-
间充质干细胞来源凋亡囊泡缓解牙龈卟啉单胞菌脂多糖诱导下巨噬细胞促炎状态的研究
编辑人员丨1周前
目的:探索骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSC)来源凋亡囊泡对小鼠巨噬细胞系RAW264.7极化状态的影响及对牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis,Pg)诱导的促炎状态巨噬细胞的调控,为牙周炎治疗提供依据。 方法:使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察星形孢菌素(staurosporine,STS)诱导的BMMSC的凋亡过程;使用场发射扫描电镜、动态光散射技术、流动电势法测量凋亡囊泡相关表征;使用Operetta CLS高内涵分析系统动态观察小鼠巨噬细胞系RAW264.7对5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚胺酯(5-carboxy-tetramethylrhodamine,succinimidyl ester,5-TAMRA-SE)标记的凋亡囊泡的吞噬作用;采用实时荧光定量PCR检测精氨酸合酶-1(arginase-1,Arg-1)mRNA相对表达量;采用细胞免疫荧光、蛋白质印迹法检测凋亡囊泡对Pg来源的脂多糖(lipopolysaccharide from Pg,Pg-LPS)诱导的RAW264.7中诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响;采用酶联免疫吸附测定法检测Pg-LPS诱导的促炎状态RAW264.7培养上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factro-α,TNF-α)的分泌情况。结果:0.5 μmol/L STS处理12 h后小鼠BMMSC形态皱缩,周围有明显的凋亡囊泡产生;凋亡囊泡的粒径为100~1 000 nm,平均Zeta电势为-16.6 mV;RAW264.7可以通过伪足吞噬小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡;小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡联合白介素-4(interleukin4,IL-4)刺激的RAW 264.7 Arg-1 mRNA表达量(261.97±15.91)较单独IL-4刺激的 mRNA表达量(115.29±15.42)显著升高( P<0.01);凋亡囊泡与Pg-LPS共同作用下,RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量[(39.33±4.70)个]显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS阳性细胞数量[(95.33±4.70)个]( P=0.007),RAW264.7 iNOS蛋白相对表达量(5.84±1.05)显著低于Pg-LPS单独诱导的RAW 264.7 iNOS蛋白相对表达量(14.91±3.87)( P<0.01),RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量[(21 899.71±409.73) ng/L]显著低于Pg-LPS单独诱导下RAW264.7细胞培养上清液中TNF-α含量[(71 296.50±2 344.22) ng/L]( P =0.003)。 结论:小鼠BMMSC来源的凋亡囊泡可以调控巨噬细胞极化状态,并可减轻Pg-LPS诱导下巨噬细胞的促炎状态。
...不再出现此类内容
编辑人员丨1周前
-
中国多中心侵袭性感染毛孢子菌的抗真菌药物敏感性
编辑人员丨1个月前
目的 本研究旨在调查中国多中心侵袭性感染毛孢子菌的抗真菌药物敏感性分布特征.方法 选取2009年8月-2016年7月CHIF-NET监测网43个监测中心收集的133株侵袭性感染毛孢子菌.利用基因测序分析实现菌种的准确鉴定和基因分型,按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法检测菌株的体外抗真菌药物敏感性.结果 中国多中心侵袭性毛孢子菌感染中,共分离到10个菌种,阿萨希毛孢子菌是主要的致病菌(108/133株),血液是最常见的标本类型(36.8%).利用IGS1序列,将108株阿萨希毛孢子菌分为5个型别,基因型1型(41.7%)、4型(31.5%)和3型(23.1%)是我国主要的基因型.体外药物敏感性结果显示,阿萨希毛孢子菌对两性霉素B的MIC值的总体分布高于非阿萨希毛孢子菌,GM值分别是1.36 μg/mL和0.7 μg/mL.47.2%的阿萨希毛孢子菌(51/108株)对两性霉素B的MIC值≥ 2 μg/mL,而全部非阿萨希毛孢子菌(25株)对两性霉素B的MIC值小于1 μg/mL.25%的阿萨希毛孢子菌(27/108株)、2株T.dohaense、1株星形毛孢子菌、1株黏质毛孢子菌和1株T.faecale对氟康唑呈现较高的MIC值(≥8 μg/mL).伏立康唑对毛孢子菌呈现出最有效的体外抗真菌活性,GM值为0.09 μg/mL.我国阿萨希毛孢子菌对氟康唑、伏立康唑、伊曲康唑和泊沙康唑的ECV值分别采用16 μg/mL、0.25 μg/mL、1 μg/mL和1 μg/mL,而对两性霉素B和5-氟胞嘧啶的ECV值均采用4 μg/mL.结论 本研究系统调查了抗真菌药物敏感性分布情况,并试验性建立了我国阿萨希毛孢子菌的流行病学折点.
