近半数的Ⅳ期乳腺癌患者在治疗上涉及放化疗 [1]，然而放疗抵抗性的存在，导致该部分患者预后不良，生存率低。研究表明，五环三萜类化合物熊果酸(ursolic acid, UA)可以通过阻滞G2/M细胞周期，增加活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平，从而提高人结直肠癌HCT 116、人前列腺癌DU145等细胞的放射敏感性 [2,3]，而其对乳腺癌MCF-7细胞的放疗增敏价值鲜有报道。

目的:探讨熊果酸（ursolic acid，UA）对变应性鼻炎（AR）细颗粒物（particulate matter，PM2.5）吸入暴露后氧化应激和多种炎性因子的影响。方法:将60只健康雌性SD大鼠随机分为5组，分别为正常对照组（NC组）、PM2.5未暴露AR组（AR组）、PM2.5暴露AR组（ARE组）、UA干预AR组（AR+UA组）和UA干预PM2.5暴露AR组（ARE+UA组），每组12只。采用卵清蛋白（OVA）腹腔注射基础致敏和滴鼻激发进行AR造模。采用吸入性暴露系统进行PM2.5吸入暴露，浓度为200 μg/m 3，3 h/d，连续30 d。对UA干预组采用UA灌胃，浓度为20 mg/（kg·d）。观察各组大鼠的AR症状及鼻黏膜的病理学改变。检测鼻黏膜超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性及丙二醛的水平变化。酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组血清OVA特异性免疫球蛋白E（OVA-sIgE）、白细胞介素（IL）-6和IL-17的水平变化。蛋白芯片技术检测鼻黏膜多种炎性因子水平。采用SPSS 20.0软件，以单因素方差分析进行统计学分析。 结果:在UA干预后，ARE+UA组较ARE组大鼠的AR症状减轻，鼻黏膜固有层炎性细胞浸润减少，上皮层病理损伤减轻。ARE+UA组鼻黏膜SOD活性较ARE组升高［（50.10±3.09）U/mg比（20.13±1.30）U/mg， F=597.54， P<0.01］，ARE+UA组鼻黏膜丙二醛含量较ARE组下降［（57.78±12.36）nmol/g比（124.12±9.40）nmol/g， F=115.51， P<0.01］。ARE+UA组血清OVA-sIgE、IL-6和IL-17水平较ARE组显著下降［（11.61±0.27）ng/ml比（20.30±0.67）ng/ml、（47.59±15.49）pg/ml比（98.83±10.98）pg/ml、（623.30±8.75）pg/ml比（913.32±9.06）pg/ml， F值分别为283.42、80.45、683.73， P值均<0.01］。蛋白芯片检测显示ARE+UA组鼻黏膜中IL-4、IL-6、IL-13、趋化因子CXCL7、IL-1α、IL-1β、基质金属蛋白酶-8和单核细胞趋化蛋白1水平较ARE组下降，而干扰素γ和IL-10的水平明显升高（ P值均<0.01）。 结论:UA可抑制AR的氧化应激反应及炎性因子的表达和释放，对PM2.5吸入暴露诱发和加重的AR病理损伤起到保护作用。

