菌科Clavicipitaceae一未知成员,其分类地位值得进一步研究.

采用TaqMan探针实时荧光PCR方法对冬虫夏草及其混伪品进行分子鉴定研究.从100份冬虫夏草及其混伪品中提取总DNA,依据核糖体(rDNA)内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列,利用MEGA7.0软件进行比较分析,找出冬虫夏草及其混伪品的变异位点,通过Primer Premier 6.0软件设计一对特异性引物和TaqMan探针,分别在两种实时荧光PCR仪(Genesig q16和Bio-Rad CFX96)上进行灵敏度和特异性鉴定研究.灵敏度研究表明,在Bio-Rad CFX96系统中,该方法对冬虫夏草DNA模版的检测下限为0.016 ng·μL-1;在Genesig q16系统中,该方法对冬虫夏草DNA模版的检测下限为15.527 ng·μL-1.特异性鉴定研究表明,在Genesig q16和Bio-Rad CFX96系统上,该方法对冬虫夏草均具有良好的特异性,能与混伪品下垂虫草、古尼虫草、蛹虫草、蝉花、凉山虫草、新疆虫草明显区分.TaqMan探针实时荧光PCR方法可实现对冬虫夏草及其混伪品的准确鉴定,为药材市场的管理提供技术支撑,对名贵中药材的鉴别具有较好应用前景.

[背景]新古尼异虫草具有多种药理作用,是一种具有开发潜力的新资源.但该虫草仍有很多活性物质值得探寻,目前对该虫草活性物质的研究多集中于大分子或极性物质,对小分子或弱极性物质的研究关注甚少.[目的]研究新古尼异虫草石油醚提取物中非极性/弱极性小分子化合物,以期完善该虫草中活性物质的化学指纹图谱库.[方法]利用石油醚对新古尼异虫草进行索氏提取,借助傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)和气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术鉴定分析石油醚萃取物中的物质组成.[结果]FTIR表明该虫草石油醚萃取物中含有C-H、C=O、C-O和C=C等官能团,经GC-MS进一步分析鉴定出109种化合物,主要包括烷烃、芳烃、烯烃、酸、酯、醇、胺等化合物,且首次检出甾类、芳烃类、烷烃类、酰胺类、烯烃类和酚类非极性/弱极性的小分子化合物,其中亚油酸及其同分异构体的相对含量最高(38.33％).[结论]从新古尼异虫草中提取得到多种小分子活性成分,补充了该虫草中的物质组成,为其高附加值利用提供数据支撑.

新古尼异虫草能提高机体免疫力、促进睡眠、增强记忆力和镇痛等作用,具有重要开发和利用价值.在系统总结近年来新古尼异虫草化学成分和药理作用等研究的基础上,指出新古尼异虫草的应用现状与开发方向,探讨虫革新资源的开发和产业化问题,为新古尼异虫草的资源利用以及虫草产业的发展提供参考.

目的 本研究以虫草类药材为研究对象,旨在探索虫草中总砷及砷形态、价态.方法 首先采用微波消解结合电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定药材总砷含量,其次采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)进行砷形态、价态分析.结果 22批次虫草类样品中,总砷含量差异较明显,含量范围在0.1～36.2 mg·kg-1之间,平均检出量为5.7 mg·kg-1,虫草类药材总砷含量水平较高;HPLC-ICP-MS分析结果表明,部分样品主要检出少量的亚砷酸、砷酸、砷甜菜碱、一甲基砷及一些少量的未知砷形态、价态,二甲基砷均未检出.相对总砷而言,游离的形态、价态砷检测结果普遍较低.游离的无机砷化合物中,其中亚砷酸(AsⅢ)最高为0.11 mg·kg-1,而砷酸(AsV)最高为0.58 mg·kg-1,无机砷总量(AsⅢ与AsV之和)平均值为0.29 mg·kg-1.结论 本研究初步明确了虫草类药材总砷及砷形态、价态残留情况,为菌类中药品种中总砷及砷形态价态研究提供借鉴,同时有助于进一步深入开展天然冬虫夏草中砷污染相关研究.