...不再出现此类内容
编辑人员丨1个月前
-
Mdivi-1通过抑制少突胶质细胞凋亡信号通路发挥髓鞘保护作用
编辑人员丨2024/4/27
目的:研究线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠髓鞘保护中的作用,探讨Mdivi-1抑制髓鞘变性的机制.方法:小鼠经髓磷脂少突胶质细胞糖蛋白第35~55位肽段(MOG35-55)免疫后,随机分为DMSO模型组和Mdivi-1干预组.于免疫后第28天处死小鼠,行Luxol fast blue染色分析髓鞘丢失情况,免疫荧光染色和TUNEL染色小鼠脊髓组织和体外细胞实验分析Mdivi-1髓鞘保护机制.结果:与DMSO模型组比较,Mdivi-1处理明显减少EAE小鼠脊髓组织白质区髓鞘丢失,减少少突胶质细胞凋亡及线粒体凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、caspase-9、cytochrome C和Bax的表达;体外MO3.13少突胶质细胞培养实验发现,Mdivi-1可以明显阻止星形孢菌素(staurosporine)处理诱导的线粒体膜电位去极化,减轻细胞损伤,增强细胞活力.结论:Mdivi-1可能通过抑制少突胶质细胞线粒体相关凋亡信号通路发挥髓鞘保护作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2024/4/27
-
根尖牙乳头干细胞来源凋亡囊泡对巨噬细胞糖酵解相关酶的表达及炎症表型影响的初探研究
编辑人员丨2024/3/16
目的:探究根尖牙乳头干细胞(SCAP)来源的凋亡囊泡(apoVs)是否通过影响糖酵解相关酶调控巨噬细胞(BMDMs)炎症表型,进而对炎症反应产生调节作用.方法:体外培养鉴定人源SCAP,经星形孢菌素诱导凋亡后提取apoVs,利用扫描电镜、流式细胞术等对其进行表征鉴定.分别空白处理、脂多糖(LPS)处理、LPS同apoVs共处理大鼠骨髓来源的BMDMs,利用流式细胞术检测促炎表型BMDMs表面标志分子CD80、CD86 的表达,利用Western blot检测BMDMs糖酵解相关酶的表达.结果:根尖牙乳头干细胞来源的apoVs能被BMDMs摄取,促炎表型标志分子CD80、CD86 的表达下调,糖酵解相关酶葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、GLUT3 的表达显著下调(P<0.05).结论:SCAP来源apoVs能降低促炎型BMDMs的分布,并对其糖酵解相关酶的表达产生影响.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2024/3/16
-
星形孢菌素产生菌电转化条件的优化及其高产菌株的构建
编辑人员丨2023/11/18
目的 提高星形孢菌素的产量.方法 本研究以星形孢菌素产生菌(Streptomyces sp.ST-07)为出发菌株,采用电转化方法和应用PCR扩增星形孢菌素生物合成的调控基因staR,成功构建含不同启动子(kasO*p和ermE*p)的加强表达staR基因的重组工程菌,分别命名为ST-D-5和ST-H-23.结果 通过对电转化条件的甘氨酸浓度、电场强度、菌丝体浓度、质粒浓度、孵育时间和孵育温度等关键参数优化,使电转化的效率从4×106提高至9.6×108(CFU/μgDNA);工程菌摇瓶发酵结果表明,与星孢菌素原始菌株ST-07相比,采用kasO*p启动子构建的工程菌ST-D-5星形孢菌素的产量提高了17%,最高单位可达923 mg/L.结论 本文系统摸索了星形孢菌素产生菌的电转化条件,显著提高了电转化效率,不但为该菌株的高产遗传改造奠定了基础,而且对其他放线菌的遗传操作体系建立提供了有益借鉴.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/11/18
-
星形孢菌素通过PI3K/Akt信号途径影响人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂星形孢菌素(STS)对人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的影响,并初步探讨其信号机制.方法 培养人宫颈癌细胞Hela细胞株,建立STS组与空白对照组.采用MTT法观察各组细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,以Real-time PCR与Western Blot检测细胞PKCα、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)在mRNA水平与蛋白水平表达量以及对PI3K磷酸化的作用.结果 MTT实验中,0.5μmol/L STS组24 h后吸光度A值显著低于空白对照组,而增殖抑制率显著高于空白对照组(P<0.05);Transwell实验STS组穿越细胞数少于空白对照组[(77.3±9.4)个vs.(127.3±6.8)个],差异有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR结果显示STS组PKCα、PI3K、Akt mRNA表达量分别为空白对照组的43.4%、65.8%、55.6%,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blot检测STS组PKCα、PI3K、Akt、P-PI3K蛋白表达量为空白对照组的34.7%、38.8%、80.6%,75.3%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 STS可以有效抑制人宫颈癌细胞Hela的增殖与侵袭能力,其机制可能与降低PKCα的表达后抑制了下游PI3K/Akt信号的激活有关.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
