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基于Wnt/β-catenin信号通路探讨环黄芪醇对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的作用
编辑人员丨1个月前
目的:本研究旨在探讨环黄芪醇对糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠创面愈合的影响及其作用机制.方法:受试动物设正常对照组、模型对照组、环黄芪醇20 mg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+IWR-1(Wnt通路抑制剂)8.2 μg/kg组、环黄芪醇20 mg/kg+STF-31(GLUT 1抑制剂)5.8 mg/kg组.除正常对照组外,其余大鼠经腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,剪去大鼠背部标记区域的皮肤和皮下组织建立皮肤溃疡模型.大鼠按分组灌胃给药14 d,并在给药第5、10、14 d测定大鼠创面愈合率;检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和还原性谷胱甘肽(GSH)的含量;HE染色检测创面组织的病理变化;免疫组化法检测创面组织中血管内皮生长因子A(VEGFA)和内皮型一氧化氮合酶(ENOS)的表达情况;细胞划痕法检测环黄芪醇对脐静脉内皮细胞(HU-VEC)在LPS诱导的炎症状态下迁移率的影响;Western blot法检测给药第10 d的创面组织和LPS诱导后的HUVEC细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、特异性顶部盘状底板反应蛋白-3(RSPO3)、G1/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP2)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)蛋白的表达情况.结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠在给药第5、10 d时创面愈合率显著降低(P<0.01),创面组织中ENOS的表达和血清SOD活力明显降低(P<0.05或P<0.01),血清MDA含量明显升高(P<0.05或P<0.01);在给药第10 d时,β-catenin、CyclinD1和MMP2蛋白的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇20 mg/kg组大鼠在给药第10 d时创面愈合率显著升高(P<0.01),在给药第5、10 d时血清中SOD活力和创面组织中ENOS的蛋白表达显著升高(P<0.01),β-catenin、cyclinD1和MMP2蛋白的表达明显上调(P<0.05或P<0.01).与空白对照组比较,模型对照组细胞的迁移率明显降低(P<0.05或P<0.01),CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白的表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,环黄芪醇25 μg/mL组细胞的迁移率明显升高(P<0.05或P<0.01),CyclinD1和MMP9蛋白的表达显著上调(P<0.01)o结论:环黄芪醇能促进糖尿病性皮肤溃疡模型大鼠的创面愈合,其作用机制涉及Wnt/β-catenin信号通路的激活.
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编辑人员丨1个月前
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RSPO3抑制体内结直肠癌移植瘤生长和增加NK细胞浸润的作用研究
编辑人员丨2023/9/2
背景与目的:结直肠癌的发生、发展涉及多个癌基因的激活和抑癌基因的失活,野生型R-脊椎蛋白3(R-spondin 3,RSPO3)在结直肠癌生长中的作用目前尚不清楚,本研究旨在探讨RSPO3对结直肠癌生长的影响并探索其潜在机制.方法:采用生物信息学分析RSPO3在结直肠癌及泛癌组织中的表达,分析结直肠癌中RSPO3表达与自然杀伤(natural killer,NK)细胞浸润、NK细胞激活分子表达的相关性.利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)和慢病毒感染建立RSPO3敲减的SW480-RSPO3-KD细胞株、RSPO3过表达的HCT116-RSPO3-OE细胞株及相应的对照细胞株.采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测体外各稳定转染细胞株的细胞增殖.采用流式细胞术分析各稳定转染细胞株的细胞周期、裸小鼠脾脏和移植瘤组织中NK细胞的比例.通过裸小鼠皮下移植瘤模型观察RSPO3敲减或过表达的结肠癌细胞在裸小鼠体内的生长.利用双荧光素酶报告基因系统检测RSPO3敲减或过表达对结肠癌Wnt基因转录活性的影响.结果:生物信息学分析显示,RSPO3在多种实体瘤肿瘤组织包括结直肠癌组织中的表达显著低于相应的癌旁组织.RSPO3敲减或过表达不影响体外SW480和HCT116结肠癌细胞的增殖(P>0.05)和细胞周期(P>0.05).但在裸小鼠体内,与对照细胞相比,RSPO3敲减显著促进SW480细胞移植瘤的生长(260.2±162.4 vs 1311.7±570.1,P<0.05),而RSPO3过表达则显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长(1549.0±241.2 vs 512.1±250.0,P<0.05).流式细胞术分析发现,在荷移植瘤裸小鼠体内,RSPO3敲减显著减少了脾脏和移植瘤组织中NK细胞的比例(脾脏:6.42±0.94 vs 5.25±0.59,P=0.04;移植瘤:8.27±0.29 vs 6.48±1.48,P=0.04);而RSPO3过表达显著增加了脾脏和移植瘤组织中NK细胞的比例(脾脏:5.29±0.16 vs 7.02±0.49,P=0.01;移植瘤:6.39±0.39 vs 8.14±0.34,P<0.05).癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据相关性分析显示,RSPO3表达与NK细胞表面标志物CD56(r=0.58,P<0.05)和CD16(r=0.64,P<0.05)的表达显著正相关,并与NK细胞激活标志物CD69(r=0.51,P<0.05)和KLRB1(r=0.37,P<0.05)的表达显著正相关.双荧光素酶报告基因实验结果显示,RSPO3敲减后Wnt荧光素酶活性下调(1.0±0.0 vs 0.45±0.09,P<0.05),而RSPO3过表达后Wnt荧光素酶活性上调(1.0±0.0 vs 1.75±0.14,P<0.05).结论:RSPO3能在体内显著抑制结直肠癌移植瘤的生长,并能增加移植瘤组织中NK细胞浸润,RSPO3是一个潜在的结直肠癌的抑制基因.
