目的:探讨通过支持接触共培养模式，小鼠前庭支持细胞体外诱导人羊水干细胞向功能性神经元分化的可行性。方法:分离培养人来源的羊水干细胞。从新生C57BL/6J小鼠获取内耳前庭组织，经酶解消化、细胞培养，选取其空心球体，制备单细胞饲养层。将标记慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白nGFP的羊水干细胞种植在饲养层表面，形成支持接触共培养，期间不添加任何外源性神经生长因子及神经元信号诱导因子。检测分化后的羊水干细胞中神经元标记物β微管蛋白（β-Tubulin，Tuj1）、突触后致密蛋白PSD95的表达；标记功能性突触小泡技术（FM1-43穿透）检测分化后细胞是否具有神经元离子通道。同时观察羊水干细胞单独分化、小鼠前庭支持细胞单独分化、Transwell共培养体系中羊水干细胞和饲养层细胞神经元的分化情况。结果:单细胞饲养层表达内耳支持细胞特异性标记物细胞周期蛋白激酶抑制因子P27 kip1。nGFP标记过的羊水干细胞接种于饲养层后，nGFP表达阳性的部位有（52.0±3.0）%的细胞表达Tuj1，并具有典型的神经元形态特征，突起长度平均（110.7±6.2） μm。饲养层细胞单独分化，仅有（1.1±0.6）%的细胞表达Tuj1阳性且形态典型的神经元；羊水干细胞单独分化，（92.0±1.0）%的细胞表达神经元标记物Tuj1，但无典型的神经元形态特征，突起长度平均（16.0±4.1） μm。将羊水干细胞与饲养层在Transwell中共培养，虽然（92.0±1.0）%的羊水干细胞表达Tuj1，但仍无典型的神经元形态特征，突起长度平均（17.0±4.5）μm，饲养层仅有（1.2±0.9）%的细胞Tuj1表达阳性且具有典型的神经元形态。 结论:通过支持接触共培养模式，由小鼠前庭来源的内耳支持细胞制备的饲养层，可成功将人羊水干细胞定向诱导分化为功能性神经元。

目的:建立一种拉曼光谱技术检测血清的方法，用于胃癌诊断的研究。方法:收集2019年4—11月在陆军军医大学第一附属医院确诊的胃癌患者110例［男73例，女37例，年龄为（57.4±10.3）岁］，确诊的结直肠癌患者74例［男48例，女26例，年龄为（58.3±12.2）岁］，以及同期健康体检者100名［男59名，女41名，年龄为（55.6±10.61）岁］，收集受试者空腹静脉血血清样本，使用XploRA PLUS型拉曼光谱仪，在激发光源532 nm、100倍物镜、取谱区间200~2 000 cm -1等条件下，对血清样本进行无损、非接触式快速检测，采集血清样本的拉曼光谱图。使用拉曼光谱采集和处理配套软件LabSpec6对获得的拉曼光谱进行平滑、基线校正、归一化处理，将获得的拉曼光谱数据导入到多变量统计学分析软件SIMCA14.1中，使用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）方法进行统计学分析，构建模型分析健康和胃癌两组血清样本之间的差异，绘制工作特征曲线（ROC）评估模型的诊断性能，并使用结直肠癌组血清样本对模型的可靠性进行验证。 结果:检测健康组和胃癌组血清样本获得重复性较好的6个拉曼光谱峰，分别位于1 001.17、1 154.63、1 337.89、1 446.85、1 515.33、1 658.34 cm -1处，在这6个拉曼峰处，健康组和胃癌组的拉曼强度差异明显。在1 001.17、1 154.63、1 515.33 cm -1位移处，健康组拉曼强度高于胃癌组；在1 337.89、1 446.85、1 658.34 cm -1位移处，胃癌组拉曼强度高于健康组。得到模型的R 2X（cum）=0.809，R 2Y（cum）=0.819，Q 2（cum）=0.758，基于OPLS-DA模型绘制ROC特征曲线，胃癌组曲线下面积（AUC）分别为0.998。在胃癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期血清拉曼光谱中可检测到重复性较好的6个峰，分别位于1 001.85、1 155.07、1 338.36、1 445.75、1 515.92、1 657.68 cm -1位移处，在1 155.07、1 515.92 cm -1位移处，胃癌Ⅳ期拉曼强度显著高于胃癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期。 结论:健康组与胃癌OPLS-DA模型性能良好，能将健康组和胃癌组有效的区分开；模型可靠性验证发现健康组、胃癌组、结直肠癌组也能有效的分离；拉曼光谱检测血清技术联合多变量统计中的OPLS-DA方法，可实现对健康者与胃癌患者血清样本的非标记检测。

