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淋巴上皮瘤样癌临床病理学特征
编辑人员丨5天前
目的:探讨淋巴上皮瘤样癌(LELC)的临床病理学特点、诊断、鉴别诊断及预后。方法:分析2008年1月至2018年12月台州恩泽医疗中心(集团)浙江省台州医院收集的21例LELC的临床资料、病理特点、免疫组织化学染色及原位杂交结果,并复习相关文献。结果:21例LELC中,发生于涎腺8例、胃5例、肺6例、乳腺1例、宫颈1例。HE染色显微镜下形态相似,在丰富的淋巴细胞背景中见散在分布低分化或未分化的癌细胞,呈巢片状排列,免疫组织化学显示癌细胞表达广谱细胞角蛋白(CKpan)、p63、p40,间质反应性淋巴细胞表达CD8、CD20。原位杂交EB病毒编码的小RNA(EBER,16/21)阳性。结论:LELC是少见的上皮性恶性肿瘤,大部分与EB病毒感染相关,具有独特的临床病理学特征,预后相对较好。
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编辑人员丨5天前
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野黄芩素通过miRNA-496和基质细胞衍生因子1对子宫颈癌细胞增殖及迁移的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨野黄芩素通过miRNA-496(miR-496)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)对子宫颈癌细胞株HCC94细胞增殖及迁移能力的影响。方法:取对数生长期的HCC94细胞,分别加入20 μmol/L野黄芩素溶液(野黄芩素组)和二甲基亚砜(DMSO)(对照组)。分别采用CCK-8法和Transwell实验检测两组HCC94细胞增殖和迁移能力,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-496和SDF-1 mRNA的相对表达量。采用生物信息学软件TarBase预测miR-496的靶基因,并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。采用蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,培养第3、4、5天,野黄芩素组HCC94细胞增殖能力均降低(均 P<0.05)。野黄芩素组和对照组HCC94细胞的穿胶细胞数分别为(25±5)个和(134±19)个,野黄芩素组细胞迁移能力较对照组降低( t=5.61, P<0.01)。对照组和野黄芩素组miR-496相对表达量分别为1.07±0.12和11.24±2.75,差异有统计学意义( t=3.68, P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果证实SDF-1是miR-496的下游靶基因。野黄芩素组和对照组HCC94细胞中SDF-1 mRNA相对表达量分别为0.29±0.05和1.01±0.07,差异有统计学意义( t=7.22, P<0.01)。与对照组比较,野黄芩素促进miR-496表达后,SDF-1蛋白、细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶3(CDK3)、细胞迁移蛋白Slug和Zeb-2表达均降低。 结论:野黄芩素可通过miR-496-SDF-1轴抑制子宫颈癌HCC94细胞的增殖及迁移。
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编辑人员丨5天前
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长链非编码RNA TUG1对宫颈癌细胞放射敏感性的影响
编辑人员丨5天前
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)牛磺酸上调基因1(TUG1)通过调控自噬对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及作用机制。方法:构建放射抵抗的宫颈癌细胞株HeLa/IR和SiHa/IR。用细胞克隆形成实验评估HeLa/IR和SiHa/IR细胞的放射敏感性;实时反转录PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中lncRNA TUG1的表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞中自噬蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、p62的表达。将NC-siRNA、TUG1-siRNA、TUG1-siRNA+雷帕霉素(自噬激活剂)转染至HeLa/IR和SiHa/IR细胞,分别命名为NC-siRNA组、TUG1-siRNA组、TUG1-siRNA+雷帕霉素组。用RT-qPCR检测lncRNA TUG1的转染效率;Western blot检测沉默lncRNA TUG1对自噬蛋白表达的影响;流式细胞术分别检测沉默lncRNA TUG1对HeLa/IR和SiHa/IR细胞增殖能力和凋亡的影响。采用 t检验分析两组之间的差异,单因素方差分析进行多组间的比较。 结果:与HeLa、SiHa细胞比较,HeLa/IR、SiHa/IR细胞的存活分数显著升高,细胞中lncRNA TUG1的表达均显著升高,自噬蛋白Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达均明显升高,p62蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。与NC-siRNA组比较,TUG1-siRNA组HeLa/IR、SiHa/IR细胞中lncRNA TUG1的表达、细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达明显降低,p62蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。与TUG1-siRNA组比较,TUG1-siRNA+雷帕霉素组HeLa/IR细胞中Beclin1和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达均明显升高,p62蛋白表达明显降低,细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:沉默lncRNA TUG1可通过调节自噬增强宫颈癌细胞的放射敏感性。
