目的 分析两例常染色体显性骨硬化症(autosomal dominant osteopetrosis,ADO)患者的临床特点,对先证者及其家系的致病基因突变进行研究.方法 收集两例骨硬化症患者的的临床特征及实验室检查资料进行总结分析,并复习相关文献对该病的诊治思路进行归纳总结.结果 基因检测显示先证者 1 的氯离子通道蛋白 7(chlo-ride channel protein 7,CLCN7)基因第 24 外显子新的错义突变,即p.Gly765Cys,先证者 2 的CLCN7 的第 10 外显子发现了一个已知的错义突变,即p.Arg286Trp,两位先证者均有骨量异常增高表现,椎体呈"夹心饼"样改变,且两者均表现为血钙、磷和碱性磷酸酶水平正常,而乳酸脱氢酶和肌酸激酶水平升高.结论 ADO患者主要表现为骨密度异常增高、骨脆性增加及容易骨折等,目前该疾病多采取对症治疗,严重时可导致贫血、血小板减少伴出血、频发感染、肝脾肿大等,通过文献复习进一步总结ADO的临床表现和诊疗特点.

目的 探究胞内氯离子通道蛋白1(CLIC1)的缺失突变体CLIC1(△49-51)在哺乳动物细胞中的表达、定位改变,及与Sedlin蛋白在体内、体外相互作用的影响.方法 构建CLIC1的缺失突变体的真核表达质粒pcDNA3.1-CLIC1(△49-51)-FLAG;免疫荧光观察CLIC1(△49-51)与Sedlin在COS7细胞中的共定位;在HEK 293T细胞中进行免疫共沉淀和GST pulldown实验,研究CLIC1(△49-51)与Sedlin的相互作用.结果 CLIC1(△49-51)在COS7细胞中主要定位于细胞质,小部分定位于细胞核.相对于野生型CLIC1的细胞核定位,缺失突变体的细胞内定位发生明显改变并且与Sedlin蛋白没有共定位.Western blot结果显示CLIC1(△49-51)能在HEK 293T细胞中有效表达;免疫共沉淀实验结果表明其与Sedlin在体内没有相互作用;GST pulldown结果表明其与Sedlin在体外没有相互作用.结论 CLIC1蛋白的第49～51位氨基酸序列KRR对CLIC1蛋白在细胞内的正确定位发挥重要作用;其缺失突变后影响了CLIC1在细胞内的定位、表达及CLIC1与Sedlin的相互作用.

目的 探讨氯离子第7通道蛋白(CLCN7)突变所致常染色体显性遗传骨硬化症2型(ADO2)患者破骨细胞发育相关的调控因子及其功能.方法 选择2017年10月至2019年10月在中信惠州医院确诊为ADO2且CLCN7基因突变的患者10例作为实验组,同时将正常健康受检者10例作为对照组.将诱导多能干细胞(iPSCs)培养为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、苏木精(Hatmatoxylin)-伊红(Eosin)HE染色、荧光染色等并利用实时荧光PCR(qPCR)技术检测各种来源的破骨细胞CLCN7调控因子(ITGB5、CES1、PERF1、SERPINE2、WARS、GBP4、UCHL1)mRNA表达情况,采用Western blot法检测蛋白表达.采用基因表达谱芯片技术分析ADO2特异破骨细胞的基因表达谱,验证CLCN7突变对破骨细胞发育成熟相关通路的影响.结果 通过qPCR技术检测mRNA可知,与对照组比较,实验组患者ITGB5的比例高46％,CES1的比例高143％,PERF1的比例低48％,SERPINE2的比例低53％,WARS的比例低39％,GBP4比例低28％和UCHL1的比例高58％,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组的供体破骨细胞比较,实验组患者细胞中ITGB5的表达增加278％,SERPINE2表达下降51％,WARS表达下降68％和PERF1表达下降49％,差异均有统计学意义(P<0.05);分析基因转染模型发现,实验组的ITGB5表达水平为(1.25±0.31)EU/μg,明显高于对照组的(0.93±0.23)EU/μg,PERF1表达为(1.07±0.26)EU/μg,明显低于对照组的(1.51±0.39)EU/μg,差异均有统计学意义(P<0.05);两组WARS和SERPINE2表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 CLCN7突变所致的ADO2患者基因转染模型中ITGB5表达上调和PERF1表达下降,可能与破骨细胞功能障碍有关.

目的 探讨前列腺癌组织钙离子激活氯离子通道蛋白7(ANO7)的表达及其与术后生化复发的关系.方法 回顾性选取空军军医大学第一附属医院于2014年3月至2018年4月收治的168例行根治性切除术治疗的前列腺癌患者作为研究对象.采用免疫组化法检测患者的前列腺癌组织与癌旁组织ANO7的表达情况,并根据根治术后3年内生化复发情况将患者分为生化复发组(n=30)与未生化复发组(n=138),分析前列腺癌组织ANO7的阳性表达与患者术后生化复发的关系.结果 前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);生化复发组前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于未生化复发组(P<0.05);临床分期、术前血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、标本Gleason评分、手术切缘是否阳性,有无包膜侵犯、精囊侵犯、神经周围侵犯、血管侵犯,以及前列腺癌组织ANO7表达均是前列腺癌患者术后生化复发的影响因素(P<0.05).结论 前列腺癌组织ANO7呈低表达,且ANO7阳性表达是前列腺癌患者术后发生生化复发的保护因素.