目的 探讨沙棘熊果酸对大鼠坐骨神经损伤的修复作用.方法 2月龄Wistar大鼠30只,坐骨神经损伤模型制备后随机分为熊果酸组和对照组,每组15只.熊果酸组以熊果酸150 mg/(kg·d)灌胃,对照组给予同样剂量的生理盐水,连续灌胃6周.6周后,H&E染色法观察大鼠坐骨神经病理学变化,并计算大鼠SFI、MNCV;免疫组织化学法检测坐骨神经组织NGF的表达,蛋白免疫印迹法检测L4～L6 脊髓中GAP-43的表达情况.结果 术后6周后,与对照组相比,熊果酸组再生神经纤维数目有所增多,排列相对规则,毛细血管结构丰富,增生的成纤维细胞减少;SFI和MNCV%明显增高(P<0.05),NGF蛋白阳性表达显著增高(P<0.05),坐骨神经组织中GAP-43的蛋白表达量明显上升(P<0.05).结论 沙棘熊果酸干预能够使大鼠坐骨神经损伤后功能得到改善,这可能与增加大鼠NGF蛋白阳性的表达,提高GAP-43蛋白的表达水平有关.

目的:通过网络药理学以及分子对接技术对沙棘活性成分干预非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的分子作用机制深入分析研究.方法:在GEO数据库检索非酒精性脂肪肝病的高通量测序数据,通过R语言edgeR包差异表达分析后,将差异基因与TCMSP数据库检索到的沙棘关键成分对应靶点取交集,得到沙棘干预非酒精性脂肪肝病的潜在靶点.利用基因集富集分析,研究潜在靶点相关细胞功能和信号通路,并使用Cytoscape构建成分-靶点-通路三者作用网络.随后进行蛋白质互作网络(PPI)和网络拓扑分析Degree确定核心干预靶点,并通过AutoDock Vina和PyMOL开源工具进行核心靶点与核心成分的虚拟对接工作,预测配体与受体之间的分子作用机制.结果:成分-靶点-通路网络由159个节点以及387对互作关系构建而成.分子对接结果显示,槲皮素、黄酮、山柰酚、亚麻酸、异鼠李素、杨梅黄酮、香豆素、熊果酸、芦丁和豆甾醇共10种活性物质与JUN、MMP9、FGF2、VCAM1、CDKN1A、ACE、SERPINE1、SPP1、NOS3和CCNA210个核心靶点有较高亲和性.功能富集和通路富集分析主要得到脂肪酸合成与代谢的生物过程.沙棘中槲皮素等62种活性成分显示通过调节转录因子JUN等61个靶点影响干预非酒精性脂肪肝病的发展.结论:沙棘中多种活性成分可能通过多靶点、多通路影响脂质积累、减弱炎症反应和清除活性氧从而发挥预防或干预非酒精性脂肪肝病病情发展的作用.沙棘中富含的熊果酸等有机酸干预非酒精性脂肪肝病潜力巨大.

目的 基于线粒体-细胞色素c途径探讨沙棘熊果酸对酒精性肝病大鼠肝细胞凋亡的抑制作用.方法 根据随机数字表将50 只SPF级雄性Wistar大鼠进行完全随机分组,分为正常对照组、酒精模型组、沙棘熊果酸低、中和高剂量组,每组10 只.正常对照组给予每日1 次生理盐水灌胃8 周;酒精模型组用阶梯式浓度酒精灌胃的方法持续灌胃8 周;沙棘熊果酸组分别按50 mg/kg、100 mg/kg和150 mg/kg灌胃,1 h后再灌喂模型组同等剂量酒精.测定各组大鼠血清肝功能指标;HE染色观察肝组织病理情况;电镜下观察大鼠肝细胞超微结构;TUNEL法检测大鼠肝细胞凋亡情况;Western Blot法检测肝细胞线粒体和胞浆细胞色素c和活化caspase-3 蛋白表达水平.计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 与酒精模型组相比,沙棘熊果酸中、高剂量组大鼠血清ALT、AST和胆碱酯酶水平均下降(P值均＜0.05);酒精模型组大鼠肝细胞索排列紊乱,肝细胞水肿、脂肪变性明显,而沙棘熊果酸中、高剂量组大鼠肝细胞索排列逐渐趋于正常、肝脂肪变性明显改善;肝细胞线粒体数目增加、形态明显改善;肝细胞凋亡率、胞浆细胞色素c和活化caspase-3 蛋白的表达均低于酒精模型组(P值均＜0.05).结论沙棘熊果酸可改善酒精性肝病大鼠肝功能和肝组织形态,可能与抑制肝细胞线粒体细胞色素c的释放及caspase-3蛋白的活化,通过线粒体-细胞色素c途径抑制肝细胞凋亡有关.

