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小鼠前庭支持细胞诱导人羊水干细胞定向分化为功能性神经元的初步研究
编辑人员丨5天前
目的:探讨通过支持接触共培养模式，小鼠前庭支持细胞体外诱导人羊水干细胞向功能性神经元分化的可行性。方法:分离培养人来源的羊水干细胞。从新生C57BL/6J小鼠获取内耳前庭组织，经酶解消化、细胞培养，选取其空心球体，制备单细胞饲养层。将标记慢病毒载体介导产生绿色荧光蛋白nGFP的羊水干细胞种植在饲养层表面，形成支持接触共培养，期间不添加任何外源性神经生长因子及神经元信号诱导因子。检测分化后的羊水干细胞中神经元标记物β微管蛋白（β-Tubulin，Tuj1）、突触后致密蛋白PSD95的表达；标记功能性突触小泡技术（FM1-43穿透）检测分化后细胞是否具有神经元离子通道。同时观察羊水干细胞单独分化、小鼠前庭支持细胞单独分化、Transwell共培养体系中羊水干细胞和饲养层细胞神经元的分化情况。结果:单细胞饲养层表达内耳支持细胞特异性标记物细胞周期蛋白激酶抑制因子P27 kip1。nGFP标记过的羊水干细胞接种于饲养层后，nGFP表达阳性的部位有（52.0±3.0）%的细胞表达Tuj1，并具有典型的神经元形态特征，突起长度平均（110.7±6.2） μm。饲养层细胞单独分化，仅有（1.1±0.6）%的细胞表达Tuj1阳性且形态典型的神经元；羊水干细胞单独分化，（92.0±1.0）%的细胞表达神经元标记物Tuj1，但无典型的神经元形态特征，突起长度平均（16.0±4.1） μm。将羊水干细胞与饲养层在Transwell中共培养，虽然（92.0±1.0）%的羊水干细胞表达Tuj1，但仍无典型的神经元形态特征，突起长度平均（17.0±4.5）μm，饲养层仅有（1.2±0.9）%的细胞Tuj1表达阳性且具有典型的神经元形态。 结论:通过支持接触共培养模式，由小鼠前庭来源的内耳支持细胞制备的饲养层，可成功将人羊水干细胞定向诱导分化为功能性神经元。
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编辑人员丨5天前
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选择性化学性家兔前庭破坏术
编辑人员丨2023/8/5
将不同剂量硫酸链霉素注入家免前庭池后发现内耳毒性变化与药物剂量有重要关系。选择性损害外周前庭感觉上皮而无或轻度损害耳蜗的药物剂量为125μg;当剂量超过250μg时高频听力明显下降；500μg以上剂量多导致重度或全聋，并可出现前庭功能失代偿。病理检查显示耳蜗病变以底回最明显。前庭组织病变表现为囊斑和壶腹嵴感觉纤毛退变明显，暗细胞表面较多异形耳石。支持细胞和神经突触病变不明显。目前，治疗某些难治性外周性眩晕的方法较多，选择性化学性前庭破坏术不一定是解决此类疾病的最后手段，但它无疑为这方面的研究和临床应用提供了一种治疗方法。
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编辑人员丨2023/8/5
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一种单纯毛细胞缺失豚鼠耳聋模型的建立
编辑人员丨2023/8/5
目的 建立一种较为简单的仅造成毛细胞丧失同时具有内淋巴灌注通路的豚鼠耳聋模型.方法 利用耳蜗侧壁打孔经中阶进行内淋巴灌注注射用水或腺病毒液来造成正常豚鼠耳蜗毛细胞损害,引起耳聋.通过基底膜铺片phalloidin染色和Dapi核染色来观察基底膜受损的情况.利用脑干诱发电位进行致聋效果的判定.结果 内淋巴灌注可以造成早期单纯的毛细胞丧失,而基底膜结构和支持细胞没有发现形态上的改变.并且毛细胞在基底膜上缺失的分布与灌注的方向相关,在灌注方向上损失严重,而逆向的毛细胞几乎没有损伤,同时损害呈现远离灌注部位,程度减轻的趋势.脑干诱发电位click测试阈值变化也与灌注方向一致.结论 这种耳聋模型的方法造成了单纯的毛细胞特别是外毛细胞损害,有利于药物的同期灌注,并且较以往的耳聋模型对耳蜗的损害轻.但是造成毛细胞损害的机理尚不明确,可能和膜迷路的压力增加有关.
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编辑人员丨2023/8/5