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编辑人员丨5天前
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周期型马来丝虫复合表位基因的构建及在真核细胞中的表达
编辑人员丨5天前
目的:构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶复合表位基因(CPI502/GAPDH720)真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720,并观察其在人宫颈癌细胞(Hela细胞)中的蛋白表达。方法:根据T细胞表位预测的基因序列设计引物,以质粒pGEM-T-CPI621为模版,利用反转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,将该片段克隆至原核表达质粒pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET28a(+)-BmCPI502。根据软件设计合适引物,RT-PCR分别扩增BmCPI502基因和BmGAPDH720基因,pcDNA3.1(+)、BmCPI502、BmGAPDH720分别进行双酶切后进行连接,构建复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720。将复合表位基因重组质粒转染至Hela细胞后,进行RT-PCR验证,获得与预期相符目的条带;将表达产物利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测。结果:获得了原核表达重组质粒pET28a(+)-BmCPI502,经酶切鉴定得到502 bp特异性片段,与预期值符合;成功构建了复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720,酶切鉴定所产生的片段大小与预期符合;复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720转染Hela细胞后得到稳定表达,SDS-PAGE鉴定分析显示重组蛋白相对分子质量( Mr × 10 3)约为50。 结论:成功构建了周期型马来丝虫复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1(+)-BmCPI502/BmGAPDH720,并在真核细胞中获得相应的重组蛋白,为进一步研究重组蛋白纯化和测定其生物学活性奠定了基础。
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编辑人员丨5天前
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lncRNA OTUD6B-AS1通过靶向miR-183-5p/LATS2调控宫颈癌细胞的侵袭及凋亡
编辑人员丨5天前
目的:探讨过表达及抑制lncRNA OTUD6B-AS1对人宫颈癌细胞侵袭及凋亡的影响及其作用通路。方法:构建过表达及抑制lncRNA OTUD6B-AS1的宫颈癌C33A细胞,并将各组细胞分别进行transwell小室实验检测细胞侵袭能力,进行流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。生物信息学预测lncRNA OTUD6B-AS1与miR-183-5p及miR-183-5p与LAST2的靶向关系并通过双荧光素酶报告基因实验证实其靶向关系。结果:相比OE-空载体组,OE-lncRNA OTUD6B-AS1组穿过小室膜至下室的细胞数明显增多并且凋亡率下降( P<0.001);相比si-空载体组,si-lncRNA OTUD6B-AS1组细胞穿过小室膜至下室的细胞数明显减少并且细胞凋亡率升高( P<0.001)。lncRNA OTUD6B-AS1可靶向调控miR-183-5p的表达( P<0.001),miR-183-5p可靶向调控LAST2的表达( P=0.007)。 结论:过表达lncRNA OTUD6B-AS1可通过靶向miR-183-5p/LATS2促进宫颈癌细胞的侵袭并抑制宫颈癌细胞凋亡,提示lncRNA OTUD6B-AS1可能是宫颈癌治疗的一种新的生物标志物。
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编辑人员丨5天前
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DDX3表达上调在人宫颈癌细胞增殖中的作用分析
编辑人员丨5天前
目的:探讨DDX3表达上调在人宫颈癌细胞增殖中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测2012年4月至2013年3月河南省人民医院59例宫颈癌组织及癌旁非肿瘤组织标本中的DDX3表达情况。同时,以宫颈癌细胞HeLa为研究对象,通过慢病毒介导的宫颈癌细胞过度表达来检测DDX3的功能。采用细胞增殖与活性检测试剂盒评估细胞存活率,Boyden室进行迁移和侵袭测定,即时荧光定量聚合酶链反应检测DDX3 mRNA表达水平,Western blot检测细胞中上皮间质转化(EMT)和PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达。结果:DDX3过表达与国际妇产科联盟(FIGO)分期、宫颈浸润深度和淋巴结转移呈正相关( P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示,DDX3高表达的宫颈癌患者具有较差的总体生存率( P<0.05)。