为全面了解青海玉树沙棘的营养价值,选取青海玉树5个不同地区的沙棘,对其不同部位(果实、枝、叶、籽)的营养成分进行分析和营养价值的评价,为玉树沙棘再加工产品的开发和利用提供重要依据.分别用亚临界流体丁烷和1,1,1,2-四氟乙烷(R134a)萃取出沙棘不同部位中的粗脂肪和黄酮类成分,采用快速溶剂萃取法(ASE)提取沙棘中的糖分,然后分别测定了各部位脂肪、黄酮类成分、总糖、多糖、类胡萝卜素、总酸、维生素C、原花青素、沙棘籽中脂肪酸含量,同时还测定了各部位主要常规营养成分、氨基酸和各种矿物质元素含量等.结果表明,玉树沙棘果实中含有丰富的氨基酸(以干计,6.89％)、可溶性糖(7.56％)、类胡萝卜素(34.1 mg/100g)、维生素C(1430 mg/100 g)和总矿物质元素(226.4 mg/100 g);玉树沙棘叶中含有丰富的蛋白质(17.5％)、总黄酮(2.10％)、氨基酸(以干计,15.41％)、总矿物质元素(748.1 mg/100 g);玉树沙棘枝中含有丰富的蛋白质(13.5％)、粗纤维(21.1％)、熊果酸(144.1 mg/100 g)、氨基酸(以干计,11.62％)、总矿物质元素(376.9 mg/100 g);玉树沙棘籽中含有丰富的蛋白质(21.4％)、原花青素(3.27％)、氨基酸(以干计,18.63％)、不饱和脂肪酸(548.6 mg/g).上述数据表明,青海玉树沙棘不同部位具有良好的营养价值和开发前景,可为青海玉树沙棘的质量控制提供依据.

目的 采用柱前衍生高效液相色谱-荧光检测/质谱联用(HPLC-FLD-APCI/MS)分析青藏高原沙棘果实中的三萜酸.方法 选择2-(7H-二苯并[a,g]咔唑)乙基对甲苯磺酸酯作为HPLC柱前荧光衍生标记试剂,采用Hypersil BDS C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相为5％乙腈(A)-乙腈(B),流速1.0 mL·min-1,柱温35℃,进样量10 μL,检测波长为λex=300 nm、λem=395 nm.结果 5种三萜酸衍生物均具有较好的线性、精密度、回收率和较低的检测限,其r均大于0.9994,检测限为1.21～1.54 ng·mL-1.结论 青藏高原产沙棘果实中富含三萜酸,尤其是熊果酸和齐墩果酸,还含有少量的桦木酸;不同产地沙棘果实中所含三萜酸的种类相同,但含量存在一定的差异.

目的 探讨沙棘熊果酸对酒精性肝病模型大鼠的保护作用及其机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠50只,随机分为5组:正常对照组、模型对照组和熊果酸小、中、大剂量(50,100,150 mg·kg-1·d-1)组,每组10只.采用灌胃方式给药,持续8周,末次给药12 h后,腹主动脉取血,留取肝脏组织.测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及肝匀浆中三酰甘油(TG)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏形态结构改变;TUNEL法测定大鼠肝细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blotting)检测大鼠肝组织Bcl-2、Bax及cleaved caspase-3的蛋白表达变化.结果 HE染色显示,模型对照组大鼠肝索排列紊乱,且细胞浆内散在空泡,肝组织内炎症细胞聚集,肝细胞呈现片状坏死.但熊果酸各剂量组较模型对照组肝脏脂肪变性明显改善,炎症细胞浸润及坏死区域明显减少,组织结构趋向正常,且熊果酸中、大剂量组血清ALT、AST水平及肝组织TG含量明显降低(P<0.05).TUNEL结果显示,熊果酸大剂量组染色阳性细胞数及肝细胞凋亡指数较模型对照组明显降低(P<0.05);免疫印迹法检测结果显示,与模型对照组比较,熊果酸各剂量组肝组织Bcl-2蛋白表达均明显升高,Bax蛋白表达均明显下降,且cleaved caspase-3蛋白表达量均增多.结论 沙棘熊果酸对大鼠酒精性肝病有改善作用,其机制可能与调控肝细胞凋亡关键蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的表达水平,进而抑制肝细胞的异常凋亡有关.