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编辑人员丨2023/9/2
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R-脊椎蛋白3对小鼠神经干细胞增殖及Wnt/β-catenin通路的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察R-脊椎蛋白3(Rspo3)对小鼠神经干细胞(NSCs)增殖的影响及其机制.方法 分离、悬浮培养孕14~15 d的CD1胎鼠大脑侧脑室下区(SVZ)NSCs并通过免疫荧光法鉴定.取第3代处于对数生长期的NSCs分为实验组和对照组,体积各为1 mL.实验组添加储存浓度为50 μg/mL的Rspo3蛋白0.8μL(终浓度40 ng/mL),对照组添加等体积的NSCs培养液.干预后6h通过BrdU细胞渗入实验法检测2组NSCs增殖情况.干预后4h和8h采用Western blotting实验检测β-catenin蛋白的表达. 结果 免疫荧光染色结果显示90%以上细胞呈巢蛋白和SOX2阳性.经过诱导分化后,部分细胞呈神经元核抗原或胶质纤维酸性蛋白阳性,证明实验中提取分离的细胞为NSCs.BrdU细胞渗入实验法显示实验组细胞增殖率为1.56±0.03,明显高于对照组(1.04±0.04),差异有统计学意义(P<0.05).Western blotting实验显示4h和8h时实验组 β-catenin蛋白相对表达量分别为1.09±0.10、1.20±0.13,对照组分别为0.56±0.05、0.83±0.04,实验组明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 Rspo3蛋白可在体外促进小鼠NSCs增殖,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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基于mRNA和miRNA表达谱及基因甲基化谱的直肠腺癌发生相关分子标志物的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 通过综合分析高通量miRNA/mRNA的表达数据及DNA甲基化数据,研究直肠腺癌(READ)潜在的发病机制.方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载miRNA/mRNA表达数据及DNA甲基化数据.利用DESeq2软件包筛选差异表达的miRNA(DEmiRNAs)、mRNA(DEmRNAs),利用COHCAP软件包筛选差异甲基化位点(DMSs).采用生物信息学方法分别构建DEmiRNAs与DEmRNAs的调控网络和DNA甲基化与DEmRNAs调控网络,获得DEmiRNAs与DEmRNAs负调控关系对(DEmiRNA-DEmRNA),以及DNA甲基化与DEmRNAs的负调控关系对(DNAmethylation-DEmRNA).利用KEGG分析得到异常甲基化的DEmRNAs富集的通路.最后通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证其中差异显著的DEmRNAs的表达水平.结果 在数据中筛选到了1192个DEmRNAs, 27个DEmiRNAs,通过靶基因筛选,获得1987个miRNA-mRNA调控关系对.得到446个甲基化异常的基因,6403个异常甲基化的CpG位点.通过对446个异常甲基化基因和668个DEmRNAs的关联性分析,发现50个DEmRNAs (39个下调和11个上调)伴有高甲基化,同时受到DEmiRNAs的负调控.这50个DEmRNAs显著富集于cAMP、昼夜节律和谷氨酸等信号通路.qRT-PCR结果显示DEmRNAs表达结果与预测结果一致.结论 受到DEmiRNAs负调控的7个高甲基化基因(SORCS1、PDZRN4、LONRF2、CNGA3、HAND2、RSPO2和GNAO1)可能促进了READ的发生.
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编辑人员丨2023/8/6
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RSPO4和乳腺癌细胞经典Wnt信号通路相关性研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨R-spondin4 (RSPO4)对乳腺癌经典Wnt信号通路影响.方法:以0,10,50,250 ng·mL-1不同质量浓度RSPO4处理乳腺癌细胞株MDA-MB-231和HS578T 24 h,运用荧光素酶报告基因技术分析其对β-连环蛋白(β-catenin)/TCF转录活性影响;同时运用谷胱甘肽转移酶-E-钙黏蛋白(GST-E-cadherin)结合法提取胞浆游离β-catenin,Western blot法测定总β-catenin、胞浆游离β-catenin、低密度脂蛋白相关受体-6 (LRP6)及磷酸化LRP6 (p-LRP6)及Axin2蛋白水平.结果:RSPO4可明显增强乳腺癌细胞株MDA-MB-231和HS578T的TOP flash活性,升高p-LRP6、胞浆游离β-catenin、Axin2蛋白水平,并呈现剂量依赖性.结论:RSPO4可激活乳腺癌细胞经典Wnt信号通路.