与慢病毒载体对照(pLVX-Con)组相比,在shRNA-DDX3慢病毒(pLVX-DDX3)转染组中检测到DDX3的蛋白表达和mRNA表达均明显增加(均 P<0.01)。在pLVX-DDX3转染第72小时的HeLa细胞存活数目显著高于pLVX-Con转染细胞( P<0.05)。与pLVX-Con转染的细胞相比,DDX3过表达显著促进了HeLa细胞的迁移和侵袭( P<0.05),并且显著上调了HeLa细胞的N-Cadherin、波形蛋白和Snail的表达( P<0.05)。在pLVX-DDX3组中,Akt及其下游靶基因p-GSK3β的磷酸化水平和β-catenin表达较pLVX-Con组显著升高( P<0.05),而当向pLVX-DDX3组加入PI3K抑制剂LY294002后,p-Akt、p-GSK3β和β-catenin明显降低( P<0.05),并且N-Cadherin、波形蛋白和Snail的水平表达下调( P<0.05)。 结论:DDX3过表达促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并能诱导EMT,其作用机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。
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编辑人员丨5天前
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上调miR-125b靶向Foxp3调控免疫因子表达增强宫颈癌细胞的放射敏感性
编辑人员丨5天前
目的:探讨miR-125b对宫颈癌细胞放射敏感性的影响及其可能的下游机制研究。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测宫颈癌组织和细胞中miR-125b和Foxp3的表达量。HeLa细胞进行梯度剂量X射线(0、2、4、6 Gy)照射后,RT-qPCR检测HeLa细胞中miR-125b和Foxp3的表达量。下调miR-125b表达,经6 Gy X射线照射,MTT试验检测HeLa细胞增殖能力,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达量。通过Targetscan和双荧光素报告基因实验检测miR-125b与Foxp3的靶向关系。下调Foxp3表达,经6 Gy X射线照射,MTT试验检测HeLa细胞增殖能力,Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达量。检测miR-125b通过Foxp3对HeLa细胞放射敏感性的影响。下调Foxp3后通过ELISA检测细胞上清液中IL-10和TGF-β的含量。结果:宫颈癌组织和细胞中miR-125b的表达量显著降低,Foxp3表达量显著升高,miR-125b的表达量随着X射线放射剂量增加而升高,Foxp3表达量随着X射线放射剂量增加而降低。6 Gy X射线照射HeLa细胞后,下调miR-125b提高细胞增殖能力,使Bax表达量明显降低,Bcl-2表达量明显升高。miR-125b靶向Foxp3且负调控Foxp3表达。6 Gy X射线照射细胞后,下调Foxp3可显著降低HeLa细胞增殖能力,使Bax表达量明显升高,Bcl-2表达量明显降低。过表达miR-125b能够通过Foxp3增强HeLa细胞的放射敏感性。6 Gy X射线照射细胞后,下调Foxp3降低了细胞中IL-10和TGF-β的表达。结论:上调miR-125b通过靶向和负调控Foxp3,从而增强宫颈癌细胞的放射敏感性,且作用机制可能与下调Foxp3使细胞中IL-10和TGF-β的表达减少有关。
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编辑人员丨5天前
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miR-3607-3p介导PFN2表达抑制宫颈癌细胞的恶性生物学行为
编辑人员丨5天前
目的:探讨miR-3607-3p对宫颈癌细胞的恶性表型的作用及相关作用机制。方法:OncoLnc生物信息学网站分析miR-3607-3p的表达与宫颈癌患者预后的关系。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常宫颈上皮细胞(H8)和宫颈癌细胞系(Hela、HCC94、SiHa、C33A)中miR-3607-3p的表达情况。SiHa细胞体外转染阴性对照核苷酸序列为阴性对照(NC)组,转染miR-3607-3p模拟序列为miR-3607-3p组。qRT-PCR检测转染后的SiHa细胞中miR-3607-3p表达变化。采用CCK-8法和划痕实验检测转染前后SiHa细胞的恶性生物学行为变化。qRT-PCR和Western blot检测转染前后肌动蛋白结合蛋白2(PFN2)基因表达变化,双荧光素酶报告基因实验检测miR-3607-3p与PFN2的靶向关系。结果:miR-3607-3p表达水平高的宫颈癌患者生存期显著长于miR-3607-3p低表达患者( P<0.01)。与H8细胞相比,miR-3607-3p在人宫颈癌细胞系中异常低表达( P<0.05),其中SiHa细胞系中表达最低( P<0.01)。NC组和miR-3607-3p组miR-3607-3p表达分别为(1.04±0.31)和(9.28±1.76),转染miR-3607-3p模拟序列后SiHa细胞miR-3607-3p表达水平明显高于NC组( P<0.01),增殖活性和划痕愈合率明显低于NC组(均 P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-3607-3p直接靶向结合PFN2( P<0.01)。qRT-PCR和Western blot结果显示,miR-3607-3p组的PFN2 mRNA和蛋白表达均低于NC组,增殖蛋白CDK3、CDK2表达低于NC组,上皮表型相关蛋白Claudin-1、ZO-1表达高于NC组(均 P<0.01)。 结论:miR-3607-3p与宫颈癌患者的生存期相关,上调miR-3607-3p表达可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和迁移,其机制可能与靶向抑制PFN2有关。