目的:探讨螺旋式端侧编织缝合技术结合异体神经移植治疗创伤性神经瘤(taumatic neuroma，TN)的临床疗效。方法:回顾性分析自2003年2月至2020年10月被确诊为TN且保守治疗效果不佳而接受手术治疗的患者8例。TN部位：前臂远端正中神经3例、腕部桡神经浅支1例、前臂远端尺神经2例、尺神经腕背支1例、指总神经1例。尺神经腕背支为医源性损伤，其余为局部挤压伤或者切割伤。手术过程：彻底松解神经后，取同种异体神经一条，两末端修剪成45°角斜面。在神经瘤及其两侧分别做神经束间分离，形成与神经主干呈45°角的隧道，将异体神经依次穿过各隧道，隧道口间断缝合固定，两神经末端分别与受体神经端侧缝合，缝合前切除受体神经对应面的神经外膜。统计手术前后患者视觉模拟评分(visual analogue scale，VAS)、两点分辨觉(two-point discrimination，2-PD)、握力及关节总活动度(range of motion，ROM)差异，并按Burchiel评级标准统计术后优良率。结果:术后8例患者均获得随访，时间为8~37个月，平均21.8个月，按Burchiel评级标准：优良7例，差1例。VAS评分和2-PD分别由术前的(4.8±0.7)分、(8.9±1.8) mm降至术后的(1.8±1.4)分、(5.6±0.9) mm；握力由术前的(17.3±3.4) kg增加至(25.0±4.3) kg，术前术后差异均有统计学意义( P<0.01)。术前术后ROM差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:使用螺旋式端侧编织缝合技术结合异体神经移植治疗TN，既可以保留已恢复的神经功能，又能通过多平面神经端侧接触促进受损神经功能恢复，近期疗效良好，尤其适用于已有部分神经功能恢复的患者。

目的:探讨前入路原位胰十二指肠切除术(PD)治疗胰头癌的临床疗效。方法:采用回顾性队列研究方法。收集2012年1月至2018年6月昆明医科大学第一附属医院收治的285例胰头癌患者的临床病理资料；男164例，女121例；平均年龄为57岁，年龄范围为40～76岁。285例患者中，196例行前入路原位PD，设为前入路组；89例行传统入路PD，设为传统入路组。观察指标：(1)手术情况。(2)术后情况。(3)随访情况。采用门诊、电话或网络方式进行随访，术后每2～3个月门诊随访1次，了解患者肿瘤复发、转移及生存情况。随访终点为患者死亡，随访次要终点为肿瘤复发或转移。随访时间截至2018年12月。正态分布的计量资料以 ± s表示，组间比较采用 t检验。偏态分布的计量资料以 M(范围)表示，组间比较采用Mann－Whitney U检验。计数资料以绝对数或百分比表示，组间比较采用 χ2检验。采用Kaplan－Meier法绘制生存曲线，采用Log－rank检验进行生存分析。 结果:(1)手术情况：285例患者均顺利完成手术。前入路组患者保留幽门，联合门静脉－肠系膜上静脉切除重建(对端吻合、人工血管置换、侧壁切除吻合)，手术时间，术中出血量分别为118例，37例(17、11、9例)，(303±107)min，350 mL(100～750 mL)；传统入路组患者上述指标分别为48例，9例(7、1、1例)，(335±103)min，400 mL(100～900 mL)，两组患者上述指标比较，差异均无统计学意义( χ2＝0.990，3.474， t＝0.722， Z＝1.729， P>0.05)。(2)术后情况：前入路组患者R 0切除率、淋巴结清扫数目、阳性淋巴结清扫数目、神经侵犯率、脉管侵犯率、严重并发症、围术期死亡、术后化疗分别为93.88%(184/196)、12枚(5～19枚)、4枚(0～15枚)、45.41%(89/196)、31.12%(61/196)、28例、3例、69例；传统入路组患者上述指标分别为85.39%(76/89)、7枚(4～17枚)、5枚(0～13枚)、32.58%(29/89)、23.60%(21/89)、11例、2例、41例，两组患者R 0切除率、淋巴结清扫数目、神经侵犯率比较，差异均有统计学意义( χ2＝5.506， Z＝4.637, χ2＝4.149， P<0.05)；两组患者阳性淋巴结清扫数目、脉管侵犯率、严重并发症、围术期死亡、术后化疗比较，差异均无统计学意义( Z＝0.052, χ2＝1.962，0.192，0.001，3.048， P>0.05)。(3)随访情况：285例患者中，252例完成次要终点随访，228例完成终点随访，随访时间为35个月(6～58个月)。196例前入路组患者中，181例完成次要终点随访，176例完成终点随访，随访时间为38个月(6～58个月)；89例传统入路组患者中，71例完成次要终点随访，52例完成终点随访，随访时间为33个月(7～53个月)。前入路组患者术后中位无瘤生存时间、中位总体生存时间分别为31个月、37个月，传统入路组患者上述指标分别为24个月、31个月，两组患者术后无瘤生存比较，差异有统计学意义( χ2＝7.646， P<0.05)，术后总体生存比较，差异无统计学意义( χ2＝3.265， P>0.05)。 结论:前入路原位PD治疗胰头癌安全、可行，能提高手术R 0切除率，延长患者无瘤生存时间。