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编辑人员丨2023/8/6
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基于Wnt/β-catenin信号通路的三七/白及胶海绵促进糖尿病足溃疡模型大鼠创面愈合的作用机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究三七/白及胶海绵促进糖尿病足溃疡(DFU)模型大鼠创面愈合的作用机制.方法:取健康SD大鼠,采用高脂高糖饲料喂养、一次性腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,再以钕铁硼磁铁压轧大鼠背部制作溃疡创面造成DFU模型.将60只DFU模型大鼠随机分为A组(空白组,即生理盐水纱布组)、B组(凡士林纱布组)、C组(明胶海绵组)、D组(三七/白及胶海绵组),每组15只.各组大鼠分别给予相应纱布/敷料覆盖创面进行干预治疗,每1~2天换药1次.干预治疗后第3、7天时,分别肉眼观察各组大鼠创面愈合情况并计算创面愈合率;采集创缘组织制作苏木精-伊红(HE)染色切片,在显微镜下进行组织病理学观察;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定创面组织中β-连环素(β-catenin)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、R-脊椎蛋白3(Rspo3)的mRNA表达水平.结果:干预治疗后第3、7天时,与A、B、C组分别比较,D组大鼠创面愈合率显著升高(P<0.05);创面组织的炎细胞浸润、胶原纤维沉积、毛细血管和肉芽组织生长均明显增加;β-catenin、Rspo3的mRNA表达水平均有升高,GSK-3β的mRNA表达水平均有降低,且除了干预治疗后第3天时的β-catenin和第7天时的GSK-3β与C组比较差异不显著外,其余指标差异均有统计学意义(P<0.05).结论:三七/白及胶海绵可有效促进DFU模型大鼠溃疡创面愈合;其作用机制可能与Wnt/β-catenin通路中β-catenin、Rspo3的mRNA表达的上调和GSK-3β的mRNA表达的下调相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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明胶/白芨胶-三七多孔材料对糖尿病溃疡大鼠创面修复及β-catenin、GSK-3β、RSPO-3表达的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究自制明胶/白芨胶-三七多孔材料对糖尿病溃疡大鼠模型创面愈合的影响,探讨其促进慢性溃疡愈合的机制.方法 将60只高糖高脂喂养4周后SPF级SD雄性大鼠随机分为明胶/白芨胶-三七组、明胶/白芨胶组、凡士林组和空白组,每组15只.各组大鼠均采用磁石在背部脊柱两侧制作直径为2 cm大小的全层皮肤缺损模型,分别用明胶/白芨胶-三七多孔材料、明胶/白芨胶多孔材料、凡士林敷纱和无菌纱布覆盖创面,无菌敷料和绷带固定,每天换药1次,单笼饲养防止互舔.分别于致伤后第3天和第7天取材(每组每次各5只),光学显微镜下观察大鼠背部组织细胞生长分化和创面组织中毛细血管生长情况,并用Western blot法检测各组创面组织中β-连环素(β-catenin)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、R-脊椎蛋白3(RSPO-3)表达情况.结果 造模第3天,4组创面均可见增生的毛细血管,其中明胶/白芨胶-三七组最多,明胶/白芨胶组次之;造模第7天,明胶/白芨胶-三七组、明胶/白芨胶组皮肤结构基本恢复正常,凡士林组和空白组皮肤结构与正常皮肤结构差异大,新生的毛细血管亦较少.造模第3天、第7天,明胶/白芨胶-三七组β-catenin、RSPO-3蛋白表达水平均明显高于其他组(P均<0.05),GSK-3β蛋白表达水平均明显低于其他组(P均<0.05).结论 明胶/白芨胶-三七多孔材料可明显促进糖尿病溃疡大鼠创面愈合,其机制可能与上调Wnt/β-catenin通路中β-catenin、RSPO-3表达,下调GSK-3β蛋白表达相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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紫苏醇对结肠癌SW480细胞凋亡的影响及其机制研究★
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究紫苏醇对结肠癌SW480细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 体外培养结肠癌SW480细胞,分为不同浓度(1 μg·mL-1、5 μg·mL-1、10 μg·mL-1)阿帕替尼组和不同浓度(1 μg·mL-1、5 μg·mL-1、10 μg·mL-1)紫苏醇组,检测各组细胞内Rspo3和Notch-1蛋白的表达、细胞增殖活性、细胞周期、细胞侵袭、转移能力以及凋亡蛋白Caspase-3的活性.结果 紫苏醇和阿帕替尼均可抑制结肠癌SW480细胞内Rspo3和Notch-1蛋白的表达,并随着浓度升高,抑制作用呈增强趋势(P<0.05),且紫苏醇对Rspo3和Notch-1蛋白表达的抑制作用显著优于相同剂量的阿帕替尼(P<0.05).紫苏醇和阿帕替尼均可抑制结肠癌SW480细胞的增殖和侵袭,且抑制作用随浓度升高而增强(P<0.05).紫苏醇和阿帕替尼处理后,G0/G1期细胞显著增加(P<0.05),而G2/M期细胞无显著变化(P>0.05).低剂量(1 μg·mL-1)紫苏醇和阿帕替尼对Caspase 3活性无明显影响(P>0.05),而中、高剂量(5 μg·mL-1、10 μg·mL-1)紫苏醇和阿帕替尼可显著增强结肠癌SW480细胞中Caspase-3的活性(P<0.05). 结论 紫苏醇可抑制结肠癌SW480细胞的增殖和细胞内Notch-1蛋白的表达,并反馈性下调Rspo3基因与蛋白的表达.
