目的 分析氨甲环酸对脑出血大鼠NADH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)通路及小胶质细胞活化的影响.方法 采用随机数字表法将大鼠分为假手术组(15只)、模型组(13只)、氨甲环酸低剂量组(25 mg/mL,13只)、氨甲环酸中剂量组(50 mg/mL,14只)、氨甲环酸高剂量组(100 mg/mL,13只).无菌胶原酶Ⅳ灌注法制备大鼠脑出血模型,造模成功后给药(6、24、48 h)后利用Garcia评分对大鼠神经功能进行评分;给药48 h后测定大鼠脑组织含水量及血肿体积.采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的表达水平;免疫组织化学法检测大鼠小胶质细胞数目;蛋白印迹(WB)法检测大鼠脑组织蛋白NOX2、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶(caspase-1)、IL-1β表达;活性氧检测试剂盒检测大鼠脑组织ROS含量.结果 造模成功后,与假手术组(17.51±0.01)分比较,模型组(8.24±0.48)分、氨甲环酸(低、中、高剂量)组(8.27±0.46、8.15±0.54、8.19±0.52)分大鼠神经功能评分显著降低,差异有统计学意义(F=1 290.268,P＜0.05).给药后,同一时间(6、24、48 h),与假手术组比较,模型组、氨甲环酸(低、中、高剂量)组大鼠神经功能评分显著降低,差异均有统计学意义(F=869.679、927.512、l 105.559,P均＜0.05);与模型组比较,氨甲环酸(低、中、高剂量)组大鼠神经功能评分显著升高,且呈剂量依赖性(P＜0.05);与假手术组比较,模型组脑组织含水量、血肿体积、小胶质细胞数目、血清蛋白TNF-α、IL-1β表达水平、脑组织ROS含量、蛋白NOX2、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著增加(P＜0.05);与模型组比较,氨甲环酸(低、中、高剂量)组大鼠脑组织含水量、血肿体积、小胶质细胞数目、血清蛋白TNF-α、IL-1β表达水平、脑组织ROS含量、蛋白NOX2、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著降低,且呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 氨甲环酸可能通过影响NOX2/ROS/NLRP3通路及小胶质细胞的活化在脑出血的治疗中发挥作用.

目的:探讨丙泊酚处理对缺氧复氧的肠上皮细胞活性氧(ROS)/硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)通路及凋亡的影响.方法:对人肠上皮HIEC细胞进行培养,并进行缺氧复氧处理;通过不同浓度(25,50,100μmol·L-1)丙泊酚对缺氧复氧HIEC细胞进行处理,细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞活力;流式细胞术检测HIEC细胞凋亡;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测HIEC细胞ROS水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl2)、Bcl-2相关基因(Bax)、及TXNIP、NLRP3、白介素-1β(IL-1β)表达情况.结果:与对照组比较,缺氧复氧组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著降低,HIEC细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TXNIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著升高(P<0.05);与缺氧复氧组比较,不同浓度丙泊酚处理组HIEC细胞活力、蛋白Bcl2表达水平显著升高,细胞凋亡率、细胞内ROS含量、蛋白Bax、Caspase-3、TX-NIP、NLRP3、IL-1β表达水平显著降低(P<0.05).结论:丙泊酚处理能够抑制缺氧复氧HIEC细胞ROS/TXNIP/NLRP3通路及细胞的凋亡,可能对肠上皮细胞缺血再灌注损伤(I/R)有一定的保护作用.

目的:探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)在肝纤维化患者血清中的表达及生物学意义.方法:选取2017年9月至2020年9月我院收治的80例肝纤维化患者为研究对象,同期选取80例我院收治的酒精性肝炎患者为对照组.采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测受试者血清中NOX2、NLRP3的表达,并比较肝纤维化患者与对照组患者血清中NOX2、NLRP3的表达差异.体外培养肝星状细胞(HSC)系LX-2,用6 ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激24 h,活化并分为Control组、NC组、NOX2 siRNA组;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中NOX2、NLRP3的mRNA表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞ROS水平;蛋白免疫印迹(WB)检测增殖蛋白CyclinD1、CDK4,凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9及NOX2、NLRP3、IL-18、IL-1β的表达.结果:与对照组患者比较,肝纤维化组患者血清NOX2、NLRP3的表达显著升高(P<0.05);与Control组比较,NOX2 siRNA组细胞NOX2、NLRP3的mRNA表达、细胞内ROS含量,增殖蛋白CyclinD1、CDK4及蛋白NOX2、NLRP3、IL-18、IL-1β的表达均显著降低,细胞增殖抑制率、凋亡率、凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达显著升高(P<0.05).结论:NOX2、NLRP3可能参与肝纤维化的发生,其可能是治疗肝纤维化的靶点.