目的 探究沙棘熊果酸调控NLRP3/caspase-1轴在抗结核药物致人肝细胞损伤中的作用.方法 正常肝细胞株HL-7702分正常组、模型组及沙棘熊果酸低、中、高浓度组.除正常组外,其余各组120 μg/mL异烟肼和240 μg/mL利福平联合处理构建抗结核药物致人肝细胞损伤模型,沙棘熊果酸低、中、高浓度组同时添加0.018、0.18、1.8 μmol/L沙棘熊果酸共培养.CCK-8法检测细胞增殖能力;ELISA检测上清液中TNF-α、白IL-1β水平;SOD活性检测试剂盒、MDA检测试剂盒检测上清液中SOD、MDA水平;流式细胞术检测细胞凋亡能力;蛋白免疫印迹检测细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平.结果 与正常组比较,模型组(12、24、36 h)细胞存活率、上清液中SOD水平降低(P＜0.05);上清液中TNF-α、IL-1β、MDA水平,细胞凋亡率,细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平升高(P＜0.05).与模型组比较,沙棘熊果酸低、中浓度组(24、36 h)、沙棘熊果酸高浓度组(12、24、36 h)细胞存活率,沙棘熊果酸低、中、高浓度组上清液中SOD水平升高(P＜0.05);沙棘熊果酸低、中、高浓度组上清液中TNF-α、IL-1β、凋亡率、细胞中NLRP3蛋白水平,沙棘熊果酸中、高浓度组上清液中MDA,细胞中pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平降低(P＜0.05).随着沙棘熊果酸浓度的升高,(12、24、36 h)细胞存活率、上清液中SOD水平逐渐升高(P＜0.05);上清液中TNF-α、IL-1β、MDA、凋亡率,细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1(p10)蛋白水平逐渐降低(P＜0.05),呈浓度依赖效应.结论 沙棘熊果酸在抗结核药物致人肝细胞中抑制NLRP3/caspase-1通路从而抑制炎症和氧化应激,抑制细胞病变发生,从而促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,实现对肝细胞的保护.

目的 采用RP-HPLC法同时测定沙棘果实中山楂酸、科罗索酸、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸、obtusol的含量.方法 采用C18色谱柱(250 mm x4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.5％甲酸溶液(85:15),流速0.8mL·min-1,检测波长210 nm,柱温30℃,进样量10 μL.结果 山楂酸、科罗索酸、白桦脂酸、齐墩果酸、熊果酸、obtusol等的线性范围分别为0.088～3.012、0.192～5.988、0.098～2.982、0.213～6.031、0.435～11.978、0.113～3.634 μg(r2≥0.9990),平均加样回收率分别为93.29％、95.96％、94.07％、96.48％、98.43％、97.78％(n=6),RSD 均小于 1.7％(n=6).结论 所用方法操作简便,分离效果、重复性及稳定性均较好,结果准确,可用于沙棘样品中6种三萜酸类成分的测定.

目的 通过网络药理学的方法对中药沙棘和藏药麻花秦艽配伍防治缺氧的主要活性成分和作用机制进行预测和分析,为临床用药和开发新药提供依据.方法 通过中国知网、万方等数据库、中药系统药理学数据库分析平台(TCMSP)和Swiss Target Prediction平台,收集沙棘和麻花秦艽的活性化合物并对其靶点进行预测,应用人类基因数据库(GeneCard)收集缺氧的相关靶点;用Cytoscape软件来构建沙棘,麻花秦艽活性成分和对应的靶点的成分-靶点网络图;利用STRING数据库构建药物疾病交集靶点的PPI网络,并筛选出关键靶点和中心靶点;利用David数据库进行Go分析和KEGG信号通路富集分析,利用AutoDock软件进行分子对接,利用Pymol软件进行相应的制图.结果 共筛选出沙棘和麻花秦艽活性成分35个(如熊果酸、山奈酚、木犀草素等),与高原缺氧相关的靶点162个,其中关键靶点28个(如PIK3R1,MAPK3,IL-2和MAPK等).GO功能分析确定了107个条目(P<0.05),涉及凋亡的正负调控作用和氧化应激反应等.KEGG通路分析发现相关的信号通路39条(如Rap1信号通路、ErbB信号通路、肾素-血管紧张素系统等),分子对接结果显示,多数活性成分与关键靶点具有结合作用.结论 本研究初步证明了麻花秦艽和沙棘配伍对缺氧性疾病的预防和治疗有着多靶点多通路的特点.

沙棘是一种含有丰富营养物质和生物活性成分的植物.为了进一步提高新疆阿合奇县沙棘中三萜酸物质的得率,利用单因素实验与正交试验优化沙棘中三萜酸物质的提取工艺,并分析比较沙棘不同部位的三萜酸物质含量差异.通过单因素实验确定了影响萜类物质得率的重要因素为乙醇浓度、料液比.以总三萜酸的得率为综合考察指标,采用正交试验确定了沙棘三萜酸的最适提取工艺条件:按照料液比1∶15(g/mL)加入体积分数80％的乙醇,先超声1 h,再将料液进行60℃水浴回流1.5 h.在此条件下,沙棘叶中三萜酸的得率达到2.332 mg/g,其中科罗索酸为0.332 mg/g、齐墩果酸为0.875 mg/g,熊果酸为1.125 mg/g.沙棘不同部位的三萜酸总含量(从大到小)顺序为沙棘叶、沙棘籽、沙棘果.