胃肠息肉指的是胃肠表面有突起状组织出现,主要是由于长期饮食不当、慢性肠胃炎、胃肠黏膜增生等因素引起的,是消化内科比较常见的疾病.根据其病理类型与致病因素不同,患者的临床表现也有明显差异,部分患者会有便血、腹痛、便秘等症状,但胃肠息肉体积较小时患者并无明显症状.胃肠息肉随着病程的延长会有癌变的风险,多数患者是由胃肠道检查确诊的,以往临床治疗主要是依靠普通消化内镜下引导采用高频电刀切除术进行息肉切除,高频电刀主要是通过电极尖端产生高频高压电流,接触时加热组织,实现分离与凝固机体组织的目的.普通消化内镜对胃肠息肉切除有一定的帮助,但其置入过程会给患者带来明显疼痛,容易引起患者的应激反应,对患者的耐受程度要求较高,且普通内镜下切除术后患者容易发生多种不良并发症,恢复速度也较慢,对患者术后的生活质量影响较大.不过随着医疗器械技术的不断升级创新,无痛性消化内镜在临床治疗中被广泛应用,它是在普通内镜的基础上加用短效镇静剂镇静,其相较于普通消化内镜而言能够很好的减轻患者治疗中的疼痛感,从而提高患者的依从性,确保手术的进行.《消化内镜学(原著第3版)》是由(美)迈克尔·B.华莱士,(荷)保罗·福根斯主编,王进海、李路主译于世界图书西安有限公司出版,此书是学习了解消化内镜的精选之书,对分析无痛性消化内镜对胃肠息肉切除术的价值有积极的指导作用.