目的:以髓样分化蛋白-2（MD-2）为研究载体，探讨熊果酸抗脓毒症的作用机制。方法:应用生物膜干涉技术测定熊果酸与MD-2的亲和力，基于分子对接技术测定熊果酸与MD-2的键合方式。RPMI 1640培养基培养巨噬细胞Raw 264.7，细胞密度达到80%~90%时进行传代培养，取第2代细胞进行实验，通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测8、40和100 mg/L熊果酸对细胞活性的影响。将细胞分为空白组、内毒素组（LPS 100 μg/L）和熊果酸组（加入8、40或100 mg/L熊果酸后给予100 μg/L LPS处理）。用酶联免疫吸附试验（ELISA）评价熊果酸对一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-6、IL-1β）等细胞因子释放的影响；反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）评价熊果酸对TNF-α、IL-6、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧合酶2（COX-2）mRNA表达的影响；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测熊果酸对内毒素-Toll样受体4/MD-2-核转录因子-κB（LPS-TLR4/MD-2-NF-κB）通路中蛋白表达的影响。结果:熊果酸可能进入MD-2的疏水性空腔，通过疏水键与MD-2的氨基酸残基结合表现出与蛋白的较高亲和力〔解离常数（KD）＝1.43×10 -4〕。随着熊果酸浓度升高，细胞活性略有降低，8、40和100 mg/L熊果酸处理的细胞活性分别为96.01%、94.32%和92.12%，与空白组（100%）比较差异均无统计学意义。与空白组比较，LPS组细胞因子水平明显升高；而8、40和100 mg/L熊果酸处理可使细胞因子水平显著下降，且浓度越高作用越明显〔100 mg/L熊果酸与LPS组比较：IL-1β（μmol/L）：38.018±0.675比111.324±1.262，IL-6（μmol/L）：35.052±1.664比115.255±5.392，TNF-α（μmol/L）：39.078±2.741比119.035±4.269，NO（μmol/L）：40.885±2.372比123.405±1.291，均 P<0.01〕。与空白组比较，LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达均明显升高，LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、髓样分化因子88（MyD88）、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）和iNOS的蛋白表达明显上调。与LPS组比较，100 mg/L熊果酸与MD-2蛋白作用，可使TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2的mRNA表达明显下降〔TNF-α（2 -ΔΔCt）：4.659±0.821比8.652±0.787，IL-6（2 -ΔΔCt）：4.296±0.802比11.132±1.615，IL-1β（2 -ΔΔCt）：4.482±1.224比11.758±1.324，iNOS（2 -ΔΔCt）：1.785±0.529比4.249±0.811，COX-2（2 -ΔΔCt）：5.591±1.586比16.953±1.651，均 P<0.01〕，并显著下调LPS-TLR4/MD-2-NF-κB通路中MD-2、MyD88、p-NF-κB p65和iNOS的蛋白表达（MD-2/β-actin：0.191±0.038比0.704±0.049，MyD88/β-actin：0.470±0.042比0.875±0.058，p-NF-κB p65/β-actin：0.178±0.012比0.571±0.012，iNOS/β-actin：0.247±0.035比0.549±0.033，均 P<0.01）。但3组间NF-κB p65的蛋白表达差异无统计学意义。 结论:熊果酸抑制细胞因子和介质的释放及表达，通过阻断MD-2蛋白调控LPS-TLR4/MD-2-NF-κB信号通路，从而起到抗脓毒症的作用。

目的:探究熊果酸（ursolic acid，UA）对异位子宫内膜基质细胞（ectopic endometrial stromal cells，EESCs）增殖、迁移和铁死亡的影响及其作用机制。方法:构建子宫内膜异位症小鼠模型，并分离原代EESCs，使用不同浓度（0、2.5、5、10、20、40、50、80、100、200 μmol/L）的熊果酸处理细胞；并将细胞分为Control组（正常培养）、2.5 μmol/L UA组（2.5 μmol/L熊果酸处理）、5.0 μmol/L UA组（5.0 μmol/L熊果酸处理）、10.0 μmol/L UA组（10 μmol/L熊果酸处理）、和UA+DUSP19组（10 μmol/L熊果酸+50 μmol/L的JAK2/STAT3信号通路激活剂DUSP19处理）。使用CCK-8法检测细胞存活率；使用平板克隆法检测细胞增殖；使用Transwell小室实验检测细胞迁移能力；使用试剂盒检测各组细胞Fe 2+水平以及丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）含量；使用蛋白免疫印迹检测各组细胞Ki67、PCNA、CyclinD1、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3蛋白表达水平。 结果:Control、2.5 μmol/L UA、5.0 μmol/L UA、10.0 μmol/L UA组克隆数分别为：（152.22±15.47）、（121.22±11.54）、（92.00±5.54）、（66.44±6.88）个；Ki67蛋白表达量分别为：1.08±0.10、0.73±0.07、0.61±0.06、0.45±0.02；PCNA蛋白表达量分别为：0.85±0.07、0.64±0.05、0.41±0.03、0.31±0.05；CyclinD1蛋白表达量分别为：0.98±0.11、0.65±0.06、0.51±0.05、0.42±0.07；迁移数目分别为（92.78±6.27）、（62.22±2.20）、（50.22±4.59）、（39.11±4.33）个；Fe 2+水平分别为：（1.06±0.07）、（1.21±0.11）、（1.33±0.08）和（1.47±0.09）μmol/g；MDA含量分别为：（0.48±0.06）、（0.65±0.07）、（0.85±0.08）和（1.03±0.11）μmol/g；ROS含量分别为（19.85±1.21）%、（24.83±2.79）%、（29.04±1.86）%、（33.87±2.45）%；SOD含量分别为：（36.41±3.56）、（31.03±2.81）、（25.63±2.84）和（19.62±1.67）U/mg；p-JAK2蛋白表达量分别为：0.85±0.10、0.75±0.06、0.53±0.05、0.31±0.03；p-STAT3蛋白表达量分别为：1.08±0.11、0.79±0.06、0.63±0.07、0.42±0.03。UA组和UA+DUSP19组的p-JAK2蛋白含量分别为：0.38±0.05、0.75±0.08；p-STAT3蛋白表达量分别为：0.46±0.04、0.80±0.03；细胞存活率分别为：（52.55±2.44）%、（82.18±4.72）%；Fe 2+水平分别为：（1.57±0.06）和（1.21±0.13）μmol/g。以上指标，Control组与2.5 μmol/L UA组、5.0 μmol/L UA组、10.0 μmol/L UA组之间差异均具有统计学意义（ P<0.05）；2.5 μmol/L UA组、5.0 μmol/L UA组、10.0 μmol/L UA组之间差异均具有统计学意义（ P<0.05）；UA组和UA+DUSP19组之间p-JAK2、p-STAT3、细胞存活率和Fe 2+水平差异均具有统计学意义（ P<0.05）。 结论:熊果酸可通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制EESCs细胞增殖、迁移，并诱导铁死亡，进而发挥对子宫内膜异位症的保护作用。