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编辑人员丨5天前
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宫颈腺癌中ProEXC和PRMT5的表达及其临床意义
编辑人员丨5天前
观察ProEXC蛋白和PRMT5蛋白在宫颈腺癌及癌旁组织中的表达,探讨ProEXC和PRMT5的表达与宫颈腺癌辅助诊断及临床病理参数间的关系。收集苏州大学附属第二医院2015—2020年确诊的宫颈腺癌标本88例,采用免疫组化的方法分别检测宫颈腺癌及癌旁组织中ProEXC和PRMT5的表达并进行分析。利用肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)分析ProEXC和PRMT5与宫颈腺癌患者的预后相关性及其相关的基因通路。选取基因表达数据库(GEO)中GSE39293数据集,对宫颈腺癌细胞株(HELA)经抗病毒药物处理前后ProEXC和PRMT5的表达量进行了对比分析。在宫颈腺癌组织中,ProEXC蛋白表达率(95.5%比4.6%, P<0.001)和PRMT5蛋白表达率(81.8%比26.1%, P<0.001)均高于癌旁组织,且其表达均与肿瘤的T分期、有无淋巴结转移及有无人乳头瘤病毒(HPV)感染相关( P<0.05)。TCGA数据库分析显示,PRMT5和ProEXC中MCM2高表达患者的总体生存率较低表达患者低(均 P<0.05)。在GSE39293数据集中,经西多福韦处理后细胞中MCM2的表达减少(9.34比9.68, P<0.001),PRMT5表达量下降,但差异无统计学意义(8.16比8.26, P=0.087),TOP2A表达无明显改变(8.54比8.42, P=0.056)。耐药组中PRMT5(8.42比8.16, P=0.002)和MCM2(9.51比9.34, P=0.029)表达增加,而TOP2A表达下降(8.06比8.54, P<0.001)。GSEA分析提示ProEXC高表达主要影响细胞周期通路,而PRMT5高表达主要影响RNA剪接体通路。本研究发现,ProEXC蛋白和PRMT5蛋白在宫颈腺癌组织中呈高表达且高表达组预后更差,与宫颈腺癌临床病理特征有一定相关性,可能与其影响细胞周期和RNA合成通路有关,提示其可能在宫颈腺癌的进展中发挥重要作用。
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编辑人员丨5天前
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p-AKT-mTOR-P70S6K信号通路在多倍体子宫颈癌细胞放射治疗中的作用
编辑人员丨5天前
目的:探讨p-AKT-mTOR-P70S6K信号通路在多倍体子宫颈癌细胞放射治疗中的作用。方法:取人子宫颈癌HeLa细胞株,使用7 Gy的6 MV X线照射HeLa细胞,诱导第5天后用倒置显微镜观察细胞的形态变化。将细胞分为7 Gy组(经7 Gy X线照射且未经转染的多倍体Hela细胞)和对照组(未经放射诱导且未经转染的Hela细胞)。另外分别将载有pcDNA3阴性对照序列的质粒和载有pcDNA3-TT-AKT序列的质粒转染至HeLa细胞中,转染48 h后经7 Gy X线照射诱导,记为pcDNA3+7 Gy组、pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,线粒体膜电位法检测细胞凋亡能力,蛋白印迹法检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞自噬相关蛋白的相对表达情况。结果:7 Gy组HeLa细胞在放射诱导第5天大部分正常细胞已死亡,少部分存活的细胞体积增大,细胞核呈多个核状态。蛋白印迹法检测结果显示,7 Gy组HeLa细胞p-AKT、p-mTOR、p-P70S6K的相对表达水平均低于对照组(均 P<0.05)。CCK-8法检测结果显示,pcDNA3+7 Gy组和pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组在培养48、72 h后,吸光度( A)值分别为0.45±0.06、0.65±0.06和0.75±0.05、1.05±0.02,差异均有统计学意义(均 P<0.05),pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组均高于pcDNA3+7 Gy组。流式细胞术检测结果显示,pcDNA3+7 Gy组、pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组G 0/G 1期、G 2/M期细胞比例分别为(29.2±3.6)%、(26.7±1.7)%和(29.6±1.6)%、(30.3±0.6)%,差异均无统计学意义(均 P>0.05);S期细胞比例分别为(10.2±0.9)%、(14.6±1.5)%,差异有统计学意义( t=2.86, P=0.043)。线粒体膜电位法检测显示,pcDNA3+7 Gy组、pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组的绿色荧光比例分别为(23.1±2.5)%、(14.3±1.9)%,差异有统计学意义( t=4.82, P=0.009)。蛋白质印迹法检测结果显示,pcDNA3-TT-AKT+7 Gy组p-cdc25c(Ser216)的相对表达水平高于pcDNA3+7 Gy组( P<0.001);Bak、LC3Ⅱ/Ⅰ的相对表达水平均低于pcDNA3+7 Gy组(均 P<0.05)。 结论:p-AKT-mTOR-P70S6K信号通路可能参与调控放射诱导的多倍体HeLa细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡。
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编辑人员丨5天前