本视频重点介绍戊型肝炎的流行病学、肝外表现及其治疗及预防。过去认为戊型肝炎仅在部分发展中国家流行，但近20年，戊型肝炎在发达国家流行的证据越来越多。欧洲国家戊型肝炎发病呈上升态势：欧洲报告的戊型肝炎病例由2005年的514例增加到2015年的5 617例，总数增加了10倍。2012年至2021年以来我国戊型肝炎病例数已连续9年超过甲型肝炎病例数，居急性病毒性肝炎首位，且漏报率可能较高，需引起重视。戊型肝炎病毒（hepatitis E virus，HEV）有多个基因型，为重要人畜共患病毒，HEV基因型在人和动物中分布：HEV1和HEV2只感染人，HEV3和HEV4为人畜共患病原体；猪是主要动物宿主，近年来从野猪分离到的HEV株被归为HEV5和HEV6；骆驼HEV则被归分为HEV7和HEV8。HEV广泛存在于常见食物中，HEV是全球流行的食源性病原，家猪，野猪，绵羊，山羊，鹿和兔子等家畜和野生动物都是传染来源。即食产品、加工肉制品、牛/羊奶类和贝类等食物的HEV RNA阳性率很高。我国职业相关人群的HEV感染风险较高，我国的荟萃分析显示，职业人群（养猪者、屠宰场、养猪散户和兽医）的HEV IgG血清阳性风险比一般人群高2.63倍，主要型别为HEV4型。与一般人群相比，兔子屠宰场工人患HEV的风险增加了6.9倍，且血清阳性率随着工作年限的增加而增加。对我国24个城市的HEV血清阳性率的职业调查研究发现，农民（含养殖者）、中年和老年群体和男性HEV感染风险更高。急性戊型肝炎患者肝外表现常见，最常见为胆囊炎、低钾血症与贫血等。急性戊型肝炎合并肝外表现住院时间更长，但临床预后与无肝外表现患者无显著性差异。迄今为止，尚未批准任何特定药物用于治疗戊型肝炎，临床治疗受限。关于急性戊型肝炎的治疗：急性戊型肝炎一般为自限性，大多可完全恢复，急性期应隔离，宜清淡易于消化，适当补充维生素，辅以药物对症及恢复肝功能治疗，一般不采用抗病毒治疗。有研究显示，在如急性肝功能衰蝎严重病例中，使用利巴韦林治疗可获益。有病例报道显示，暴发性戊型肝炎患者应用皮质类固醇可减缓进展为肝功能衰竭的速度。慢性戊型肝炎的治疗：减少免疫抑制剂的用量是第一线治疗方案。停用或减少免疫抑制剂，使1/3慢性戊型肝炎患者体内HEV自动清除；但大多数患者难以停用免疫抑制剂，导致该方法受限；聚乙二醇化干扰素和利巴韦林均可选用，但因耐受性问题，更推荐使用利巴韦林；利巴韦林推荐疗程为3个月（平均剂量为8.1 mg/kg），主要不良反应为贫血。接种疫苗是预防戊型肝炎最为经济有效的手段，2012年10月，我国在全球率先批准上市戊肝疫苗为预防戊型肝炎提供了有效的方法。戊肝疫苗国际化成果：自2012年上市以来，在世界卫生组织、无国界医生组织、盖茨基金会等国际组织的积极协助下，国际化进程加快。2017年5月，由挪威政府公益基金资助的首个海外临床试验（预防孕妇戊肝）在孟加拉国正式启动，目前已完成约7万人次的4次随访工作；首个获美国FDA批准进行临床试验的疫苗已于2019年4月启动，并获美国国立卫生研究院全额资助；2018年世界卫生组织公布首个《关于重组戊肝疫苗质量、安全性及有效性的审评技术建议》，2019年已纳入《世界卫生组织技术报告丛书》。一项临床研究，为4名受试者按照标准接种3剂戊肝疫苗，并进行血清学检测分析，结果表明戊肝疫苗可诱导显著的免疫反应。有研究表明，戊肝疫苗诱导的抗体可提供跨基因型保护。2020年发表在《自然通讯》上发表的一项新的研究，证实在完成3针接种后，疫苗诱导的抗体可识别1型、2型、3型、4型HEV衣壳蛋白，对全球范围流行的HEV主要基因型均具有良好的预防效果。国内外权威机构推荐戊肝疫苗用于戊型肝炎的预防，对于特殊人群，戊肝疫苗对孕妇和胎儿具有一定的安全性，关于戊肝疫苗Ⅲ期临床试验的回顾分析显示，37例女性在接种戊肝疫苗期间意外怀孕，未发现在怀孕过程中有异常现象发生，其所产婴儿也均健康；65岁以上老年人群按计划接种3针后1个月，血清阳转率为96.7%（176/182）；对畜牧养殖者、疫区旅行者、餐饮业人员、集体生活者等高危人群，以及感染HEV后可能病情较重的慢性肝病患者、育龄期女性以及老年人等可按0-1-6个月程序接种3针30 μg/0.5 ml重组戊型肝炎疫苗。另外，要注意切断传播途径，搞好环境卫生，加强水源和粪便管理，改善供水条件加强宿主动物及相关肉类产品管理养成良好的个人卫生习惯；并做好传染源管理，加强戊型肝炎患者的隔离和接触者的医学观察做好疫情报告。

目的 分析江西省某幼儿园呼吸道感染聚集性疫情的流行病学特点、病例临床特征及病原学特点,探寻疫情发生原因,为此类疫情的防控提供经验.方法 通过询问幼儿园园长和各班级老师,以及调阅医疗机构的病例信息等方式搜索病例.应用流行病学调查表收集病例的基本信息、临床症状、发病经过,以及流行病学史等内容.使用荧光定量PCR仪对采集的病例标本进行病毒核酸检测,并对阳性标本进行病毒分离,使用基因分析仪对扩增产物进行测序,同时采用高通量测序技术获得病毒全基因组序列.结果 本次疫情发病32例,均为学生,发病率为15.69％(32/204);90.6％(29/32)的病例集中在4月27日至5月4日发病,主要表现为高热、干咳,并伴有肺部炎性改变;病例中年龄最大的6岁,最小的2岁,发病年龄集中在3～5岁,占病例总数的90.6％(29/32).大(1)班发病率较高,为17.7％(6/34),学前班发病率较低,为9.4％ (3/32),差异无统计学意义(x2=2.79,P=0.74);男性发病率为17.82％(18/101),女性为13.59％(14/103),差异无统计学意义(x=0.69,P=0.45);一楼学生发病率为13.08％(14/107),二楼为18.56％(18/9),差异无统计学意义(x2=1.15,P=0.34).通过病毒核酸检测和全基因组序列测定在病例标本中检出H7型腺病毒.结论 本次疫情是由人H7型腺病毒引起的聚集性疫情,主要通过密切接触和呼吸道飞沫传播.幼儿园通风条件差、晨午检等制度不健全,是造成疾病蔓延的主要原因.