探讨五虎汤治疗呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘的效应物质及作用机制.使用超高效液相串联高分辨质谱仪确定五虎汤的入血成分;借助数据库对入血成分作用于哮喘的靶点进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及基因本体论(GO)功能分析.同时将靶点蛋白及代谢物-靶点-通路等信息导入STRING数据库,构建蛋白互作网络,明确五虎汤核心成分及关键通路.体内实验部分使用RSV联合鸡卵清蛋白(OVA)建立哮喘模型,通过肺功能、苏木精-伊红(HE)染色、酶联免疫吸附测定(ELISA)法、蛋白免疫印迹法及免疫组织化学法验证五虎汤对RSV诱导哮喘小鼠的干预作用.结果显示,五虎汤入血成分以黄酮类、苯丙素类、木脂素类、萜类等化合物为主,作用于儿童哮喘的核心成分有(-)-表没食子儿茶素、山柰素、异甘草素、香叶木素、桦木酸、熊果酸、瑞香素、七叶素等,钙信号通路、神经活性配体-受体相互作用、NOD样受体信号通路、T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路等是其靶点主要作用通路.体内实验结果表明,五虎汤能够改善肺功能指标,下调白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17((IL-17)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,并且能够降低肺组织中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶14(MAPK14)、核因子-κB亚基1(NFKB1)等蛋白的表达,减轻中性粒细胞炎症浸润及肺淤血.结果表明,五虎汤通过多组分、多靶点、多途径的协同作用干预病毒诱发哮喘,体内实验证明其能抑制NOD样受体信号通路的激活,减轻哮喘小鼠气道炎症与气道损伤.

目的:探究壮骨止痛方治疗绝经后骨质疏松症的潜在作用靶点与机制.方法:利用STRING数据库建立基于BATMAN-TCM数据库筛选出的药物作用靶点与GeneCards、TTD和OMIM数据库中PMOP疾病靶点交集的PPI网络,并借助Cytoscape软件,将该网络可视化处理,得到"药物-活性成分-靶点-疾病"网络,同时,分子对接验证核心活性成分与关键靶点间的结合能力.实验建立绝经后骨质疏松的动物模型,采用mirco-CT和HE染色技术研究壮骨止痛方对绝经后骨质疏松症的治疗作用,并通过RT-PCR技术评估关键靶点mRNA的表达情况.结果:获得壮骨止痛方活性成分与疾病共同靶点69个.其中关键靶点为PPARG、PTGS2、ESR1等.药物-活性成分-靶点-疾病网络揭示核心活性成分为豆甾醇、异补骨脂素、熊果酸、齐墩果酸等.分子对接结果显示两者有较强结合能力.GO功能分析得到主要生物功能为对激素的反应等.KEGG富集主要相关通路为癌症的发病途径、雌激素信号通路等.CT扫描、HE染色可得壮骨止痛方能有效缓解绝经后骨质疏松症,RT-PCR显示壮骨止痛方组PTGS2mRNA表达显著升高,PPARG表达明显降低(P＜0.05).结论:壮骨止痛方通过多成分、多靶点、多通路治疗PMOP,其成分主要为豆甾醇、异补骨脂素、熊果酸、齐墩果酸,并通过代谢途径、雌激素信号通路等作用于人体INS、AKT1、PPARG、PTGS2、ESR1发挥疗效.