目的:探讨金银花提取液通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/含CARD结构域的凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)信号通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道黏膜的影响.方法:随机选取10只大鼠为对照组,另取55只大鼠在肛门约8 cm结肠处注射含5％TNBS和50％乙醇的混合液(4 ml/kg)构建大鼠UC模型,将造模成功的50只大鼠分为UC组、金银花低、中、高剂量组和金银花+NSS(NLRP3激活剂)组,每组10只.金银花低、中、高剂量组分别灌胃给予40、80、120 mg/(kg·d)金银花提取液,金银花+NSS组灌胃给予120 mg/(kg·d)金银花提取液和4 mg/(kg·d)NSS,对照组、UC组灌胃给予等体积生理盐水.观察大鼠一般情况,末次给药24 h后腹主动脉取血,处死大鼠,收集结肠组织,量取结肠长度.试剂盒检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、TNF-α、IL-6水平;HE染色检测大鼠结肠黏膜病理学变化;RT-PCR和Western blot检测大鼠肠道黏膜NLRP3/ASC/cas-pase-1通路mRNA和蛋白表达.结果:与对照组比较,UC组大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜损伤程度、血清LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及结肠黏膜组织NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、血清SOD水平显著降低(P<0.05);与UC组比较,金银花低、中、高剂量组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达显著降低,结肠长度、血清SOD水平显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);与金银花高剂量组比较,金银花+NSS组DAI、结肠黏膜损伤程度、LDH、MDA、TNF-α、IL-6水平及NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1βmRNA和蛋白表达显著升高,结肠长度、SOD水平显著降低(P<0.05).结论:金银花提取液可能通过抑制NLRP3/ASC/caspase-1信号通路激活缓解UC大鼠肠道黏膜损伤.

目的 探讨木犀草素对脂多糖(LPS)诱导的肠上皮细胞焦亡及核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族吡啉结构域蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路的影响.方法 体外培养人肠上皮细胞HIEC-6,对其进行(1.0μg/mL)LPS诱导,并将细胞分为对照组、LPS组、LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组、木犀草素+NLRP3激活剂尼日利亚菌素钠盐(NSS)组,除对照组外均添加1.0μg/mL的LPS.MTT法检测各组细胞活力;电阻仪检测单层上皮跨膜电阻(TEER);酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测各组细胞焦亡相关蛋白(GSDMD、GSDMD-N)及NLRP3、caspase-1、IL-1β的表达.结果 与对照组比较,LPS组HIEC-6细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、蛋白GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.05);与LPS组比较,LPS+(25、50、100μmol/L)木犀草素组HIEC-6细胞活力、TEER值显著升高,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β 表达显著降低(P<0.05);与LPS+100μmol/L木犀草素组比较,木犀草素+NSS组HIEC细胞活力、TEER值显著降低,细胞上清液LDH水平、TNF-α、IL-6、GSDMD、GSDMD-N、NLRP3、caspase-1、IL-1β表达显著升高(P<0.05).结论 木犀草素能够减轻LPS诱导的人肠上皮细胞HIEC-6焦亡和细胞炎性损伤,可能与NLRP3/caspase-1信号通路的抑制有关.

目的:探讨厚朴酚(Mag)对动脉粥样硬化(AS)大鼠主动脉炎性损伤及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚结构域样受体家族含吡啉结构域蛋白3(NLRP3)信号通路的影响.方法:从50只SD大鼠中随机选择10只作为对照组(NC组),其余构建AS模型后随机分为模型组(AS组)、Mag组(25mg/kg)、阳性组(100mg/kg地奥心血康)、Mag+通路激活剂组(Mag+1μg LPS组),每组10只.ELISA试剂盒检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,计算动脉硬化指数(AI);油红染色观察主动脉病理切片;流式细胞术检测外周血Th17/Treg细胞表达;RT-qPCR检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA表达情况;Western bloting检测MAPK/NF-κB/NLRP3通路蛋白表达.结果:AS组主动脉较NC组出现斑块沉积、大量炎症细胞浸润等现象,TC、TG、LDL-C、Ox-LDL、AI指数、IL-6、IL-1β、TNF-α、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA水平,以及NLRP3、p-MAPK/MAPK、p-NF-KB/NF-KB蛋白水平显著增高(P＜0.05),HDL-C、Treg细胞水平显著下降(P＜0.05);与AS组比较,Mag组、阳性组主动脉损伤现象有所改善,TC、TG、LDL-C、Ox-LDL、AI指数、IL-6、IL-1β、TNF-α、Th17细胞水平、Th17/Treg比例、MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA水平,以及NLRP3、p-MAPK/MAPK、p-NF-KB/NF-KB蛋白水平显著下降(P＜0.05),HDL-C、Treg细胞水平显著升高(P＜0.05).而通路激活剂LPS可明显减弱Mag对AS大鼠主动脉炎性损伤的改善效果.结论:Mag可能通过抑制MAPK/NF-κB/NLRP3通路,缓解AS大鼠主动脉炎性损伤.