背景:细胞外基质对干细胞的影响是目前组织工程学的研究热点,而关于自身细胞外基质的合成、分泌及对细胞的影响却少有研究报道.目的:体外培养兔骨髓间充质干细胞,观察抗坏血酸对其细胞外基质与整体结构改变的影响.方法:通过差速贴壁法分离获取兔骨髓间充质干细胞,流式细胞技术检测CD44、CD45、CD31的表达.将兔骨髓间充质干细胞用含抗坏血酸(20 mg/L)的培养基进行干预,观察细胞形态、大体结构、超微结构及组织学改变,RT-PCR检测细胞外基质相关基因的表达.结果与结论:①经流式细胞学分析,第2代骨髓间充质干细胞中95%以上的细胞表达CD44,而CD45与CD31的表达极低;②抗坏血酸干预后,骨髓间充质干细胞增殖良好,细胞间界限难以分辨,干预10-14 d后,形成了"膜片状"结构;③苏木精-伊红染色后可见细胞分层排列,Masson 染色后可见大量细胞外基质成分,透射电镜下可见胞内含大量内质网与"囊泡样"结构;④与未经抗坏血酸干预的对照组相比较,经抗坏血酸干预的实验组纤维连接蛋白的mRNA表达显著升高(P < 0.05),而Ⅰ型胶原的mRNA表达虽稍提高,但两组间差异无显著性意义;⑤结果表明,抗坏血酸促进了兔骨髓间充质干细胞的增殖转化、细胞外基质的合成分泌、膜片状结构的形成,在组织工程应用中具有巨大潜能.

目的 分析1例人感染高致病性H7N9禽流感病例的感染模式及病原变异情况,为禽流感防控提供依据.方法 采用流行病学方法调查病例可疑暴露史及感染途径,追踪调查病例病情进展;使用核酸检测、病毒分离、基因测序及进化分析等技术对采集的相关标本展开病原学分析.结果 病例无活禽接触史,发病前一周在狭小通风不畅厨房内不带手套加工烹饪光鸡;病例下呼吸道提取物、病家剩余冷冻光鸡表面涂抹标本、活禽来源市场环境标本均检出高度同源的H7N9禽流感病毒,且均在HA基因的裂解位点出现多个碱性氨基酸(PEVPKRKRTAR/GL)插入的突变.结论 无防护禽肉操作是“禽-人”传播模式下的重要感染方式之一,现行的活禽限售区防控措施效果有限,应尽快推进规模化标准养殖,实现活禽全城限售、集中屠宰、冰鲜上市.

背景:神经元的培养和细胞转染技术是在体外研究神经元生长发育及生理病理机制的重要手段,但目前原代培养的皮质神经元往往纯度不高、转染效率不高.目的:建立一种简单、高效、稳定的原代神经元培养及转染方法.方法:无菌条件下分离新生1 d SD大鼠大脑皮质,经0.25％的胰蛋白酶消化后离心,制备成单细胞悬液,以5×109 L-1细胞浓度接种至含神经元专用培养基的24孔细胞培养板进行原代培养,并于倒置显微镜下观察神经元形态的变化,使用神经元特异性标志物Tuj1和MAP2对培养的细胞进行鉴定;利用人工脂质体转染神经元,观察神经元转染效率.结果与结论:①体外培养的原代神经元具有较高的纯度,在培养第7天神经元特征明显,突起相互接触形成神经元网络,并表达神经元特异性标志物Tuj1与MAP2;利用人工脂质体转染神经元,转染效率较高;②采用该方法进行原代神经元培养,能够获得稳定的、高纯度的原代神经元;人工脂质体亦可高效率转染原代神经元.