目的 分析二陈汤化裁方破壁饮片水溶液的化学成分及入血成分.方法 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Exactive-MS)法对比复方样品、空白血清、含药血清色谱图,分析二陈汤化裁方破壁饮片水溶液在大鼠血清中的原形及代谢产物.结果 从复方样品中共鉴定出151个化学成分,通过对照品比对,最终确定了 11个成分(柠檬酸、绿原酸、橙皮苷、茯苓酸B、熊果酸、天麻素、巴利森苷A、牡荆素、金丝桃苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rd).共鉴定出33个入血成分,其中28个为原形成分,5个为代谢产物.结论 本实验通过UHPLC-Q-Exactive-MS分析二陈汤化裁方破壁饮片的入血成分,为进一步阐明二陈汤化裁方破壁饮片的药效物质基础提供了参考.

目的 分析山茱萸炭与山茱萸中有效成分的含量变化及山茱萸炭对止血作用的影响,为阐明山茱萸炭作用机制奠定基础.方法 通过采用高效液相测定生品和炒炭后山茱萸的马钱苷、莫诺苷、熊果酸含量变化,采用苯酚-硫酸法和干酪素-磷钼钨酸法测定山茱萸多糖和没食子酸的含量,测定不同剂量的山茱萸炭对小鼠凝血时间、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原含量(FIB).结果 山茱萸炭中莫诺苷含量显著减少,马钱苷、熊果酸含量略有增加,没食子酸含量显著增加,山茱萸多糖含量基本不变.另外,中、低剂量组的山茱萸炭可以显著降低小鼠的凝血时间,可以显著降低小鼠的TT.结论 山茱萸炭可以在一定程度上促进小鼠的凝血,表现出一定炒炭止血的特点.本研究有效拓展了山茱萸的炮制方法和功效范围、发展了中药炭药的种类,具有重要的应用和理论价值.

目的 研究黄秋葵果实提取物抗阿尔茨海默病活性,并对其活性部位的化学成分进行鉴定.方法 对小鼠侧脑室注射适量Aβ1-42建立阿尔茨海默病模型,分为空白组,假手术组,模型组,多奈哌齐组,水提取物低、高剂量组,石油醚层、二氯甲烷层、乙酸乙酯层、水层低、高剂量组,每组 12 只,采用Y迷宫和Morris水迷宫进行行为学实验,ELISA法检测小鼠皮质和海马组织SOD活性和MDA水平.乙酸乙酯提取物采用硅胶、ODS、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物结构.结果 与空白组比较,模型组小鼠自发交替反应率降低(P＜0.05),逃避潜伏期延长(P＜0.05,P＜0.01),寻找平台所在象限的时间缩短(P＜0.05);与模型组比较,乙酸乙酯层各剂量组小鼠自发交替反应率升高(P＜0.05),逃避潜伏期缩短(P＜0.01),寻找平台所在象限的时间延长(P＜0.05),脑内皮质和海马组织SOD活性升高(P＜0.01),MDA水平降低(P＜0.05,P＜0.01).从中分离得到 6 个化合物,分别鉴定为香草酸(1)、N-反式阿魏酸酰酪胺(2)、N-反式对香豆酰酪胺(3)、槲皮素(4)、熊果酸(5)、β-谷甾醇(6).结论 黄秋葵果实乙酸乙酯提取物能改善Aβ1-42诱导的学习记忆功能障碍,其作用机制可能与小鼠脑内氧化应激水平的降低有关.

目的 研究大叶紫珠Callicarpa macrophylla二氯甲烷部位的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、聚酰胺柱色谱进行分离纯化,并采用波谱技术鉴定其结构.结果 从大叶紫珠的二氯甲烷部位分离出 13 个化合物,分别鉴别为 5-羟基-3,7,4'-甲氧基黄酮(1)、3,7,3',4'-甲氧基槲皮素(2)、乌发醇(3)、木犀草素(4)、5-羟基-3,7-二甲氧基-4-甲基黄酮(5)、3,7-二甲氧基槲皮素(6)、胡萝卜苷(7)、linoleic acid(8)、异海松酸(9)、2-[(4aR,6aR,6aS,6bR,10S,12aR,14bS)-10-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicen-4a-yl](10)、豆甾醇(11)、熊果酸(12)、β-谷甾醇(13).结论 化合物1、3、4、5、6、8、9、10、11、12 为首次从该植物分离得到.