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isthmin 1对斑马鱼胚胎汇聚延伸运动的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 在原肠期,斑马鱼胚胎细胞进行着外包(epiboly)、内卷(involution)以及汇聚延伸(convergence and extension)运动,对于胚胎的形态发生起关键作用.本文旨在研究isthmin 1(ism1)在斑马鱼胚胎发育中的表达图谱,并进一步探讨其在原肠期胚胎汇聚延伸运动中的功能.方法 通过原位杂交技术,检测ism1在斑马鱼早期胚胎发育中的表达图谱;利用过表达和特异敲降等实验技术,活体拍照及原位杂交检测ism1对胚胎汇聚延伸运动的影响.结果 整胚原位杂交实验结果显示ism1是合子表达的基因,在30% 外包时期开始表达于胚胎背部,原肠期表达在整个胚胎边缘区,尤其在胚盾部位表达更为明显.活体拍摄及原位杂交结果表明,与野生型斑马鱼胚胎相比,过表达或敲低ism1均会使胚胎的汇聚延伸运动受到影响.结论 ism1是调控斑马鱼胚胎原肠期汇聚延伸运动的重要基因.
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编辑人员丨2023/8/6
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Rspo1调控斑马鱼胚胎汇聚延伸运动的研究
编辑人员丨2023/8/5
Rspo1(R-spondin 1)是分泌型Rspos(R-spondins)蛋白家族的成员,在雌性发育、血管生成和癌症等多个方面具有调控作用.为了研究Rspo1在早期胚胎发育中的功能,以斑马鱼(Danio rerio)作为模式生物,利用反转录PCR及原位杂交技术检测rspo1基因的时空表达模式;通过显微注射rspo1 mRNA或rspo1反义寡核苷酸(Morpholino,MO)对rspo1进行过表达或敲降;通过形态观察及原位杂交技术检测胚胎汇聚延伸(Convergence and extension,CE)运动是否正常;利用荧光素酶活性检测实验测定Wnt/PCP信号通路活性水平;通过蛋白印迹法检测表征Wnt/PCP信号通路活性的磷酸化JNK(Jun N-terminal kinase)蛋白的水平.结果显示:rspo1为母源基因,在12hpf前胚胎中呈全身性表达,rspo1的过表达或敲降均影响胚胎的CE运动;过表达rspo1降低Wnt/PCP信号通路报告质粒的活性,而敲降rspo1则增加其活性,与之相一致,rspol敲降的胚胎中磷酸化JNK的水平显著升高;此外,rspo1 mRNA与dnJNK(Dominant negative JNK)mRNA的共同注射,以及rspo1 MOs与wnt11或wnt5b mRNA的共同注射均能协同诱导CE运动缺陷.综上,在斑马鱼胚胎中,Rspo1通过负调控Wnt/PCP信号通路来调控胚胎的汇聚延伸运动.
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编辑人员丨2023/8/5
