背景与目的:阐明介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)与肿瘤细胞之间通讯的信号分子仍然是一个巨大的挑战,这些信号分子对癌症转移至关重要.本研究旨在探讨普列克底物蛋白2(pleckstrin-2,PLEK2)/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制.方法:选择人肺腺癌细胞系H1299和人胚胎肺细胞MRC-5作为研究对象.用表达PLEK2的慢病毒(PLEK2)和载体对照(Vector)转染H1299细胞,并在转染24 h后分离外泌体(Vector_exo、PLEK2_exo).采用miR-196a模拟物或抑制剂转染MRC-5细胞.通过蛋白质印迹法(Western blot)分析PLEK2和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白水平,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析miR-196a表达,采用transwell实验测定细胞转移和侵袭能力.将6只雌性BALB/c-nu小鼠随机分为Vector组和PLEK2组,每组3只.通过尾静脉向各组小鼠注射转染Vector或PLEK2的H1299细胞.4周后,取出肺组织进行H-E染色和免疫组织化学染色分析α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达.所有动物实验均经长沙市第一医院(中南大学湘雅医学院附属长沙医院)伦理委员会批准(伦理编号为EI-2021-103).结果:与Vector组相比,PLEK2组小鼠肺结节数和转移灶中α-SMA表达显著增加(P＜0.001).与Vector组相比,PLEK2组H1229细胞中miR-196a表达水平显著增加(P＜0.05),并且PLEK2_exo中miR-196a表达水平显著高于Vector_exo(P＜0.05).与Vector_exo组相比,PLEK2_exo组MRC-5细胞中miR-196a、α-SMA和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)表达水平显著增加(P＜0.05).与阴性对照(negative control,NC)相比,miR-196a转染的MRC-5细胞中α-SMA和FAP表达水平显著增加(P＜0.05).相反,通过miR-196a抑制剂(si-miR-196a#1、si-miR-196a#)转染,α-SMA和FAP表达水平被显著抑制(P＜0.05).与NC-CM组相比,miR-196a-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和波形蛋白(vimentin)表达均显著增加(P＜0.001),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著降低(P＜0.001).此外,与Vector_exo-CM组相比,PLEK2_exo-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和vimentin表达均显著增加(P＜0.01),E-cadherin表达显著降低(P＜0.001).结论:PLEK2上调能够增强肺癌细胞来源的外泌体miR-196a水平,从而促进CAFs激活.激活的CAFs能够进一步增强肺癌细胞的侵袭能力.

毛母质癌(PC)是一种罕见的恶性皮肤附属器肿瘤,好发于头颈部,发病人群通常为30岁以下或60～70岁中老年人群,呈双峰分布.其临床表现与某些皮肤肿瘤较为相似,容易发生误诊或漏诊.PC诊断主要依据组织病理学检查,其免疫组化染色,例如β-连环蛋白(β-catenin)、淋巴增强因子-1(LEF-1)、尾源性转录因子2(CDX2)、普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员1蛋白(PhLDA1)、CD10、CD56等有助于鉴别诊断.PC局部侵袭性强,最常见区域淋巴结转移;扩大切除原发病灶仍是PC首选的治疗方法.本文重点围绕PC的临床特点、组织形态学特征、影像学表现、鉴别诊断、治疗及预后等最新研究进展进行综述.

目的 探讨环状RNA含普列克底物蛋白同源域的家族M3 成员(PLEKHM3)(circRNA_PLEKHM3)通过调控微小RNA-320(miR-320)/畸变样因子 4(KLF4)轴在宫颈癌细胞上皮间质转化(EMT)行为中的作用与机制.方法 采用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测宫颈癌细胞Hela和CaSki中circRNA_PLEKHM3 的表达水平;RNA 荧光原位杂交检测circRNA_PLEKHM3 在人宫颈癌上皮细胞 CaSki中的定位;双荧光素酶报告基因实验检测 circRNA_PLEKHM3 和 miR-320 的靶向关系,以及miR-320 和KLF4 的靶向关系;对CaS-ki细胞过表达circRNA_PLEKHM3;另外设置三组,分别为在过表达 circRNA_PLEKHM3 的基础上过表达 miR-320、沉默KLF4,以及在过表达 miR-320 的基础上沉默 KLF4.qRT-PCR检测 CaSki 中 miR-320 的表达水平;Western blot 检测CaSki细胞中KLF4 和EMT标志物上皮钙黏蛋白(E-cadher-in)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2 和MMP-9 的表达;Transwell实验检测细胞迁移数和侵袭细胞数.结果 circRNA_PLEKHM3 在Hela和CaSki中的表达均降低(P<0.05),其主要定位在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验显示miR-320 和circRNA_PLEKHM3 存在靶向关系,KLF4 和 miR-320 存在靶向关系;过表达circRNA_PLEKHM3 抑制miR-320 和N-cadherin、Vim-entin、MMP-2、MMP-9 的蛋白表达,上调E-cadherin的蛋白表达,减少细胞迁移和侵袭数(P<0.05);在过表达circRNA_PLEKHM3 的基础上过表达miR-320 或沉默KLF4 均能够促进miR-320 和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 蛋白的表达,上调E-cadherin蛋白的表达,减少迁移和侵袭细胞数(P<0.05);然而在过表达miR-320 的基础上沉默KLF4,KLF4和N-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9 蛋白的表达受到抑制,E-cadherin蛋白的表达上调,细胞迁移和侵袭数减少(P<0.05).结论 circRNA_PLEKHM3 过表达可能通过 miR-320/KLF4 轴调控宫颈癌细胞的EMT.