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编辑人员丨2023/8/6
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R-脊椎蛋白1表达与Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌中的相关性及临床意义
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨R-脊椎蛋白1(RSPO1)、Wnt/β-catenin与乳腺癌生物学行为的相关性及其可能的机制.方法 收集惠州市中心人民医院2009年1月至2015年12月乳腺癌病例标本,采用组织芯片免疫组织化学SP法,检测224例非特殊型乳腺浸润性癌(BIC-NST)、155例乳腺导管原位癌(BDCIS)及379例癌旁正常组织(NBTAC)中RSPO1、SFRP1、β-catenin的表达.结果 RSPO1和β-catenin在BIC-NST及BDCIS组织中的表达明显高于NBTAC(P<0.01),而SFRP1在BIC-NST及BDCIS组织中的表达明显低于NBTAC(P<0.01);RSPO1和β-catenin在高级别BDCIS的表达率明显高于低级别组(P<0.01),在Ⅲ级BIC-NST分化组的表达率明显高于Ⅰ级分化组,而且组织分级越高RSPO1和β-catenin的表达越高,两者之间呈明显的正相关(r=0.114,P=0.023);但SFRP1在Ⅲ级BIC-NST分化组的表达率明显低于Ⅰ级分化组,且组织分级越高其表达越低,与RSPO1和β-catenin的表达均呈明显的负相关(r=-0.217,P=0.011).RSPO1和β-catenin表达在患者临床分期Ⅲ+Ⅳ期中的表达明显高于Ⅰ+Ⅱ期的表达,且与淋巴结转移、脉管浸润相关(P<0.01);而SFRP1的表达有相反结果.结论 RSPO1、β-catenin蛋白的高表达和SFRP1蛋白的低表达与乳腺癌的发生、发展密切相关,可为乳腺癌的诊断和靶向治疗提供新的靶点.
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编辑人员丨2023/8/6
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Rspo1、LGR5、NF-κB/p65在胃癌中的表达及其临床意义
编辑人员丨2023/8/6
目的 通过检测特异性顶部盘状底板反应蛋白1(Rspo1)、富含亮氨酸的重复G蛋白偶联受体5(LGR5)与核转录因子κB/p65(NF-κB/p65)在人胃癌中的表达水平及与临床病理因素及预后之间的关系,并分析三者在胃癌发生发展中发挥的作用.方法 免疫组织化学SP法测定Rspo1、LGR5及NF-κB/p65在115例胃癌组织标本及20例正常组织标本中的表达.结果 Rspo1、LGR5、NF-κB/p65在胃癌中表达较正常组织增高;Rspo1、LGR5、NF-κB/p65的表达与浸润深度、TNM分期、淋巴结及远处转移有关,同时Rspo1表达与肿瘤大小、LGR5表达与肿瘤大小及分化程度有关;胃癌组织中Rspo1与LGR5、NF-κB/p65的表达呈正相关;Kaplan-Meier分析显示Rspo1、LGR5和NF-κB/p65表达阳性组3年生存率均低于阴性组;单因素Cox分析提示肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、Rspo1、LGR5、NF-κB/p65阳性是影响胃癌患者预后的危险因素;多因素Cox分析提示淋巴结转移、远处转移、Rspo1及LGR5阳性是影响胃癌患者预后的独立危险因素.结论 Rspo1、LGR5、NF-κB/p65的表达与胃癌的发生发展有关;Rspo1-LGR5在激活Wnt/β-catenin通路的同时可能激活NF-κB通路,二者对胃癌发展有协同作用.
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编辑人员丨2023/8/6