国内首例阴囊伪膜样星形毛孢子菌感染
编辑人员丨2023/8/6
目的 报道1例由星形毛孢子菌感染引起的伪膜样阴囊感染.方法 患者,男,25岁,阴囊白色膜样附着物6周.通过对患者皮损进行真菌镜检、真菌培养,并对获得菌株进行科玛嘉显色培养基鉴定、尿素酶试验、放线菌酮耐受试验和分子生物学分析等实验研究.结果 皮损真菌镜检可见大量透明分隔菌丝,真菌培养和分子生物学鉴定为星形毛孢子菌.小培养镜下不但见典型关节菌丝还见典型的多分生细胞.该临床菌株在科玛嘉显色培养基上呈淡蓝色菌落,尿素酶试验阳性,对放线菌酮不敏感.患者口服特比萘芬和外用特比萘芬乳膏,连续2周.停药时皮损消退,真菌学检查阴性.结论 由星形毛孢子菌感染引起的伪膜样阴囊感染临床罕见报道,通过对该病例的深入研究,为临床诊疗提供参考依据.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
海洋链霉菌IMB3-202产生的吲哚咔唑生物碱
编辑人员丨2023/8/6
目的 分离鉴定海洋链霉菌 IMB3-202 产生的抗菌和抗肿瘤活性产物.方法 利用 AntiSMASH 对菌株基因组进行生物信息学分析;运用多种色谱手段分离纯化 IMB3-202 的活性产物;通过波谱学方法鉴定化合物的化学结构;采用微量肉汤稀释法和 MTT 法分别测定化合物的抗菌和细胞毒活性.结果 菌株 IMB3-202 基因组含有一条吲哚咔唑类生物合成基因簇.通过发酵条件优化,从中分离鉴定了 4 个吲哚咔唑类化合物,结构分别确定为星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素、holyrine A 和 K252c.星形孢菌素、3'-O-去甲基星形孢菌素和 holyrine A 对 HeLa 细胞、HCT116 和MCF-7 等肿瘤细胞具有很强的抑制活性,IC50值为 0.75 ~1192.8 nmol/L.星形孢菌素对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌显示出较弱的抗菌活性,最低抑菌浓度值为 128 μg/ml.结论 通过基因组序列分析,可以在基因水平上预测产物结构,快速识别特定类型产物.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
中国北京地区犬真菌监测与药敏分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 鉴定犬真菌微生物群(真菌区系),并进行药敏分析,为犬致病性真菌防控提供科学依据.方法 在中国的北京地区,共有55只没有疾病史的犬被取样.用真菌培养、PCR,基因克隆和测序技术,进行犬的真菌检测和鉴定.对所有真菌分离株进行药敏分析.结果 分离获得29株真菌,形态和分子鉴定确证这些真菌为黄曲霉、杂色曲霉、日本曲霉、卷枝毛霉、总状毛霉、多变根毛霉、壳青霉、产黄青霉、厚皮马拉塞霉菌、球毛壳霉、黄色蠕形霉、多喙茎点霉、尖孢镰刀菌、枝状枝孢菌、尖孢枝孢、极细枝孢霉、类星形毛孢子菌、阿萨希毛孢子菌、光滑念珠菌、库德里阿兹威毕赤酵母和东方伊萨酵母.结果表明,犬真菌种类比较丰富,获得真菌12属21种,曲霉属、毛霉属和枝孢菌属真菌在这些致病真菌中占主导地位.药敏分析结果显示:这些真菌对制霉菌素、咪康唑、沃尔康唑、特比萘芬和氟胞嘧啶等已经产生了耐药性.结论 联合使用真菌培养、PCR,基因克隆和测序技术能有效分析犬真菌.犬的真菌大多为人兽共患病病原体.研究结果为我国犬真菌监测提供参考数据,为致病性真菌的侵袭防制提供有效工具.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
-
鹦鹉热衣原体巨噬细胞感染增强因子对宿主细胞产生前炎症细胞因子和凋亡的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci,Cps)巨噬细胞感染增强因子(microphage infectivity potentiator,Mip)在诱导人单核细胞THP-1产生前炎症细胞因子和对HeLa细胞凋亡的作用.方法 用不同浓度的Cps Mip重组蛋白作用THP-1细胞,ELISA检测前炎症细胞因子IL-8和TNF-α的表达量;用荧光染色法和流式细胞术分析重组Cps Mip对HeLa细胞凋亡的作用.结果 重组Cps Mip能以时间、剂量依赖方式诱导THP-1细胞分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α;不同Cps Mip蛋白浓度实验组刺激THP-1细胞产生的前炎症细胞因子IL-8和TNF-α水平显著高于PBS对照组(P<0.05),当Cps Mip为16μg/ml时,所产生的前炎症细胞因子IL-8和TNF-α的量最高,分别为105.01 pg/ml和50.52 pg/ml.荧光染色法和流式细胞术检测细胞凋亡率,发现Cps Mip对星形孢菌素(staurosporine,STS)处理的HeLa细胞有一定的抑凋亡作用,在20μg/ml Cps Mip刺激后的细胞凋亡率比未刺激组下降了4.48%(P<0.01).结论 Cps Mip蛋白能诱导THP-1细胞表达并分泌前炎症细胞因子IL-8和TNF-α; Cps Mip具有一定抑制HeLa细胞凋亡的作用.
...不再出现此类内容
编辑人员丨2023/8/6