目的 应用公共数据库挖掘结直肠癌"炎癌转化"过程的关键基因,结合机器学习和神经网络模型的算法优势进行基因筛选,验证关键基因作为预测指标的可行性及免疫相关性,进而预测潜在防治中药.方法 利用基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)2个GSE66407和GSE166925数据集,筛选由正常结肠到炎症结肠(溃疡性结肠炎),最后进展到肠癌的过程中出现的差异基因;通过构建蛋白质-蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction,PPI)进一步筛选核心基因;运用梯度提升机、随机森林和决策树3种分类机器学习算法进行结局的预测学习,将3种机器学习算法筛选出的核心基因取交集,构建深度学习框架下的人工神经网络模型,对模型预测准确性进行内部及外部验证;实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)联合人蛋白质图谱数据库(Human Protein Atlas,HPA)的免疫组化数据分析关键基因在初发结直肠癌患者癌组织及正常组织中的表达;运用单样本基因集富集分析(single sample gene set enrichment analysis,ssGSEA)算法分析核心基因与免疫细胞之间的关联;通过生存分析筛选对结直肠癌具有预后意义的基因;最后通过核心基因进行相关中药的预测分析.结果 在结直肠炎癌转化全过程中,共鉴定出152个共同的差异基因.这些基因参与肿瘤免疫反应、炎症反应等生物过程;经由3种机器学习算法的筛选,最终确定了 8个核心基因,包括组织金属蛋白酶抑制剂 1(tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP1)、基质金属蛋白酶 1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)、趋化因子 CXC 配体 13(C-X-Cmotifchemokineligand 13,CXCL13)、普列克底物蛋白(Pleckstrin,PLEK)、颗粒酶 B(granzyme B,GZMB)、CXCL5、CXCL3和CXCL8.在深度学习框架下的神经网络模型中,训练集中对正常组和肿瘤组的预测准确率分别为86.3％、92.3％;外部验证集中对正常组和肿瘤组的预测准确率分别为80.0％、80.6％.8个核心基因同时涉及多种免疫浸润过程;RT-PCR结合HPA数据库分析显示TIMP1、MMP1、GZMB、CXCL5、CXCL8、CXCL3在结直肠癌患者癌组织中表达显著升高(P＜0.05),CXCL13在癌组织中表达显著降低(P＜0.05),PLEK在癌组织中表达降低但差异不显著;TIMP1、CXCL13和CXCL8对患者的整体生存具有显著影响.对实验验证有显著差异的7个核心基因进行防治中药预测分析,结果显示预测中药以清热药和补虚药为主,四气以寒、温和平性为主,五味以苦、辛、甘味比例最大.结论 TIMP1、MMP1、CXCL13、GZMB、CXCL5、CXCL3和CXCL8可以作为预测结直肠癌"炎-癌"转化过程的关键分子,对这些分子进行中药的早期干预,可能对结直肠癌的早期诊疗具有重要意义.

目的:明确普列克底物蛋白同源样结构域家族A成员1蛋白(PHLDA1)在各胃癌细胞系中的表达,探讨其对胃癌细胞生物学特性的影响.方法:先采用蛋白质印迹和qRT-PCR法检测MGC-803、BGC-823、MKN45、SGC-7901和HGC-27共5种胃癌细胞系中PHLDA1蛋白和mRNA的表达;再将MGC-803细胞分为对照组(转染乱序RNA)和干扰组(转染靶向干扰PHLDA1的siRNA),蛋白质印迹法检测2组细胞中PHLDA1蛋白的表达;CCK8实验检测细胞增殖率;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;蛋白质印迹检测各组细胞中 Bax、Caspase-8、Cleaved-caspase-8、Caspase-3、Cleaved-caspase-3、Caspase-9和 Cleaved-caspase-9凋亡相关蛋白的表达.结果:PHL-DA1在5种胃癌细胞中呈不同程度高表达,在MGC-803细胞中表达量最高;与对照组比较,干扰组PHLDA1表达量显著降低(P<0.01),细胞增殖率明显减慢,克隆形成数显著减少、单个克隆的细胞数明显减少(P均 <0.05), Cleaved-caspase-8、Cleaved-caspase-3、Caspase-9和Cleaved-caspase-9蛋白表达明显升高(P均<0.05).结论:PHL-DA1在胃癌细胞系中呈高表达,沉默其表达可抑制胃癌细胞增殖.

目的 探讨结直肠癌(CRC)组织中环状RNA(circ)MYH9、人普列克底物蛋白同源域家族A成员2(PHL-DA2)基因表达与患者临床病理特征和预后的关系.方法 选取CRC患者98例,术中采集CRC组织及癌旁组织,荧光定量PCR法检测circMYH9、PHLDA2 mRNA表达,Pearson相关法分析CRC组织中circMYH9与PHLDA2 mRNA表达的相关性,分析circMYH9、PHLDA2 mRNA表达与CRC患者临床病理特征的关系;随访3年,分析circMYH9、PHL-DA2 mRNA表达与CRC患者预后的关系.结果 CRC组织中circMYH9、PHLDA2 mRNA相对表达量均高于癌旁组织(P均<0.05).CRC组织中circMYH9与PHLDA2 mRNA表达呈正相关(r=0.756,P<0.05).CRC组织中circ-MYH9、PHLDA2 mRNA表达与肿瘤TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤最大径、肿瘤位置无关(P均>0.05).98例CRC患者随访过程中死亡31例.circMYH9高表达组、低表达组生存时间、3年累积生存率比较差异均有统计学意义(P均<0.05);PHLDA2 mRNA高表达组、低表达组生存时间、3年累积生存率比较差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 CRC组织中circMYH9、PHLDA2高表达,二者表达变化与TNM分期、分化程度、淋巴结转移及预后有关.